苯氧羧酸類除草劑的手性毛細(xì)管電泳

高葉玲，楊 燕，張 微，趙美蓉

(浙江工業(yè)大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，浙江 杭州 310032)

苯氧羧酸類除草劑一般有一個或多個手性中心，其R-(-)異構(gòu)體能有效抑制靶酶活性，阻斷雜草體內(nèi)赤霉素和生長素的形成，表現(xiàn)出相當(dāng)高的除草活性，而S-(-)異構(gòu)體則基本上無效，兩者藥效相差8～12倍[1]，因此，研究苯氧羧酸類除草劑的手性分離具有重要的現(xiàn)實意義。

目前，對手性物質(zhì)的分析方法有高效液相色譜法(HPLC)[2]、氣相色譜法(GC)[3，4]、離子色譜法[5]和超臨界流體法等。但這些方法使用的手性色譜柱和檢測器的成本較高，且樣品處理過程復(fù)雜、分析效率低、分離時間長。手性毛細(xì)管電泳具有快速、高效、分離度高、樣品用量少和成本低等優(yōu)點，適合于系列手性物質(zhì)的分離和分析。作者在此建立了膠束電動毛細(xì)管電泳分離手性苯氧羧酸類物質(zhì)的方法，對5種苯氧羧酸類除草劑的手性分離進(jìn)行了研究。

5種苯氧羧酸類除草劑的結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 苯氧羧酸類除草劑的結(jié)構(gòu)式

1 實驗

1.1 試劑與儀器

2，4，5-滴丙酸、2-(3-氯苯氧基)丙酸、2，4-滴丙酸、2-(4-氯苯氧基)丙酸、2-苯氧基丙酸，Sigma公司；γ-環(huán)糊精(γ-CD)、β-環(huán)糊精(β-CD )、 2-羥丙基-β-環(huán)糊精(2-HP-β-CD )、十二烷基硫酸鈉(SDS)、磷酸，上?；瘜W(xué)試劑公司；水為超純水。

Beckman P/ACETMMDQ型毛細(xì)管電泳系統(tǒng)，二極管陣列紫外檢測器，美國Beckman公司；未涂層熔融石英毛細(xì)管(50 cm×75 μm )，河北永年銳豐色譜器件有限公司；PHS-3C型數(shù)字酸度計，杭州東星儀器設(shè)備廠。

1.2 方法

新的毛細(xì)管依次用甲醇、H2O、0.1 mol·L-1HCl、H2O、0.1 mol·L-1NaOH和 H2O各沖洗 30 min，然后用緩沖溶液(50 mmol·L-1H3PO4+50 mmol·L-1SDS，pH值2.0)沖洗 30 min。實驗中，每兩次運行之間先用NaOH、H2O依次沖洗2 min，然后再用緩沖溶液沖洗5 min。工作電壓 20 kV(反向)；檢測波長 214 nm；進(jìn)樣方式 0.3 psi×5 s；柱溫25 ℃。

由圖4可知，在4種H3PO4濃度下，2-(3-氯苯氧基)丙酸、2，4-滴丙酸、2，4，5-滴丙酸對映體完全分離，遷移時間隨著H3PO4濃度的增大略有提前；2-苯氧基丙酸、2-(4-氯苯氧基)丙酸對映體部分分離；隨著H3PO4濃度的增大，分離度也相應(yīng)增大，在H3PO4濃度為75 mmol·L-1的緩沖溶液體系中，分離度達(dá)到最大。但是，并非H3PO4濃度越高，分離效果就越好。在高H3PO4濃度下，相同電場強(qiáng)度產(chǎn)生的電流也大，使得焦耳熱增加，從而導(dǎo)致區(qū)帶增寬，而且基線噪音也較大[8]。綜合考慮，選擇背景電解質(zhì)H3PO4濃度為75 mmol·L-1。

2 結(jié)果與討論

2.1 分離條件的優(yōu)化

在30 mmol·L-1γ-CD+100 mmol·L-1的SDS緩沖體系中加入定量的H3PO4，H3PO4濃度分別為25 mmol·L-1、50 mmol·L-1、75 mmol·L-1、100 mmol·L-1，考察H3PO4濃度對分離度的影響，結(jié)果見圖4。

