單核細(xì)胞趨化蛋白-1與對(duì)乙酰氨基酚中毒肝損害

黃志剛 熊煥宏 黃曉春

單核細(xì)胞趨化蛋白-1與對(duì)乙酰氨基酚中毒肝損害

黃志剛 熊煥宏 黃曉春

目的MCP-1、CCR2在對(duì)乙酰氨基酚中毒急性肝損傷過程中的變化并探討其可能的作用機(jī)制。方法高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定血漿中對(duì)乙酰氨基酚濃度； ELISA方法動(dòng)態(tài)檢測(cè)血清中MCP-1、CCR2的濃度。結(jié)果16例對(duì)乙酰氨基酚血藥濃度達(dá)到中毒濃度，4小時(shí)后MCP-1、CCR2在血液中的表達(dá)明顯增加，12小時(shí)后均有所下降，但變化不明顯。結(jié)論高效液相色譜（HPLC）法能早期診斷乙酰氨基酚中毒；MCP-1、CCR2作為一對(duì)重要的炎癥介質(zhì)，可能參與了對(duì)乙酰氨基酚中毒急性肝損傷過程。

對(duì)乙酰氨基酚中毒；肝損害；單核細(xì)胞趨化蛋白-1；趨化性細(xì)胞因子受體2

對(duì)乙酰 氨基酚(醋酸酚)通常稱為撲熱息痛(acetaminophen，AAP)，是臨床上應(yīng)用最為廣泛的解熱鎮(zhèn)痛藥物。在正常治療劑量時(shí)，對(duì)乙酰氨基酚耐受性好，副作用較少。過量使用則可導(dǎo)致嚴(yán)重的肝、腎功能損害乃至死亡。對(duì)乙酰氨基酚肝毒性在歐美國(guó)家已得到廣泛關(guān)注，但在我國(guó)尚未引起足夠的重視。報(bào)道顯示，25%爆發(fā)性肝衰竭和50%肝臟功能異?；颊吲c用藥有關(guān)，其中對(duì)乙酰氨基酚是引起肝衰竭并需要肝移植的首要藥物[1]。目前對(duì)乙酰氨基酚中毒致肝損傷的病理機(jī)制尚不明確。相對(duì)一致的觀點(diǎn)認(rèn)為：對(duì)乙酰氨基酚肝毒性是從其肝臟代謝生成毒性中間體NAPQI開始的，進(jìn)而引起一系列細(xì)胞毒性反應(yīng)，具體過程有待進(jìn)一步闡明【4】。

1 材料和方法：

1.1病例收集

25例，男性10例，女性15例，年齡17～56歲，均為懷疑對(duì)乙酰氨基酚急性中毒患者或自述中毒患者。

1.2標(biāo)本取樣

自訴口服對(duì)乙酰氨基酚4小時(shí)、12小時(shí)后采血（如服藥時(shí)間不清即刻取樣）保存。

1.3試劑與標(biāo)準(zhǔn)品

MCP-1、CCR2試劑盒（RB公司），對(duì)乙酰氨基酚（中國(guó)藥品生物制品檢定所）。

1.4儀器和材料

全自動(dòng)生化分析儀，Waters系列高教液相色譜儀。

1.5方法

高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定血漿中對(duì)乙酰氨基酚濃度：對(duì)照溶液：儲(chǔ)備液為10 mg·ml-1甲醇溶液。工作溶液:由甲醇溶液逐級(jí)稀釋為 0.01～5 mg·ml-1。溶液，4℃ 冰箱存放備用。色譜條件采用Nova-PakC1b柱(4um，3.9 mm，150mm)和Nova-Pak C18預(yù)柱，柱溫：25℃。流動(dòng)相為甲醇-水(30：30)，流速為0.8 m L·min-1，紫外渡長(zhǎng)為254nm。血漿樣品：制備取靜脈血3～4 m1，置含肝素抗凝劑的離心管中。離心分離5 min(3000r·min-1)，上清液為待測(cè)血漿。取1ml上述血漿，加飽和硫酸鋅溶液1ml沉淀蛋白，加人乙醚 5 ml，渦漩混臺(tái) 1min，離心 20 min(3000r·min-1)。精密吸取乙醚液3.0 ml于50℃氮?dú)饬鞔蹈?，冷至室溫。以蒸餾水500ul溶解殘?jiān)?0 ul進(jìn)樣。以血藥濃度＞150ug/ml作為對(duì)乙酰氨基酚的中毒標(biāo)準(zhǔn)。用全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶。按試劑盒說明書用 ELISA方法檢測(cè)血清中MCP-1、CCR2的表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)乙酰氨基酚急性中毒患者血藥濃度（μ g.ml一-1）:152±59。

2.2 血液檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(μ/L) ALT1:107±40，ALT2:92±33 組間比較P=0.062。

2.3 MCP-1、CCR2在血液中的表達(dá)(ng/L)。

MCP-1 1:161±61，MCP-1 2:131±51，組間比較P=0.021（MCP-1 1為4小時(shí)采血、MCP-1 2為12小時(shí)采血）

