薰衣草離體培養(yǎng)技術(shù)研究

摘要：以薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）帶芽莖段或頂芽為外植體，探討不同激素種類(lèi)與水平等對(duì)其愈傷誘導(dǎo)、不定芽增殖與不定根形成的影響，并篩選了薰衣草試管苗過(guò)渡移栽的適宜基質(zhì)。結(jié)果表明薰衣草離體培養(yǎng)適宜的培養(yǎng)基分別為，不定芽啟動(dòng)培養(yǎng)基，ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；繼代增殖培養(yǎng)基，ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；生根培養(yǎng)基，Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ或Ｗｈｉｔｅ＋ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ。以等體積的泥炭與珍珠巖混合后作為基質(zhì)馴苗，幼苗成活率可達(dá)９６．９％。

關(guān)鍵詞：薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）；離體培養(yǎng)；培養(yǎng)基

中圖分類(lèi)號(hào)：Ｓ５７３＋．９；Ｑ９４５．５１文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）03－0623-03

Ｓｔｕｄy ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ

ＳＵ Ｃｈｅｎ

（Ｘｉａｎｇｆａｎ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｘｉａｎｇｙａｎｇ ４４１０２１，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｓｔｅｍ ｏｒ ｔｉｐ ｂｕｄ ｏｆ Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ ａｓ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｈｏｒｍｏｎｅ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ， ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ， ａｎｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｗere ｓｔｕｄｉｅｄ； Aｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｇｒｏｕｎｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌ． ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ ｓｅｅｄｌｉｎｇ was screened out． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅｔｔｅｒ ｂｅ ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ． ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ ｗａｓ ｇｏｏｄ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ． Ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ＋ ｓｕｃｒｏｓｅ ２０ ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ ｏｒ Ｗｈｉｔｅ＋ ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ＋ ｓｕｃｒｏｓｅ ２０ ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｕｓｉｎｇ ｍｉｘｅｄ ｐｅａｔ ａｎｄ ｖｅｒｍｉｃｕｌｉｔｅ ｗｉｔｈ ｅｑｕａｌ ｖｏｌｕｍｅ ａｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｎｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｗａｓ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒｙ ｔｏ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ａｓ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ ９６．９％

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ； ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｔｉｖａｔｉｏｎ； ｍｅｄｉｕｍ

薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）為唇形科薰衣草屬多年生植物，用途廣泛，其干燥花在醫(yī)藥上可作為鎮(zhèn)靜、驅(qū)風(fēng)、利尿、興奮、強(qiáng)壯藥，提取的精油可作為高級(jí)香水、香皂、洗滌用品的香料，近年來(lái)作為園林觀賞植物受到廣泛關(guān)注，極具開(kāi)發(fā)利用前景［１－３］。但我國(guó)栽培薰衣草品種主要依靠從國(guó)外引種，且種子萌芽率低，給薰衣草生產(chǎn)快速發(fā)展帶來(lái)困難。目前薰衣草離體培養(yǎng)與植株再生技術(shù)的研究已有少量報(bào)道［４－８］，本試驗(yàn)以法國(guó)選育的薰衣草品種為材料，在已有的薰衣草離體培養(yǎng)技術(shù)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討建立薰衣草植株再生體系進(jìn)行無(wú)性快繁的技術(shù)，為實(shí)現(xiàn)薰衣草優(yōu)良品種種苗規(guī)模化育苗奠定技術(shù)基礎(chǔ)。

１材料與方法

１．１材料

薰衣草種子為法國(guó)進(jìn)口，種植于襄樊職業(yè)技術(shù)學(xué)院試驗(yàn)基地，于２００９年４月從薰衣草母株上采取生長(zhǎng)健壯的帶芽莖段作為外植體。

