活血通脈注射液對大鼠血管平滑肌細胞增殖的影響

趙 燕 陜西省銅川市人民醫(yī)院（銅川727000）

活血通脈注射液經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈介入術(shù)（Percutaneous coronary intervention，PCI）已成為治療冠心病的主要手段之一，但術(shù)后再狹窄嚴重影響其遠期的治療效果，介入術(shù)后再狹窄率可高達40%～50%［1］。介入手術(shù)后，雖在一時解決了心血管的局部阻塞問題，但它只是對出現(xiàn)問題的血管進行了局部處理，并沒有從根本上解決造成血管狹窄的病因，支架介入術(shù)后，原先沒有出現(xiàn)病變的血管仍有可能出現(xiàn)阻塞、狹窄。其晚期血栓或遲發(fā)血栓卻是致命的并發(fā)癥，一旦發(fā)生，往往危及患者生命［2］。所以后續(xù)的藥物治療和生活方式的調(diào)整，除了能防止原先放入支架的血管出現(xiàn)再狹窄，還能防止沒有病變的血管發(fā)生病變。已有研究表明，某些中藥具有抑制血管內(nèi)膜增生、抑制平滑肌細胞增殖的作用［3］。本實驗探討了活血通脈對大鼠血管平滑肌細胞增殖與凋亡的影響，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法 1.1 試驗動物與材料 選取健康SD大鼠80只（雌雄各半），月齡6～8個月，體重1.51±0.22Kg，由本院實驗動物中心提供（動物合格證號：SCXK2003－0003）。中藥活血通脈注射液：由人參、麥冬、川芎組成，國藥準字Z20100032，成都森科制藥有限公司。阿托伐他?。汉幽咸旆剿帢I(yè)股份有限公司，國藥準字H20093757。一氧化氮試劑盒購自北京三博生物科技有限公司，內(nèi)皮素試劑盒購自上海生物生物工程研究所

1.2 分組方法 把SD大鼠80只隨機分為4組，每組20只，雌雄各半，A正常對照組；B模型組；C活血通脈注射液組；D阿托伐他汀組。B、C、D組行手術(shù)造模。

1.3 術(shù)造模 用20%烏拉坦溶液以5mL／Kg腹腔注射麻醉大鼠，仰位固定，切開皮膚，分離右股動脈，穿刺右股動脈，逆行導入直徑0.5mm的球囊導管至腎動脈下方，鹽水充盈球囊，抽空球囊內(nèi)液體，重復上述過程2次，達到剝脫動脈內(nèi)皮的目的，建立動物心臟狹窄模型。

1.4 給藥方法A組動物未經(jīng)手術(shù)及用藥；B組動物經(jīng)歷手術(shù)但未用藥；C組動物于術(shù)前1d開始給予活血通脈注射液（4mL／kg／d），腹部靜脈緩慢注射：D組動物于術(shù)前1d開始給予阿托伐他汀片（1mg／kg／d）口服。C組與D組的用藥天數(shù)都為15d。

1.5 指標檢測 1.5.1血清NO和血漿ET檢測：動物冠心病模型建立2周后，麻醉實驗動物，腹主動脈取血，血樣注入含7.5%EDTA二鈉30μl和抑肽酶40μl的試管中；用低溫離心機4℃3000rpm離心10min，分離血清，－70℃保存。血清NO測定：硝酸還原酶法；血漿ET測定：放免法。

1.5.2 光鏡檢查：造模2周，實驗動物麻醉后，小心并迅速分離出腹主動脈，截取長約10mm腹主動脈，用于光鏡檢測，4℃冰箱保存。照相采用OLYMPUS AX70顯微照像系統(tǒng)。內(nèi)膜面積＝內(nèi)彈力板圍繞面積－管腔面積，中膜面積＝外彈力板圍繞面積－內(nèi)彈力板圍繞面積，內(nèi)膜增殖指數(shù)＝內(nèi)膜面積／（內(nèi)膜面積＋中膜面積）。

1.6 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件包進行統(tǒng)計學處理。NO、ET檢測與光鏡圖像測量等資料采用±s表示，組間兩兩比較采用方差分析。以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果 2.1 血清NO和血漿ET檢測結(jié)果 由表1可見，鼠腹主動脈球囊損傷后，血清NO明顯下降、血漿ET明顯升高（P＜0.01）?；钛}注射液組和阿托伐他汀組血清N0水平明顯升高（P＜0.05），血漿ET水平顯著降低（P＜0.05）。

表1 活血通脈對大鼠血清NO和血漿ET的影響（±s）

表1 活血通脈對大鼠血清NO和血漿ET的影響（±s）

組 別 n NO（μmol／L） ET（pg／mL）正常對照組 20 73.24±7.25 80.84±12.69模型組 20 53.65±.25 118.95±14.20活血通脈注射液組 20 66.79±5.62 86.30±11.84阿托伐他汀組 20 60.28±6.13 84.95±15.62