環(huán)糊精種類的不同會對拆分結(jié)果有影響[6]。在pH值2.0的50 mmol·L-1H3PO4+50 mmol·L-1SDS的緩沖溶液中分別加入定量γ-CD、β-CD和 2-HP-β-CD，配制濃度為40 mmol·L-1，進(jìn)行毛細(xì)管電泳分離分析。結(jié)果顯示：在添加γ-CD作為手性選擇劑的緩沖溶液體系中，2，4，5-滴丙酸、2-(3-氯苯氧基)丙酸、2，4-滴丙酸對映體實現(xiàn)了基線分離(分離度>1)，2-(4-氯苯氧基)丙酸和2-苯氧基丙酸對映體達(dá)到了部分分離(0<分離度<1)；在添加β-CD作為手性選擇劑的緩沖溶液體系中，2，4，5-滴丙酸和2，4-滴丙酸對映體不能被分離；在添加2-HP-β-CD作為手性選擇劑的緩沖溶液體系中，只能手性分離2-(3-氯苯氧基)丙酸和2-苯氧基丙酸，其余3種均未實現(xiàn)手性分離。這可能是由于體系中存在游離的SDS離子，空腔較大的γ-CD更易允許游離的SDS分子進(jìn)入，更容易形成穩(wěn)定的膠束分離體系[7]，因而更適合苯氧羧酸類的手性分離。故選擇手性選擇劑為γ-CD。

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料以“±s”表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.1.2γ-CD濃度對分離度的影響

在50 mmol·L-1H3PO4+50 mmol·L-1SDS的緩沖溶液中加入定量的γ-CD，γ-CD濃度分別為10 mmol·L-1、20 mmol·L-1、30 mmol·L-1、40 mmol·L-1，考察手性選擇劑γ-CD濃度對分離度的影響，結(jié)果見圖2。

圖2 γ-CD濃度對分離度的影響

2.1.5 pH值對分離度的影響

2.1.3 SDS濃度對分離度的影響

在30 mmol·L-1γ-CD+50 mmol·L-1H3PO4的緩沖體系中加入定量的SDS，SDS濃度分別為50 mmol·L-1、75 mmol·L-1、100 mmol·L-1，考察SDS濃度對分離度的影響，結(jié)果見圖3。

圖3 SDS濃度對分離度的影響

由圖3可知，隨著SDS濃度的增大，2-(3-氯苯氧基)丙酸、2，4-滴丙酸、2，4，5-滴丙酸對映體分離度呈減小趨勢，出峰時間均有所提前，且分離完全。2-苯氧基丙酸在SDS濃度增加到100 mmol·L-1時，對映體才部分分離，分離度為0.47。2-(4-氯苯氧基)丙酸在SDS濃度由75 mmol·L-1增加到100 mmol·L-1時，分離度由0.45增加到0.55。綜合考慮所有樣品的分離效果，選擇SDS濃度為100 mmol·L-1。

另一幅重要的肖像畫是作家《馬克西姆·高爾基像》（圖6）。在謝洛夫眼中，高爾基既是一位革命者，也是公民權(quán)利的捍衛(wèi)者。這位英雄與謝洛夫筆下的藝術(shù)家完全不同，他外形簡單，但姿勢與神情卻堅定而果敢，其樸實的工人形象與高度的文化修養(yǎng)是并存的。這件肖像作品的表現(xiàn)力集中體現(xiàn)在深色人物與明亮背景的對比上，這種強(qiáng)烈的明暗對比既勾勒出人物的輪廓，也表現(xiàn)了人物堅毅的性格。畫面上，高爾基雙腿交錯地坐在小凳上，臉部朝向畫外的某位對話者。由于頭部與身體的轉(zhuǎn)向相反，因此這應(yīng)該是一種復(fù)雜的姿勢，觀者由此可以體會到高爾基身上那壓抑的激情和情感的振奮。可以說，這件作品充分體現(xiàn)了謝洛夫借助表情和姿勢對人物進(jìn)行“寫神”的高超技法。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察兩組患者住院天數(shù)、住院費用及術(shù)后并發(fā)癥等指標(biāo)。統(tǒng)計兩組患者對護(hù)理工作滿意度;出院前采用自制的護(hù)理工作滿意度調(diào)查表，評價兩組患者對護(hù)理工作滿意度，采取百分制，≥90分為滿意，50～89分為較滿意，＜50分為不滿意。