１．２方法

１．２．１外植體表面滅菌將采取的帶芽莖段帶回實(shí)驗(yàn)室，去葉并剪切成３～４ ｃｍ長(zhǎng)的莖段，用飽和洗滌液浸泡５～１０ ｍｉｎ，流水沖洗２０～３０ ｍｉｎ，在超凈工作臺(tái)上用７５％的乙醇浸泡３０ ｓ，再用０．１％的ＨｇＣｌ２浸泡６～７ ｍｉｎ，最后用無(wú)菌水沖洗３～４次，每次１～２ ｍｉｎ，用無(wú)菌紙吸干水分，以備接種。

１．２．２啟動(dòng)培養(yǎng)取已表面滅菌的材料，切割成１～２ ｃｍ長(zhǎng)的帶１芽莖段，接種于啟動(dòng)培養(yǎng)基上，以獲得無(wú)菌材料，３５ ｄ后統(tǒng)計(jì)萌芽率。啟動(dòng)培養(yǎng)基以ＭＳ為基本培養(yǎng)基，添加不同水平的ＢＡ（０．１、０．５、１．０、２．０ ｍｇ／Ｌ）。

１．２．３繼代增殖培養(yǎng)啟動(dòng)培養(yǎng)中獲得的無(wú)菌材料切成長(zhǎng)約２ ｃｍ的帶１芽莖段，接種于增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基以ＭＳ為基本培養(yǎng)基，添加不同水平的ＢＡ（０．１、０．５、１．０、２．０、３．０ ｍｇ／Ｌ）和不同水平的ＩＢＡ（０．１０、０．２５、０．５０ ｍｇ／Ｌ）組合，共１５個(gè)處理。３０ ｄ后統(tǒng)計(jì)增殖率，以篩選適宜的增殖培養(yǎng)基。

１．２．４生根培養(yǎng)將叢芽分割成２～３ ｃｍ高帶３～４葉的單芽，接種于誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基以Ｗｈｉｔｅ為基本培養(yǎng)基，添加不同水平的ＩＢＡ（０．１、０．４、０．８ ｍｇ／Ｌ）或不同的水平ＮＡＡ（０．１、０．４、０．８ ｍｇ／Ｌ），并以Ｗｈｉｔｅ為對(duì)照，共７個(gè)處理。２５ ｄ后統(tǒng)計(jì)生根率，以篩選適宜的生根培養(yǎng)基。

以上啟動(dòng)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基中添加蔗糖３０ ｇ／Ｌ，生根培養(yǎng)基中添加蔗糖２０ ｇ／Ｌ，3種培養(yǎng)基均添加瓊脂６．５ ｇ／Ｌ、ｐＨ為５．８～６．２；高溫高壓濕熱滅菌２０ ｍｉｎ。培養(yǎng)條件均為：光照強(qiáng)度１ ５００～２ ０００ ｌｘ，溫度（２３±１）℃，光照時(shí)間１３ ｈ／ｄ。

１．２．５試管苗過(guò)渡移栽當(dāng)試管苗不定根長(zhǎng)０．８～１．０ ｃｍ，苗高３～４ ｃｍ時(shí)，從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈基部培養(yǎng)基，用６００～８００倍多菌靈稀釋液浸泡基部２～３ ｍｉｎ（藥?。┖?，種植于不同基質(zhì)中進(jìn)行過(guò)渡移栽，同時(shí)采取適度降溫、遮光、增濕等技術(shù)措施，以提高試管苗過(guò)渡移栽成活率。過(guò)渡移栽基質(zhì)設(shè)泥炭、泥炭與珍珠巖等體積混合、蛭石、珍珠巖等４個(gè)處理，２５ ｄ后統(tǒng)計(jì)成活率。

