應(yīng)用HPLC法測(cè)定果汁飲料中的納他霉素含量

李夏林 覃曉

納他霉素（Natamycin）又稱游鏈霉素（Pimaricin），是一種多烯烴大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，能有效抑制霉菌和酵母菌的生長(zhǎng)，阻止絲狀真菌中黃曲霉毒素的形成。1996年我國(guó)食品添加劑委員會(huì)對(duì)納他霉素進(jìn)行評(píng)價(jià)并建議批準(zhǔn)使用，現(xiàn)已列入食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)我國(guó)《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定，果蔬汁（漿）中納他霉素的最大使用量為0.3g/kg。本文參照《食品中納他霉素的測(cè)定 液相色譜法》，對(duì)果汁飲料中納他霉素的測(cè)定進(jìn)行了方法學(xué)考察，以供相關(guān)檢測(cè)人員參考。

SHIMADZU LC-20A全自動(dòng)液相色譜儀（島津制作所），METTLER XS105DU電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；納他霉素對(duì)照品（批號(hào)：00105、含量：89.0%，以無(wú)水物計(jì)97.0%、德國(guó)Dr、上海安普科學(xué)儀器有限公司）；統(tǒng)一鮮橙多（批號(hào)：2011-10-17，廣州統(tǒng)一企業(yè)有限公司）；甲醇為色譜純；冰乙酸為優(yōu)級(jí)純。備溶液，備用。

（2）樣品溶液的制備：精密量取鮮橙多供試樣10mL,置50mL錐形瓶中，加入甲醇30mL,超聲提取30min，提取液依次過(guò)0.45μm和0.22μm的濾膜，取濾液備用。

3.方法的專屬性

取溶劑甲醇、樣品溶液、加標(biāo)樣品溶液與對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，分別依法注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果：溶劑甲醇對(duì)納他霉素測(cè)定無(wú)干擾，樣品未檢出納他霉素，

其內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)納他霉素測(cè)定無(wú)干擾，加標(biāo)樣品與對(duì)照品在

相同時(shí)間位置上檢出納他霉素峰（見(jiàn)圖1）。

4.校準(zhǔn)曲線和檢出限、定量限

取2（1）項(xiàng)的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，甲醇分別稀釋制成納他霉素質(zhì)量濃度為10μg/mL、5μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取10μL，按上述色譜條件，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），與其對(duì)應(yīng)的濃度為橫坐標(biāo)（X）繪制校準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為：Y=58962X-5640，相關(guān)系數(shù)r=0.99998。顯示納他霉素的質(zhì)量濃度在0.25～10μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。在此色譜條件下，分別以信噪比（S/N）為3∶1時(shí)，相應(yīng)的最低檢出濃度0.1515μg/mL為方法檢出限。以信噪比（S/N）為10∶1時(shí)，相應(yīng)的最低檢出濃度0.5051μg/mL為方法定量限。5.回收率和精密度

分別取統(tǒng)一鮮橙多樣品10mL置50mL錐形瓶中，各加入3個(gè)濃度水平的納他霉素對(duì)照品溶液（每個(gè)濃度做3個(gè)平行樣，每個(gè)樣注樣2次），按照2（2）項(xiàng)的方法處理后，在上述色譜條件下，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，根據(jù)測(cè)定成分的峰面積，代入回歸方程計(jì)算納他霉素的含量和回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

從表1可看出，該方法的平均回收率為97.3%～107.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）（n=6）為0.4%～1.0%，其準(zhǔn)確性和精密度均能滿足方法確認(rèn)的技術(shù)要求。

6.樣品測(cè)定

取統(tǒng)一鮮橙多平行樣2份，按2（2）方法處理后，分別取濾液 10μL按2.1項(xiàng)下色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。根據(jù)測(cè)定成分的峰面積，代入回歸方程計(jì)算納他霉素的含量。結(jié)果樣品色譜圖在與對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的位置上均無(wú)峰出現(xiàn)，即在該實(shí)驗(yàn)條件下未檢出納他霉素。