小檗堿對(duì)糖尿病腎病大鼠C反應(yīng)蛋白的影響＊

楊靜 羅岷 劉昌權(quán) 劉旭平

（1.宜賓衛(wèi)生學(xué)校藥學(xué)教研室，四川 宜賓 644000；2.宜賓衛(wèi)生學(xué)校生理教研室，四川 宜賓 644000；3.宜賓衛(wèi)生學(xué)校內(nèi)科教研室，四川 宜賓 644000）

糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，D N）即糖尿病腎病腎小球硬化癥，是糖尿?。―iabetes mellitus，DM）患者常見的并發(fā)癥之一，其早期的臨床征象主要表現(xiàn)為微量白蛋白尿。病理學(xué)上表現(xiàn)為腎小球肥大，腎小球基底膜增厚，系膜基質(zhì)增寬，最后導(dǎo)致腎小球纖維化、硬化，是導(dǎo)致終末期腎衰竭（End stage renal failure，ESRD）的重要原因［1］。D N的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，至今尚未十分清楚，近年來研究顯示C反應(yīng)蛋白（C－reactive protein，CRP）表達(dá)的升高在加速Ⅱ型DM大血管病變的進(jìn)程中起重要作用［2］，因此若能篩選出有效抑制C R P表達(dá)的中藥對(duì)糖尿病腎病治療極具價(jià)值。

小檗堿（Berberine，Ber）是黃連素根莖中所含的一種主要生物堿，具有抗炎、降糖、糾正脂質(zhì)代謝紊亂等特點(diǎn)，但是否有抑制糖尿病C反應(yīng)蛋白表達(dá)尚未見報(bào)道。本研究通過研究小檗堿對(duì)糖尿病大鼠C反應(yīng)蛋白表達(dá)的影響，探討小檗堿降糖效應(yīng)是否與抑制C反應(yīng)蛋白有關(guān)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

清潔級(jí)S D大鼠，雄性，體重20 0－24 0g，由瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供（合格證號(hào)：川醫(yī)動(dòng)字24 01 11 5）。

1.1.2 樣品及試劑

小檗堿（陜西森弗生物技術(shù)公司，純度99%，黃色結(jié)晶粉末）；鏈脲佐菌素（STZ）（美國Sigma公司，批號(hào)S0130）；C反應(yīng)蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒（ADL化學(xué)公司，美國）。

1.1.3 儀器

JPS－5型手持式快速全血葡萄糖測(cè)試儀（北京怡成生物電子技術(shù)有限公司），DNM 96 2型酶標(biāo)分析儀（北京普朗新技術(shù)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 糖尿病腎病大鼠模型建立［3］

雄性SD大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ，pH 4.5，0.1%枸櫞酸緩沖液新鮮配制）55m g·kg－1造糖尿病腎病大鼠模型。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。72h后采用大鼠斷尾取血測(cè)血糖值，取尿測(cè)尿蛋白，連續(xù)測(cè)3d。以血糖水平＞16.7mm ol·L－1，尿糖強(qiáng)陽性為糖尿病建模成功。

1.2.2 動(dòng)物分組及處理

將40只建模成功雄性S D大鼠隨機(jī)分為模型組、小檗堿75、15 0、30 0m g·k g－1組、羅格列酮組，并設(shè)空白對(duì)照組，每組8只。成功造模后各組分別灌胃給予小檗堿75、150、300m g·k g－1以及4m g·k g－1羅格列酮，連續(xù)6w；模型組及空白對(duì)照組灌胃給予等體積生理鹽水，連續(xù)6w。實(shí)驗(yàn)期間自由飲水飲食，不用胰島素，于第6w末稱重，最后一次給藥后禁食12h，尾靜脈取，血測(cè)空腹血糖（Fasting blood－glucose，F(xiàn)PG）。處死大鼠，右腎置于10%中性福爾馬林液浸泡固定，常規(guī)HE染色；左腎稱重、勻漿，嚴(yán)格按照ELISA說明書操作，酶標(biāo)儀450n m檢測(cè)C反應(yīng)蛋白活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 小檗堿對(duì)大鼠體重、血糖、C反應(yīng)蛋白含量影響

與空白對(duì)照組比較，糖尿病模型組大鼠血糖及CRP含量均明顯高于空白對(duì)照組，體重明顯低于正常組（P＜0.01），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與模型組比較，小檗堿75、150、300m g·k g－1組血糖及CRP含量均明顯低于模型組，體重高于模型組（P＜0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表1。

表1 小檗堿對(duì)糖尿病腎病大鼠體重、血糖、C反應(yīng)蛋白活性影響（，n＝8）

表1 小檗堿對(duì)糖尿病腎病大鼠體重、血糖、C反應(yīng)蛋白活性影響（，n＝8）

注：與模型組比較，▲P＜0.05?；與空白組比較，＊P＜0.01

組別 體重（g）血糖（mm o l·L－1）實(shí)驗(yàn)前 造模后6w 造模后3d 造模后6w C R P活性（m g·L－1）空白對(duì)照組 22 3.9±3.3 38 1.5±22.6 6.05±0.80 6.08±1.02 27.34±14.06糖尿病腎病模型組 21 6.3±6.6＊ 20 2.3±17.5＊ 27.45±0.99＊ 29.29±0.58＊ 24 1.06±28.90＊羅格列酮組 21 4.2±15.5 23 1.6±24.9 26.15±2.35＊ 21.97±1.60 60.11±13.81 B e r 75m g·k g－1組 21 0.9±15.3 21 9.4±30.4▲ 25.25±1.99＊ 23.23±2.52▲ 75.23±15.78▲B e r 15 0m g·k g－1組 20 7.9±14.9 20 6.4±25.8▲ 24.15±2.50＊ 22.78±1.45▲ 68.72±12.98▲B e r 30 0m g·k g－1組 21 6.1±14.2 20 3.0±36.8▲ 25.02±1.95＊ 21.47±2.23▲ 64.38±11.94▲