CCR2 1：144±55 CCR2 2：91±28，組間比較P=0.038（CCR2 1與CCR2 2的說明同上）。

病例對(duì)乙酰氨基酚血藥濃度服藥時(shí)間(h)血液檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)1u/l血液檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)2 u/l MCP-1在血液中的表達(dá)1 MCP-1在血液中的表達(dá)2 CCR2在血液中的表達(dá)1 CCR2在血液中的表達(dá)2 1 213 4 148 134 221 171 198 114 2 126 14 112 102 103 98 106 96 3 178 時(shí)間不明 123 113 190 154 186 112 4 159 9 119 101 160 121 155 85 5 236 3 146 123 251 198 214 133 6 198 5 135 119 214 182 203 114 7 127 時(shí)間不明 104 93 145 112 132 68 8 181 6 115 99 195 160 178 102 9 169 時(shí)間不明 158 118 178 151 165 99 10 148 12 99 98 135 104 124 64 11 90 時(shí)間不明 41 36 89 64 86 67 12 184 8 132 117 186 160 171 92 13 155 時(shí)間不明 108 95 161 127 156 89 14 163 10 118 110 173 148 154 97 15 78 時(shí)間不明 42 38 85 56 54 52 16 205 6 131 112 231 188 188 105 17 232 5 145 120 254 186 219 167 18 60 20 45 40 70 55 57 59 19 0 6 38 37 53 50 55 54 20 188 時(shí)間不明 134 116 198 182 175 98 21 191 6 147 114 197 173 167 96 22 65 18 44 38 56 54 53 51 23 171 時(shí)間不明 112 96 182 163 176 105 24 85 5 43 39 78 52 55 50 25 186 8 136 99 199 178 163 102

3 討論

對(duì)乙酰氨基酚是一種臨床上常用的解熱鎮(zhèn)痛藥物，已經(jīng)逐漸取代了阿司匹林的解熱鎮(zhèn)痛作用。主要代謝部位為肝臟。自殺或誤服等大劑量服用時(shí)，有嚴(yán)重的肝損傷，甚至導(dǎo)致肝壞死。目前對(duì)乙酰氨基酚中毒致肝損傷的病理機(jī)制尚不明確。一般認(rèn)為，對(duì)乙酰氨基酚所引起的原發(fā)性肝細(xì)胞毒性：在藥物的生物轉(zhuǎn)化過程中產(chǎn)生較大的自由基代謝產(chǎn)物N-乙酰-對(duì)苯醌亞氨（NAPQI），進(jìn)而導(dǎo)致肝損害的發(fā)生[5,6]；肝細(xì)胞線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激和細(xì)胞因子等在對(duì)乙酰氨基酚肝損害的發(fā)生及發(fā)展過程中也起重要作用。其中細(xì)胞因子在對(duì)乙酰氨基酚肝損害中的作用取決于親炎細(xì)胞因子（pro-inflammatory cytokine）和抗炎細(xì)胞因子（anti-inflammatory cytokine）之間的平衡。趨化性細(xì)胞因子(chemokine)又稱趨化因子或趨化蛋白，專指一組小分子量8～10KD的細(xì)胞因子，它們參與白細(xì)胞特別是吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的游走與活化，在炎癥反應(yīng)中起中心作用；其中單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1 ,MCP-1）是主要作用于單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的趨化因子，可由多種細(xì)胞分泌，包括成骨細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、單核細(xì)胞、表皮細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞[7-12]。趨化性細(xì)胞因子受體2（CC chemokine receptor 2，CCR2）是MCP-1的生理性受體，二者結(jié)合后不僅具有吸附單核細(xì)胞移動(dòng)的功能，而且對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的表達(dá)亦具有調(diào)節(jié)作用。Dambach DM 等發(fā)現(xiàn) MCP-1、CCR2在對(duì)乙酰氨基酚中毒小鼠的肝臟組織中的表達(dá)明顯升高 ，Hogaboam CM等發(fā)現(xiàn)敲除CCR2基因后對(duì)乙酰氨基酚中毒小鼠的肝臟損傷明顯減輕[13-15]。本研究采用ELISA方法檢測(cè)血清中MCP-1、CCR2的動(dòng)態(tài)表達(dá)發(fā)現(xiàn)：口服對(duì)乙酰氨基酚4小時(shí)后MCP-1、CCR2在血液中的表達(dá)明顯增加，12小時(shí)后均有所下降，但變化不明顯（P＞0.05），表明對(duì)乙酰氨基酚在體內(nèi)隨時(shí)間發(fā)生分布代謝出現(xiàn)血藥濃度降低，由于 MCP-1對(duì)單核/巨噬細(xì)胞的強(qiáng)烈趨化作用，趨化的單核/巨噬細(xì)胞再表達(dá) MCP-1能夠再趨化和激活更多的單核/巨噬細(xì)胞至炎癥損傷部位；推測(cè)MCP-1、 CCR2可能參與了對(duì)乙酰氨基酚肝損害的病理過程。

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