高效液相色譜法測(cè)定婦科千金分散片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量

許 寧 ，廖亞琴 ，李喜平

(1．浙江省衢州市人民醫(yī)院，浙江 衢州 324000; 2．浙江省衢州市衢江區(qū)人民醫(yī)院，浙江 衢州 324000;3．浙江天昊藥業(yè)有限公司，浙江 衢州 324002)

婦科千金分散片是由穿心蓮、千斤拔、金櫻根、當(dāng)歸、雞血藤等組成的復(fù)方制劑，是按中藥、天然藥物注冊(cè)分類第八類的要求研制的新藥，具有清熱除濕、益氣化瘀之功效，臨床上用于帶下病、小腹疼痛、腰骶酸痛、神疲乏力及慢性盆腔炎、子宮內(nèi)膜炎、慢性宮頸炎見上述證候者。其中穿心蓮內(nèi)酯及脫水穿心蓮內(nèi)酯等二萜內(nèi)酯類[1]為婦科千斤分散片的有效成分之一，筆者建立了穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

UV－2100型紫外－可見分光光度計(jì)(Shimadzu公司);2F－I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);Waters2690－996系列高效液相色譜儀。穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)為0797－200105)，脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)為110854－200305);婦科千金分散片，缺味樣品(規(guī)格:0．7 g/片，批號(hào)為040601，浙江天昊藥業(yè)有限公司);甲醇(優(yōu)級(jí)純，北京化工廠)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果[2]

2．1 色譜條件

色譜柱:Shimadzu VP－ODS柱(150 mm×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水(52∶48);檢測(cè)波長(zhǎng):穿心蓮內(nèi)酯225 nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯254 nm;流速:1．0 mL/min;柱溫:30℃;理論板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯計(jì)算不低于3 000。高效液相色譜圖見圖1和圖2。

2．2 溶液制備

精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含200．4 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液;精密稱取脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含117．2 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下供試品，精密稱定，取適量置容量瓶中，加甲醇，超聲處理20 min，取出，放冷。加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得供試品溶液。取除穿心蓮?fù)獾钠溆嗵幏搅克幉模粗苽涔に嚪椒ㄖ苽淙贝┬纳彽年幮詷悠?，按樣品測(cè)定項(xiàng)下樣品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液(200．40 μg/mL)適量，加甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度為 20．04，60．12，100．20，140．14，200．40 μg/mL 的溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積Y，根據(jù)最小二乘法計(jì)算，以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)，回歸方程為Y=15 283X+10 424，r=0．999 9，線性范圍為0．200 4 ～2．040 0 μg。精密量取脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液(117．2 μg/mL)適量，加甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度為 11．72，23．44，35．16，58．60，70．32 μg/mL 的溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積Y，根據(jù)最小二乘法計(jì)算，以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)，回歸方程為Y=21 349X+416．3，r=0．999 9，線性范圍 0．117 2 ～0．702 4 μg。

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液，按擬訂的色譜條件，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯的RSD分別為0．16%和0．02%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別在 0，4，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯的RSD分別為 0．15%和 0．31%。

圖1 高效液相色譜圖

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品6份，按擬訂的色譜條件測(cè)定。計(jì)算得穿心蓮內(nèi)酯的含量為2．02 mg/g，RSD=0．40%;脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量為 0．45 mg/g，RSD=1．99%。

圖2 高效液相色譜圖

加樣回收試驗(yàn):取已知含量樣品9份，各精密加入對(duì)照品適量，按擬訂的色譜條件測(cè)定，分別計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2．4 樣品含量測(cè)定

照2．2項(xiàng)下方法制備溶液，精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算即得。批號(hào)分別為 040601，040602，040603，040604 的樣品含量分別為 1．72，1．74，1．69，1．73 mg/片。

3 討論

為保證供試品中穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯提取充分，分別對(duì)提取溶劑和提取時(shí)間進(jìn)行了考察。結(jié)果以甲醇作為提取溶劑，超聲時(shí)間20 min較佳。穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯為穿心蓮的主要成分，而穿心蓮為方中的君藥，其含量的高低與產(chǎn)品療效有密切關(guān)系，故作為定量指標(biāo)較適宜。本法簡(jiǎn)便、靈敏度高，可達(dá)控制產(chǎn)品質(zhì)量的目的。

[1]肖樹雄，王曉鈺，鄭劍紅．穿心蓮的成分及其分析方法研究概況[J]．中國(guó)藥師，2002，5(11):693 －694．

[2]張嘉樂，羅暉明．婦科千斤微丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．海峽醫(yī)藥，2006，18(1):73 －75．