2.2 小檗堿對(duì)腎臟病理變化影響

光鏡下可見空白對(duì)照組大鼠腎小球毛細(xì)血管形態(tài)及分布無異常，糖尿病模型組可見腎小球毛細(xì)血管充血、擴(kuò)張，腎小球明顯增大，腎小球系膜區(qū)擴(kuò)張和基膜不同程度增厚，腎小球細(xì)胞數(shù)目減少，腎小球細(xì)胞外基質(zhì)明顯增多，系膜區(qū)擴(kuò)大。小檗堿各治療組間腎小球增大不明顯，腎小球系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)輕度增生，較糖尿病模型組病變明顯減輕，見圖1。

圖1 小檗堿對(duì)糖尿病腎病腎臟病理改變影響

2.3 小檗堿對(duì)大鼠24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮影響

與模型組比較，小檗堿75、15 0、30 0m g·k g－1組24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮均明顯低于模型組（P＜0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表2。

3 討論

慢性低水平炎癥與糖尿病相關(guān)，對(duì)糖尿病未來風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)及臨床治療有效性評(píng)估均具有一定的價(jià)值。在糖尿病的微血管病變中，慢性炎癥反應(yīng)亦發(fā)揮重要的作用，CRP（C－reactive protein，CRP）是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，C反應(yīng)蛋白水平與糖尿病患者尿微量白蛋白（Microal buminuri，MAU）呈強(qiáng)正相關(guān)［4］。C R P的增加可能導(dǎo)致了糖尿病腎血管病變的發(fā)生。研究顯示C R P主要由肝細(xì)胞合成和分泌，并受多種細(xì)胞因子如白介素6、白介素l等的調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)，炎癥產(chǎn)生時(shí)，C R P增加也可促進(jìn)其他炎性因子釋放增多。這些炎性因子共同作用于腎小球，更進(jìn)一步加重腎臟損傷，而且隨著病程的延長，循環(huán)往復(fù)，尿蛋白漏出逐漸增多，腎臟損害漸進(jìn)加重，導(dǎo)致糖尿病腎病的發(fā)生［5，6］。因此，通過抑制C R P的活性可能會(huì)有效的防止和改善糖尿病腎病的發(fā)生，如能從價(jià)廉物美的傳統(tǒng)中藥中篩選出對(duì)C R P有抑制作用的藥物極具價(jià)值。

表2 蘇木水煎液對(duì)糖尿病腎病大鼠24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮影響（，n＝8）

表2 蘇木水煎液對(duì)糖尿病腎病大鼠24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮影響（，n＝8）

注：與模型組比較，▲P＜0.05；與空白組比較，＊P＜0.01。

組 別 尿素氮（mm o l·L－1）肌酐（μm o l·L－1）24h尿蛋白（g·24h－1）空白對(duì)照組6.47 6±0.74 5 37.12 2±4.17 10.01 3±0.00 8糖尿病腎病模型組 13.72 4±1.64 5＊ 77.11 1±8.13 9＊ 0.07 7±0.03 2＊羅格列酮組 7.11 2±0.75 9▲ 41.44 3±3.92 9▲ 0.03 5±0.00 7 B e r 75m g·k g－1組 9.11 7±1.00 6▲ 53.42 4±5.59 0▲ 0.05 5±0.02 8▲B e r 15 0m g·k g－1組 9.30 1±0.98 3▲ 50.25 0±5.46 4▲ 0.04 5±0.01 5▲B e r 30 0m g·k g－1組 8.47 1±0.89 4▲ 44.94 7±5.00 6▲ 0.03 8±0.01 2▲

小檗堿具有的降血糖、調(diào)血脂、抗炎等作用促使其在糖尿病患者中應(yīng)用［7］。但其降糖作用究竟是否與抑制C R P有關(guān)目前尚無實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)通過小檗堿干預(yù)糖尿病大鼠，觀察糖尿病大鼠尿蛋白，腎功以及C R P的改變，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小檗堿各劑量組明顯降低糖尿病大鼠24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮以及C R P的表達(dá)（P＜0.05），與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示小檗堿具有降低保護(hù)糖尿病腎病大鼠腎功的作用，而次作用可能與抑制C R P有關(guān)，但由于糖尿病血管病變機(jī)制復(fù)雜，至于小檗堿的腎臟保護(hù)效應(yīng)是否有其他機(jī)制和因素有關(guān)尚需進(jìn)一步研究。

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2 劉慰華，黃河清，鄧艷輝，等.黃連素對(duì)糖尿病腎損傷大鼠腎功能氧化應(yīng)激腎臟醛糖還原酶的影響［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，20 08，24（7）：95 5－95 9.

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