禽巴氏桿菌病疫苗研究進(jìn)展

羅青平，楊峻，溫國元，張蓉蓉，王紅琳，邵華斌

摘要：綜述了國內(nèi)外禽巴氏桿菌病疫苗的研究現(xiàn)狀和趨勢，對禽巴氏桿菌病滅活疫苗、弱毒活疫苗、亞單位疫苗、免疫復(fù)合物疫苗、基因疫苗等的研究進(jìn)展進(jìn)行了概述，重點(diǎn)闡述了禽巴氏桿菌病亞單位疫苗和基因工程疫苗等新型疫苗的研究進(jìn)展，為進(jìn)一步研究和開發(fā)新的禽巴氏桿菌病疫苗，從而有效控制禽巴氏桿菌病提供了一定的參考。

關(guān)鍵詞：禽巴氏桿菌?。欢鄽⑿园褪蠗U菌；疫苗；免疫

中圖分類號：S855.1+2文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：1007-273X（2012）12-0014-03

禽巴氏桿菌病又名禽霍亂，是由多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida，Pm）引起的主要侵害雞、火雞、鴨、鵝等禽類的一種接觸性敗血性傳染病，呈世界性分布，是嚴(yán)重影響?zhàn)B禽業(yè)發(fā)展的主要細(xì)菌病之一。該病急性病例主要表現(xiàn)為突然發(fā)病，黏膜、漿膜和臟器出血，脾臟和肝臟腫大并有灰白色壞死點(diǎn)；慢性病例多在肝臟等局部發(fā)生壞死性病灶或炎性病灶。感染家禽采食量下降，生長減緩或產(chǎn)蛋率急劇下降，死亡率通常是20%～30%或更高；感染后存活的家禽生產(chǎn)性能下降，而且存在帶毒隱性傳播的風(fēng)險(xiǎn)，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

目前預(yù)防控制禽巴氏桿菌病主要以抗生素為主，僅少數(shù)雞場使用疫苗。大量抗生素的預(yù)防和治療容易產(chǎn)生抗藥性，且應(yīng)用時(shí)間較長時(shí)對禽體尤其是泌尿系統(tǒng)產(chǎn)生明顯毒副作用。疫苗免疫預(yù)防是防控該病的主要趨勢，目前研究或使用的主要有以下幾種疫苗：滅活疫苗、弱毒活疫苗、亞單位疫苗、免疫復(fù)合物疫苗及基因疫苗。

1滅活疫苗

常規(guī)滅活疫苗采用禽多殺性巴氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)株或從疫區(qū)分離鑒定的菌株中篩選出毒力強(qiáng)、免疫原性好的流行菌株來制備全菌滅活疫苗，其安全性較好，不存在毒力返強(qiáng)等風(fēng)險(xiǎn)，特別是利用流行菌株制備的滅活疫苗對流行區(qū)域進(jìn)行針對性地免疫預(yù)防，具有良好的免疫效果。

滅活疫苗分2種：一種是在體外進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，收獲菌液滅活制備常規(guī)滅活疫苗。由于是禽多殺性巴氏桿菌在體外的培養(yǎng)基中培養(yǎng)不能很好地產(chǎn)生交叉保護(hù)因子，所以這種滅活疫苗只能對相同血清型菌株感染有免疫效果。另一種是采用禽多殺性巴氏桿菌接種雞胚或感染青年雞，收獲雞胚組織或雞臟器組織制備組織滅活苗，免疫效果顯著高于人工培養(yǎng)基培養(yǎng)制備的常規(guī)滅活苗。其突出優(yōu)點(diǎn)是對雞安全，效力較高，免疫雞總保護(hù)率為76.9%，免疫期達(dá) 4個(gè)月[1]。戴鼎震等[2]以禽多殺性巴氏桿菌C48-1強(qiáng)毒株接種雞胚，收集死胚制備滅活油乳苗，免疫雞和鴨4周后用異源血清型禽多殺性巴氏桿菌P1059菌株攻擊，發(fā)現(xiàn)組織滅活油乳苗對免疫動物可提供90%以上的保護(hù)率。該種方法制備的滅活疫苗免疫效果好、免疫譜廣。Galdiero等[3]發(fā)現(xiàn)活體培養(yǎng)的Pm具交叉保護(hù)特性，在細(xì)胞壁上存在一種交叉保護(hù)因子，該因子的化學(xué)成分為蛋白質(zhì)，能抵抗異源血清型Pm對禽體的攻擊。