英軍1916年索姆河戰(zhàn)役首次使用了坦克并取得了戰(zhàn)役的勝利。1918年8月8日在亞眠一役中，456輛坦克大破德軍防線。從此，石油坦克的應(yīng)用結(jié)束了軍事防御為主的時代。1918年10月德軍最高指揮部宣布勝利已無可能，首要的理由就是坦克的誕生。其二則是協(xié)約國的汽車和卡車壓倒了德國的火車，那也是用石油作驅(qū)動的緣故。

2.1.1 環(huán)糊精種類對分離度的影響

圖4 背景電解質(zhì)濃度對分離度的影響

數(shù)據(jù)采集與處理由32 Karat Software Version 7.0完成。

由圖2可知，隨著γ-CD濃度的增大，2-(3-氯苯氧基)丙酸、2，4-滴丙酸、2，4，5-滴丙酸對映體的分離度呈增大趨勢，但同時遷移時間越來越長，從7 min延至20 min左右。相同條件下，2-苯氧基丙酸、2-(4-氯苯氧基)丙酸在40 min內(nèi)均無法實現(xiàn)手性分離。由此可見，γ-CD濃度過低或過高，均使得各物質(zhì)遷移速率發(fā)生變化，影響分離效果。綜合考慮，選擇γ-CD濃度為30 mmol·L-1。

2.1.4 背景電解質(zhì)H3PO4濃度對分離度的影響

緩沖溶液的pH值影響電位、電滲流和分析物的荷電情況， 從而影響分析物的遷移時間和分離度[9]。

綜上所述，hTERT過表達(dá)在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，刪除或阻抑hTERT功能可作為卵巢癌綜合治療的有效輔助手段之一。hTERT作為卵巢癌新的診斷和治療靶點，還有待于進(jìn)一步研究開發(fā)。

例如，《紫藤蘿瀑布》一課，可以利用多媒體技術(shù)制作兩組畫面：盛開的紫藤蘿和伶仃稀疏的紫藤蘿，再配以適當(dāng)?shù)摹睹\》作為背景音樂。在讓學(xué)生觀察紫藤蘿圖片的時候，利用音樂的起伏，結(jié)合當(dāng)時作者的心境，思考：你從圖片上看到的紫藤蘿是什么樣子的？有什么特點？作者對此有什么感悟？

維持其它電泳條件不變，調(diào)節(jié)緩沖溶液pH值為2.0.3.0、3.5、4.0，考察pH值對分離度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著緩沖溶液pH值的增大，5種苯氧羧酸類除草劑中只有2-(3-氯苯氧基)丙酸和2，4-滴丙酸對映體能完全分離，其余3個均無法實現(xiàn)分離；且隨著pH值的增大，2-(3-氯苯氧基)丙酸和2，4，5-滴丙酸出峰順序發(fā)生顛倒，同時峰面積逐漸下降，遷移時間延長，不利于快速分離[10]。此外離子強(qiáng)度過大，使電流增大，產(chǎn)生焦耳熱影響檢出限。綜合考慮，選擇緩沖溶液pH值為2.0。

2.2 條件優(yōu)化后的分離效果

綜合以上結(jié)果，確定最佳緩沖體系為：pH=2.0，SDS濃度為100 mmol·L-1，背景電解質(zhì)H3PO4溶液濃度為75 mmol·L-1，手性選擇劑γ-CD濃度為30 mmol·L-1。在該最佳緩沖體系下，可達(dá)到將2，4-滴丙酸、2，4，5-滴丙酸、2-(3-氯苯氧基)丙酸三種苯氧羧酸類除草劑對映體完全分離，2-(4-氯苯氧基)丙酸、2-苯氧基丙酸對映體部分分離的最佳效果(圖5)。分離度分別為3.42、8.27、2.83、0.89、0.50。

1～5：2-(3-氯苯氧基)丙酸；2，4-滴丙酸；2，4，5-滴丙酸；2-苯氧基丙酸；2-(4-氯苯氧基)丙酸

3 結(jié)論

以30 mmol·L-1的γ-CD作為手性選擇劑，在SDS濃度為100 mmol·L-1、背景電解質(zhì)H3PO4溶液濃度為75 mmol·L-1的緩沖溶液(pH=2.0)中，2，4-滴丙酸、2，4，5-滴丙酸、2-(3-氯苯氧基)丙酸對映體完全分離，2-(4-氯苯氧基)丙酸、2-苯氧基丙酸對映體部分分離，分離度分別為3.42、8.27、2.83、0.89、0.50。為手性苯氧羧酸類物質(zhì)提供了一種簡便、快速而有效的分離方法。

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