2.2 光鏡觀察結(jié)果 正常對照組：腹主動脈血管壁界限清楚，分為內(nèi)膜、中膜和外膜。內(nèi)膜為單層內(nèi)皮細胞，中膜的主要細胞成分是平滑肌細胞，外膜為薄層纖維結(jié)締組織。模型組可見內(nèi)膜不規(guī)則地增厚，部分突向管腔，增厚的內(nèi)膜以平滑肌細胞及基質(zhì)為主?；钛}注射液組和阿托伐他汀組內(nèi)膜增生程度有不同程度的減輕。

2.3 光鏡圖像分析結(jié)果 由表2可見，經(jīng)過光鏡圖像分析，正常對照組大鼠主動脈內(nèi)膜面積無法測量。模型組內(nèi)膜增生明顯，活血通脈注射液組和阿托伐他汀組內(nèi)膜面積明顯減少（P＜0.01）；活血通脈注射液組內(nèi)膜增殖指數(shù)明顯降低（P＜0.01）。

表2 活血通脈對大鼠腹主動脈內(nèi)膜增生的影響（cm2，±s）

表2 活血通脈對大鼠腹主動脈內(nèi)膜增生的影響（cm2，±s）

組 別 n 內(nèi)膜面積 中膜面積 內(nèi)膜增殖指數(shù)正常對照組 20 0 21.85±2.52 0模型組 20 9.86±1.21 23.95±2.52 0.29±0.01活血通脈注射液組 20 7.75±1.06 23.81±3.32 0.25±0.01阿托伐他汀組 20 8.02±0.85 22.39±0.28 0.26±0.03

3 討 論 冠心病的介入治療術(shù)后最常見的問題是血管再狹窄。球囊及支架的置入會損傷血管，內(nèi)皮剝落，導致血管重構(gòu)以及啟動了局部血栓形成和炎癥反應。血管平滑肌細胞向內(nèi)膜遷移和過度增殖，在遷移過程中，大量膠原、彈力蛋白、纖維連接蛋白、多糖等基質(zhì)沉積在血管壁，導致內(nèi)膜增生，形成再狹窄［4］。據(jù)統(tǒng)計，球囊擴張術(shù)后再狹窄高達50%，金屬裸支架植入術(shù)后高達20%～30%，藥物支架置入后仍達5%～10%。經(jīng)大量臨床實驗證實，介入治療術(shù)后3個月是再狹窄形成的關(guān)鍵時期，如果能在這段時間避免再狹窄的發(fā)生，則術(shù)后再狹窄的發(fā)生幾率會非常低［5］。

在常規(guī)藥物預防中，阿托伐他汀能抑制細胞內(nèi)膽固醇合成限速酶，通過其降脂作用可以防止動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展［6］。中醫(yī)認為，介入后再狹窄屬中醫(yī)血瘀證范疇，冠脈介入治療后的病機特點為本虛為主，兼有邪實。因此冠脈介入治療后的中醫(yī)辨證治療偏重于本虛的治療，從整體上調(diào)整陰陽平衡，改善臟腑功能，治療上多以益氣、活血、化痰為主［7］。本文所采用的中藥活血通脈注射液是在益氣養(yǎng)陰、活血通絡治療原則指導下組成的中藥復方制劑，由人參、麥冬、川芎成，方中人參大補元氣，復脈固脫，補脾益肺，生津，安神，用于體虛欲脫，肢冷脈微，脾虛食少；麥冬具有養(yǎng)陰生津，潤肺清心的作用，可用于肺燥干咳，陰虛癆嗽，喉痹咽痛，津傷口渴，內(nèi)熱消渴，心煩失眠，腸燥便秘；川芎活血行氣、祛風止痛的功效，諸藥合用，共奏活血通絡之功［8，9］。本文研究結(jié)果顯示，活血通脈注射液可使冠心病大鼠主動脈內(nèi)膜面積和內(nèi)膜增殖指數(shù)明顯減少，內(nèi)膜增生減輕。N0與ET－1具有相互拮抗的作用，是兩種重要的內(nèi)皮源性血管活性因子。NO－1起血管擴張的作用，而ET－1作用則相反［10，11］。本文研究結(jié)果顯示，活血通脈注射液可明顯升高冠心病大鼠血清N0水平，降低血漿ET水平。上述研究表明，中藥活血通脈注射液具有防治介入術(shù)后再狹窄的作用，這可能與其調(diào)控平滑肌細胞增殖、升高血清N0水平、降低血漿ET水平有關(guān)。

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