不同來源藤梨根中總黃酮含量的比較

宣新中 ，蔡中齊 ，姚 曉

(1．浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，浙江 寧波 135100;2．南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210000)

藤梨根為獼猴桃科獼猴桃屬植物中華獼猴桃Actinidia chinensisPlanch或軟棗獼猴桃Actinidia argutaPlanch的干燥根。獼猴桃屬全球約54種，分布于馬來西亞至西伯利亞東部的廣闊地帶，我國是主產(chǎn)區(qū)。近年發(fā)現(xiàn)該屬植物均具有抗癌、降血脂等活性，預(yù)示有廣闊的開發(fā)前景[1]。陜西省廣泛栽培，栽植面積占全國一半以上。全株含獼猴桃堿，根含熊果酸、齊墩果酸、琥珀酸、胡蘿卜苷以及精氨酸、賴氨酸、亮氨酸、丙氨酸等多種成分元素?，F(xiàn)代藥理研究表明，藤梨根具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等作用，可用于治療消化系統(tǒng)癌癥、黃疸、消化不良、嘔吐、腹瀉等癥[2－5]。筆者在藥材市場的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，藤梨根中普遍存在著大量地上莖，栽培品及野生品均存在于市場中，質(zhì)量良莠不齊，為此進(jìn)行了本研究。

1 材料、儀器與試藥

藤梨根藥材采自中國浙江衢州，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)生藥鑒定教研室陳建偉教授鑒定，1號樣品(批號為11051)和2號樣品(批號為110530)為獼猴桃科植物中華獼猴桃Actinidia chinensisPlanch的干燥根，1號系栽培品，2號為野生品;3號樣品(批號為110614)為獼猴桃科植物中華獼猴桃Actinidia chinensisPlanch的干燥地上莖。分別洗凈，置60℃烘箱中干燥，并粉碎過60目篩，備用。Spectrum752型紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司);FA1004型電子分析天平(上海天平廠，精度0．1 mg);AS2060B型超聲儀(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，標(biāo)號為00809705);亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁、甲醇均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備[6]

精密稱取無水蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含 0．268 mg 的溶液，吸取該溶液 0，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，分別置25 mL容量瓶中，精密加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，靜置6 min加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min加4．3%氫氧化鈉溶液10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)試劑為空白，按紫外－可見分光光度法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA]，在500 nm波長處測定吸光度。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=12．648X－ 0．007 6，r2=0．998 7。

2．2 供試品溶液制備

精密稱取1 g上述樣品粉末，精密稱定，分別置于索氏提取器中，加100 mL甲醇，加熱回流至提取液無色，提取液轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2．3 總黃酮含量測定

精確吸取各樣品溶液1 mL，置25 mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，靜置6 min;加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置 6 min;加4．3%氫氧化鈉溶液10 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，在波長500 nm處測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中總黃酮含量。

2．4 方法學(xué)考察

穩(wěn)定性試驗(yàn):取甲醇索氏提取法所得的供試品溶液，按2．3項(xiàng)下方法，分別在 0，5，10，15，20，25 min 不同時間點(diǎn)進(jìn)行檢測。結(jié)果的RSD為2．34%，表明供試品溶液在25 min內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):用甲醇索氏提取法平行制備6份供試品溶液，按 2．3項(xiàng)下方法，分別測定其吸光度。結(jié)果的RSD為2．28%，表明方法重復(fù)性好。

精密度試驗(yàn):取甲醇索氏提取法所得的供試品溶液，按2．3項(xiàng)下方法，測定其吸光度，連續(xù)測定6次。結(jié)果的RSD為0．62%。

加樣回收試驗(yàn):稱取1號樣品粉末約0．05 g，共6份，精密稱定質(zhì)量，置于索氏提取器中，分別精密加入質(zhì)量濃度為0．268 g/L的蘆丁對照品甲醇液 8．0，8．0，13．0，13．0，18．0，18．0 mL，加甲醇至50 mL，加熱回流至提取液無色，提取液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精確吸取各樣品溶液5．0 mL，分別置25 mL容量瓶中，照2．1項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法，自“加水至6 mL”起測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算蘆丁的含量，結(jié)果見表2。