２結(jié)果與分析

２．１培養(yǎng)基中ＢＡ濃度對(duì)薰衣草愈傷與腋芽萌動(dòng)的影響

帶芽莖段接種于啟動(dòng)培養(yǎng)基上，５～７ ｄ時(shí)腋芽始萌發(fā)，３０～３５ ｄ時(shí)部分形成叢生芽。試驗(yàn)結(jié)果（表１）表明，腋芽萌發(fā)率有隨啟動(dòng)培養(yǎng)基中ＢＡ濃度的提高而升高的趨勢(shì)。在ＢＡ濃度為２．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)，腋芽萌發(fā)率最高，不定芽數(shù)量多；在ＢＡ濃度較低時(shí)，不定芽數(shù)量少，但芽健壯、長(zhǎng)勢(shì)旺，綜合兩方面因素，薰衣草啟動(dòng)培養(yǎng)以ＭＳ培養(yǎng)基添加ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ的效果最好。

２．２激素種類(lèi)與水平對(duì)薰衣草不定芽增殖的影響

帶芽莖段接種于繼代增殖培養(yǎng)基上，３～５ ｄ后芽陸續(xù)萌發(fā)，２５～３５ ｄ時(shí)再次形成不定芽叢。試驗(yàn)結(jié)果（表２）表明，繼代增殖培養(yǎng)基中添加的ＢＡ與ＩＢＡ水平不同，芽的增殖率與長(zhǎng)勢(shì)存在顯著差異。增殖率與ＢＡ濃度密切相關(guān)，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，增殖率先隨ＢＡ濃度的升高呈升高趨勢(shì)，但ＢＡ濃度過(guò)高時(shí)，增殖率有所下降，且芽的長(zhǎng)勢(shì)減弱。后續(xù)試驗(yàn)也表明，ＢＡ濃度為３．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)，隨繼代次數(shù)增加，不定芽出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，不利于后期成苗。增殖率與ＩＢＡ濃度亦表現(xiàn)出一定的相關(guān)性，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，ＩＢＡ濃度為０．２５ ｍｇ／Ｌ時(shí)增殖率最高。因此，薰衣草不定芽增殖培養(yǎng)中，ＭＳ培養(yǎng)基添加ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ和ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ增殖效果好，叢芽壯。

２．３激素種類(lèi)與水平對(duì)薰衣草不定根形成的影響

單芽接種于生根培養(yǎng)基上，７～１０ ｄ時(shí)切口處出現(xiàn)白色根狀突起，試驗(yàn)結(jié)果（表３）表明，Ｗｈｉｔｅ添加ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ或ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ時(shí)生根率較高，但添加ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ時(shí)根稍壯。

２．４不同基質(zhì)對(duì)薰衣草試管苗過(guò)渡移栽成活率的影響

用等體積的泥炭與珍珠巖混合后做基質(zhì)，試管苗生長(zhǎng)快，過(guò)渡移栽成活率可達(dá)９６．９％，苗質(zhì)優(yōu)良；而以蛭石做基質(zhì)，試管苗生長(zhǎng)緩慢，且過(guò)渡移栽成活率最低，為８２．０％（表４）。此外，移栽試驗(yàn)表明，薰衣草試管苗苗齡２０～２５ ｄ，根長(zhǎng)０．８～１．０ ｃｍ時(shí)，試管苗生理活性旺，根吸收能力強(qiáng)，且此時(shí)期移栽不易傷根，成活率高。

３結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，薰衣草離體培養(yǎng)適宜的培養(yǎng)基分別為：不定芽啟動(dòng)培養(yǎng)基ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；繼代增殖培養(yǎng)基，ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；不定根分化培養(yǎng)基，Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ或Ｗｈｉｔｅ＋ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；以等體積的泥炭與珍珠巖混合后作為基質(zhì)馴苗，幼苗成活率可達(dá)９６．９％。

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（責(zé)任編輯向闈）

收稿日期：２０１１－０８－１６

基金項(xiàng)目：湖北省襄陽(yáng)市科技攻關(guān)項(xiàng)目

作者簡(jiǎn)介：蘇?。ǎ保梗叮福?，河北高碑店人，實(shí)驗(yàn)師，主要從事園藝與生物技術(shù)實(shí)踐教學(xué)、研究與推廣工作，（電話(huà)）１３４８７１３１９１６（電子信箱）

ｄａｊｉｅ１９６８＠１２６．ｃｏｍ。