皺葉酸模的試管苗培養(yǎng)研究

李慧　夏鴻飛　王曉旭

摘要：為了對(duì)野生資源進(jìn)行保護(hù)，同時(shí)滿足人們的需求，以具生長(zhǎng)點(diǎn)的皺葉酸模莖段為材料，采用植物組織培養(yǎng)方法，對(duì)生長(zhǎng)點(diǎn)的分化培養(yǎng)、分化芽生根培養(yǎng)、試管苗移栽、定植進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：MS+NAA0.05 mg·L-1+6-BA2.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1是皺葉酸模生長(zhǎng)點(diǎn)分化培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基；誘導(dǎo)分化芽生根的理想培養(yǎng)基是MS+IAA0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1；最佳的分化模式是先生根，再加入液體形式的最適分化培養(yǎng)基；試管苗移栽成活率高達(dá)100%，定植的試管苗保持了野生植株的生物學(xué)性狀。

關(guān)鍵詞：皺葉酸模；組織培養(yǎng)；無性系

中圖分類號(hào)： S336 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2012.06.029

皺葉酸模（Rumex crispus）為蓼科（Polygonaceae）酸模屬多年生草本植物，又稱土大黃、羊蹄葉子等[1]。該植物廣泛分布，多生于河流、湖泊沿岸及水溪旁。其根可入藥，含大黃酚 （Chrysophanol）、大黃素（Emodin）、色素、有機(jī)酸、草酸鈣、鞣質(zhì)、樹脂、糖類、淀粉及黏液質(zhì)等。其功能為清熱解毒，止血，通便，殺蟲。臨床主要用于治療鼻出血，子宮出血，血小板減少性紫癜，大便秘結(jié)等；外用治外痔，急性乳腺炎，黃大瘡，癤腫，皮癬等[2]。由于皺葉酸模具有重要的藥用價(jià)值，多年來人們都在大量地采挖藥用，再加之生態(tài)環(huán)境的破壞，使該藥用植物的野生資源迅速減少。為保護(hù)這種野生藥用植物，研究者對(duì)其進(jìn)行了無性系建立的研究。近年來，已有學(xué)者對(duì)蓼科植物愈傷組織培養(yǎng)進(jìn)行了研究 [3-6]，而對(duì)于皺葉酸模的研究多集中在皺葉酸模的化學(xué)成分及其含量的分析方面[2-8]，并且迄今未見皺葉酸模組織培養(yǎng)及試管苗培養(yǎng)的報(bào)道。本研究以生長(zhǎng)旺盛的皺葉酸模嫩芽為材料，成功地探究出皺葉酸模嫩芽的理想分化及生根培養(yǎng)基，為皺葉酸模無性系的建立奠定了基礎(chǔ)。

1材料和方法

1.1 材料與滅菌

采集大連郊區(qū)水庫(kù)旁生長(zhǎng)旺盛的皺葉酸模，剪取具有嫩芽的嫩苗或嫩莖，放到250 mL的磨口廣口瓶中，用自來水振蕩洗滌20 min左右，接著用0.05%安利洗滌劑振蕩洗滌2～3 min，再用自來水漂洗至泡沫消失時(shí)轉(zhuǎn)移到超凈工作臺(tái)上，然后加75%酒精滅菌10～20 s，迅速倒入無菌水，振蕩洗滌3次，再加入0.05%HgCl2溶液振蕩滅菌1 min，再加入等體積無菌水，使HgCl2滅菌液的濃度變?yōu)?.025%，繼續(xù)振蕩滅菌14 min，接著用無菌水振蕩洗滌5次，即獲得無菌材料。

1.2培養(yǎng)條件

1.3方法

1.3.1芽的分化培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上，將無菌材料剪成帶芽的小段接種到以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的6-BA、KT和NAA的培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基接種培養(yǎng)30個(gè)材料，進(jìn)行不同濃度生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)芽分化的影響試驗(yàn)。將接種的材料放置在恒溫培養(yǎng)箱中，給予1 000 Lx的光照。培養(yǎng)25 d后統(tǒng)計(jì)，試驗(yàn)重復(fù)2次。

1.3.3試管苗移栽的方法從含不同生長(zhǎng)素生根培養(yǎng)基中，各取出長(zhǎng)勢(shì)較好的試管苗80株，用清水洗去根部的培養(yǎng)基，不經(jīng)過煉苗，將其中的40株試管苗直接移植到添有1/2河沙和1/2園土的花盆中，另外40株移植到室外背陰處。移栽后前7 d花盆放在沒有陽(yáng)光直射的環(huán)境中，7 d之后將花盆搬至太陽(yáng)下。40 d后，與室外的移栽苗一起統(tǒng)計(jì)成活率。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)芽分化的影響

3討論

本研究中，在添加濃度為2.0 mg·L-1的6-BA時(shí)，皺葉酸模芽的分化率最高，搭配低濃度的NAA分化芽數(shù)較多。25 d的平均分化芽數(shù)為6.3個(gè)，按照這個(gè)速度，一年能繁殖出6.314.6個(gè)試管苗。利用這種方法進(jìn)行繁殖，在較短的時(shí)間內(nèi)就能繁殖出大量的試管苗。滿足了栽培對(duì)種苗的需求，實(shí)現(xiàn)了對(duì)皺葉酸模野生資源的保護(hù)。用本研究中的生根培養(yǎng)基培養(yǎng)出的皺葉酸模試管苗，基本沒有無效苗，這也極大地提高了繁殖速度。

移植到花盆和室外的試管苗沒有經(jīng)過煉苗的過程，直接移植到土中的試管苗在一周內(nèi)就能恢復(fù)正常的生長(zhǎng)，且生長(zhǎng)旺盛，可能由于以下幾點(diǎn)原因：一是在選擇移植的試管苗時(shí)，首先選擇的是生長(zhǎng)較旺盛，根系發(fā)達(dá)的試管苗；二是在生根和分化培養(yǎng)的時(shí)候加入了許多生長(zhǎng)素，在試管苗移植之后，仍然有一部分生長(zhǎng)素殘留在植物內(nèi)部或根部，這些生長(zhǎng)素可以對(duì)植物的進(jìn)一步生長(zhǎng)發(fā)揮作用；三是無論是皺葉酸模的試管苗還是野生苗都有很強(qiáng)的抗性和對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)能力。這些都使得皺葉酸模的試管苗不用經(jīng)過煉苗，直接移植就能很旺盛的生長(zhǎng)。

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