2．5 樣品含量測定結(jié)果

按2．3項(xiàng)下方法測定供試品總黃酮含量(以蘆丁計)，結(jié)果表明，栽培藤梨根中總黃酮的含量比野生藤梨根中總黃酮的含量高，根中的總黃酮含量遠(yuǎn)高于地上莖中的總黃酮含量，見表3。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表3 藤梨根總黃酮測定結(jié)果(n=3)

3 討論

曹書芬等[7]及黃燕等[8]用TUNEL法檢測中華獼猴桃根正丁醇提取物對瘤細(xì)胞有明顯的凋亡效應(yīng)，中華獼猴桃根正丁醇提取物能有效抑制人食管癌Eca－109細(xì)胞生長。草藥藤梨根治療癌癥的情況調(diào)查表明:藤梨根主要用于食管癌[9]。國宏莉等[10]在動物試驗(yàn)中證明藤梨根能有效誘導(dǎo)鼠胃癌細(xì)胞的凋亡，與對照組細(xì)胞的凋亡率和死亡率有顯著的差異。預(yù)示藤梨根在治療胃癌方面具有廣闊的開發(fā)前景，但是，藤梨根抗癌的物質(zhì)基礎(chǔ)尚未明確?，F(xiàn)對藤梨根的化學(xué)成分進(jìn)行初步研究，發(fā)現(xiàn)藤梨根中含有總黃酮，并對幾種藤梨根中總黃酮的含量進(jìn)行分析、比較研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藤梨根中總黃酮的含量栽培品高于野生品，根高于地上莖，預(yù)示藤梨根的根及地上莖不可同等入藥，市場應(yīng)加強(qiáng)對藤梨根的質(zhì)量控制?？傸S酮可能是藤梨根抗癌的主要物質(zhì)基礎(chǔ)之一，但對藤梨根總黃酮的最佳提取工藝及其抗癌藥理作用有待進(jìn)一步研究，結(jié)合其藥理作用對其化學(xué)成分進(jìn)一步研究，從藤梨根中分析篩選其抗癌的有效部位或活性成分，為臨床新藥開發(fā)奠定基礎(chǔ)。建議加強(qiáng)植化方面的研究，確立藤梨根的特征性成分或指標(biāo)性成分，建立藤梨根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[1]梁疇芬．中國植物志(49－2分冊)[M]．北京:北京出版社，1984:108．

[2]南京藥學(xué)院《中草藥學(xué)》編寫組．中草藥學(xué)(中冊)[M]．南京:江蘇人民出版社，1976:662－623．

[3]陳貫誠 ．獼猴桃[J]．中藥材科技，1981，4(1):30－31．

[4]陳德軒，潘立群．抗腫瘤植物藥藤梨根[J]．中藥材，2004，27(2):86－87．

[5]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會．中華本草(第三冊)[M]．第9卷．上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999:169．

[6]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:30．

[7]曹書芬，國宏莉，張 麗，等．藤梨根乙酸乙酯提取物對人食管癌細(xì)胞生長的抑制作用[J]．山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，38(5):413－417．

[8]黃 燕，郭淑玉，周力音，等．中華獼猴桃根注射液治療小兒反復(fù)呼吸道感染的研究[J]．中國實(shí)驗(yàn)臨床免疫學(xué)雜志，1993，5(2):40－42．

[9]杭州腫瘤醫(yī)院．草藥藤梨根治療癌癥的情況調(diào)查[J]．中草藥通訊，1970，1(1):18 －20．

[10]國宏莉，姚俊霞，張 麗，等．藤梨根正丁醇提取物在人食管癌細(xì)胞生長中的作用[J]．中藥材，2008，31(7):1 030 －1 032．