ATP生物熒光檢測技術在特定快速微生物檢測中的新應用

海凈納

Micro-Snap是一項采用改良ATP生物熒光反應的快速檢測系統，能夠用來檢測不同種類樣本中的特定細菌。這種新的生物熒光拭子（MicroSnap）通過配套使用一種新的低成本高靈敏光度計（Hygiena公司Ensure多功能監(jiān)控系統），可檢測出各種類型樣品中的低水平特定細菌，最長7小時就能得到結果。這項具有諸多優(yōu)勢的實用技術首批推出的是大腸菌群、腸桿菌和大腸桿菌檢測拭子。該技術后續(xù)將會用于更多其他指示菌和病原菌的快速檢測。

一、背景

ATP生物熒光技術在不同行業(yè)的成功應用已有30年歷史。它作為一種非特異性生物量監(jiān)控系統已經成功用于各類食品、化妝品和醫(yī)藥品行業(yè)，而其中應用最廣泛的就是衛(wèi)生檢測。

ATP生物熒光法的最主要應用就是通過對非特異性有機殘留物的測定來對清潔和衛(wèi)生狀況做出快速、直接和客觀的評價。ATP檢測在醫(yī)療衛(wèi)生機構中感染的控制方面的應用新近得到了英國健康保護署（Health Protection Agency）的推薦。它也被執(zhí)法和稽查審計人員作為一種干預工具來評價衛(wèi)生狀況和查明問題所在區(qū)域。

二、技術

Micro-Snap技術將新的試劑配方和ATP生物熒光反應與特異性酶底物偶聯在一起，從而在保留高靈敏度的同時，第一次將ATP檢測用于特定細菌測定。特定細菌所具有的酶（如β-半乳糖苷酶和β-葡糖醛酸酶）在催化這些底物的過程中發(fā)出光子，這些光子能被一種新的高靈敏手持式光度計（Ensure多功能監(jiān)控系統）檢測到。

Micro-Snap檢測拭子獨特的配方和包裝使得其操作簡便易用，既可以在實驗室使用，也可以在偏遠地區(qū)或現場使用。

Micro-Snap拭子反應過程：

ATP+特異性底物+熒光素酶—特異性診斷酶→光

三、性能

與傳統方法相比，Micro-Snap生物熒光檢測技術具有高特異性和靈敏度（見表1）。樣本中細菌數量越高檢測時間越短，低數量的細菌（1～5個菌）檢測時間也只需7小時左右（見表2）。

表1 Micro-Snap的靈敏度和特異性

表2 Micro-Snap的檢測限

Micro-Snap檢測拭子的技術原理使其能夠不會受到來自樣品ATP的本底干擾。同時早期和高靈敏的檢測也消除了傳統微生物培養(yǎng)中因其他競爭性微生物生長所導致的干擾問題。

圖1 綠葉沙拉中大腸桿菌的檢測

圖1顯示，在>10，000個自然菌叢存在的條件下，將5個大腸桿菌接種至沙拉懸液中，不到7個小時即可檢出。高接種量的樣本檢測時間更短。

四、應用

Micro-Snap腸桿菌、大腸菌群和大腸桿菌快速檢測拭子可以用于以下方面：

（1）評價清潔度的表面衛(wèi)生檢測，包括工業(yè)加工過程和醫(yī)療衛(wèi)生機構有無受到糞便污染；

（2）質量和安全檢測，包括工業(yè)加工中的原材料或成品、工藝水、飲用水等；

（3）快速確認平板上生長的相關菌落（檢測時間2分鐘）。

五、總結

Micro-Snap生物熒光拭子能在7小時左右檢測出低水平（1～5CFU）的特定細菌污染，而大多數傳統微生物檢測方法或替代方法則需要至少18～24小時方能給出結果。Micro-Snap系統操作簡單易用，配套Ensure多功能監(jiān)控系統可以在同一個工作日內給出檢測結果，從而使用戶能及時得到有價值的信息。