2弱毒活疫苗

禽巴氏桿菌病弱毒疫苗是利用篩選自然弱毒株、人工培養(yǎng)致弱菌株研制而成。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，人們從分子水平進(jìn)行細(xì)菌部分基因改造，人工缺失某些毒力因子部分片段，使其毒力減弱，構(gòu)建弱毒活疫苗候選菌株，這是細(xì)菌弱毒活疫苗研究的新方向。王文科等[4]、孫繼強(qiáng)等[5]、劉學(xué)賢等[6]分別從臨床分離菌株篩選出了禽多殺性巴氏桿菌弱毒株，左婉順等[7]通過物理誘變方法致弱獲得了禽多殺性巴氏桿菌B26-T1200弱毒菌株，分別以各自的弱毒株制備弱毒活疫苗，并進(jìn)行安全性試驗(yàn)、免疫效力試驗(yàn)、交叉保護(hù)性試驗(yàn)、保存期試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)弱毒活疫苗具有免疫力產(chǎn)生快，免疫原性好，近期平均保護(hù)率較高，免疫譜較廣以及生產(chǎn)成本低等多方面優(yōu)點(diǎn)。雖然弱毒疫苗具有一定的交叉保護(hù)性，但其安全性問題仍不容忽視[4]。

3亞單位疫苗

莢膜、外膜蛋白、脂多糖及交叉保護(hù)性抗原因子等是禽多殺性巴氏桿菌重要的毒力因子，也是主要的免疫原，以這些毒力因子作為抗原研制成亞單位疫苗是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。

莢膜是Pm的一種保護(hù)性抗原，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生一定的保護(hù)性免疫反應(yīng)。Pm的強(qiáng)毒菌株都有莢膜，弱毒菌株一般都無莢膜。利用莢膜制備的亞單位疫苗既保持了病原菌株的免疫原性，又不存在強(qiáng)毒菌株的安全隱患，是較好的疫苗候選抗原。吳彤等[8]提取Pm的莢膜物質(zhì)進(jìn)行免疫原性試驗(yàn)，證實(shí)Pm的莢膜物質(zhì)具有良好的抗原性，并研制出來禽巴氏桿菌病莢膜多糖菌苗。步恒富等[9]證實(shí)莢膜中含有保護(hù)性抗原蛋白成分P1。

外膜蛋白是禽多殺性巴氏桿菌重要的免疫保護(hù)性抗原。Lee等[10]發(fā)現(xiàn)以O(shè)mpH免疫小鼠后可抵抗Pm強(qiáng)毒的攻擊。曹素芳等[11，12]通過原核表達(dá)強(qiáng)毒株的C48-1外膜蛋白OmpH，制成油乳劑亞單位疫苗，免疫雞可誘導(dǎo)雞體產(chǎn)生特異性抗體，能抵抗強(qiáng)毒菌株C48-1的致死性攻擊，免疫保護(hù)效果優(yōu)于禽多殺性巴氏桿菌病弱毒活疫苗。Sthitmatee等[13]利用表達(dá)性巴氏桿菌P-1059強(qiáng)毒株外膜蛋白Cp39制成亞單位疫苗，免疫雞能抵抗強(qiáng)毒菌株多殺性巴氏桿菌P-1059（A：3）攻擊，保護(hù)率達(dá)60%～100%，還可以抵抗X-73（A：1）強(qiáng)毒株的攻擊。Luo等[14]表達(dá)及純化了禽多殺性巴氏桿菌X-73 OmpH蛋白，并用于免疫保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果表明外膜蛋白H只對同型多殺性巴氏桿菌有保護(hù)作用。Boyce等[15]對不同血清型多殺性巴氏桿菌莢膜的生物合成、基因結(jié)構(gòu)及其功能進(jìn)行了分子水平的研究，結(jié)果表明不同血清型多殺性巴氏桿菌的莢膜與其致病性及免疫保護(hù)性相關(guān)。Tatum等[16]研究表明，利用外膜蛋白FhaB制備的亞單位疫苗免疫火雞，能產(chǎn)生較高的免疫保護(hù)。

脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）是革蘭氏陰性細(xì)菌致病物質(zhì)內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ)，能夠誘發(fā)體液免疫，因此被認(rèn)為是一種保護(hù)性的抗原。研究表明從血清型為A的菌株中分離到的LPS制備的單克隆抗體具有調(diào)理小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力的作用，強(qiáng)毒攻擊后可為試驗(yàn)動物提供部分保護(hù)力。崔衛(wèi)濤等[17]原核表達(dá)禽多殺性巴氏桿菌脂蛋白plpE免疫小鼠，第2次免疫2周后，用菌株攻毒即獲得了100%保護(hù)，表明該蛋白具有良好的免疫原性。

用體外培養(yǎng)制備的滅活苗免疫時(shí)，對異種血清型菌株的攻擊不能產(chǎn)生有效的保護(hù)作用，而禽霍亂康復(fù)禽和接種禽霍亂弱毒苗的家禽能夠獲得對異型菌株攻擊的保護(hù)力，表明Pm在體內(nèi)表達(dá)的某些抗原在交叉免疫保護(hù)中起著重要作用[18]，把這些能夠誘導(dǎo)交叉保護(hù)作用的抗原稱為交叉保護(hù)因子（CPF）。通過對Pm交叉保護(hù)因子的免疫原性及保護(hù)性研究，使得開發(fā)Pm外膜蛋白疫苗成為可能。

4免疫復(fù)合物疫苗

免疫復(fù)合物疫苗又稱抗原抗體復(fù)合物疫苗、治療性疫苗，是指由特異性高免血清或抗體按照適當(dāng)比例與相應(yīng)抗原混合而成的疫苗，兼有治療作用。此種疫苗不但能抵抗病原微生物引起的持續(xù)性感染，而且還能突破母源抗體干擾，是可以在孵化期內(nèi)接種的比較安全的疫苗，其安全性好（可用于胚胎免疫和強(qiáng)毒株制備疫苗），免疫保護(hù)率高，免疫效果好。崔衛(wèi)濤等[17]用大腸桿菌表達(dá)的禽多殺性巴氏桿菌重組蛋白plpE作為抗原，與用該蛋白做抗原免疫雞制得的血清配制成不同比例的免疫復(fù)合物免疫白羽肉雞，5周后用禽多殺性巴氏桿菌C48-1株進(jìn)行強(qiáng)毒攻擊，試驗(yàn)結(jié)果表明免疫后所獲得的抗體水平和攻毒保護(hù)率較高，近期保護(hù)率可達(dá)90%。

5基因疫苗

基因疫苗又稱核酸疫苗或DNA疫苗，被稱為繼滅活疫苗和弱毒疫苗、亞單位疫苗之后的“第三代疫苗”，具有廣闊的發(fā)展前景。將一種抗原基因重組到表達(dá)載體，直接或經(jīng)包裝注入動物體內(nèi)表達(dá)出相應(yīng)抗原，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。宮強(qiáng)等[19]成功構(gòu)建了禽多殺性巴氏桿菌OmpH DNA疫苗，該疫苗可誘導(dǎo)免疫小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫及較好的保護(hù)效果。

6小結(jié)

該研究綜述了傳統(tǒng)禽巴氏桿菌病疫苗的研究進(jìn)展。從禽巴氏桿菌病的防控趨勢來看，人們對食品安全越來越重視，禽產(chǎn)品藥物殘留問題越來越受到關(guān)注，抗生素的使用將會受到嚴(yán)格的限制。疫苗及環(huán)境控制將成為防控禽巴氏桿菌病的關(guān)鍵技術(shù)，尤其是安全、免疫效率高、免疫譜廣的亞單位疫苗和基因工程疫苗等新型疫苗研究與開發(fā)面對當(dāng)前禽巴氏桿菌病的防制具有重要意義。每個(gè)禽場應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍芯甑奶攸c(diǎn)，選擇抗原匹配性好的新型疫苗，因地制宜科學(xué)制訂免疫程序，結(jié)合環(huán)境控制等生物安全技術(shù)，制定禽巴氏桿菌病的綜合防控措施。

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