當(dāng)前養(yǎng)禽業(yè)中禽流感的流行及免疫現(xiàn)狀

孫海龍，左紹航，王林果，鄭念軍，王選強(qiáng)

（1.普萊柯生物工程股份有限公司，河南洛陽(yáng)471000；2.山東布恩集團(tuán)，山東臨沂 276020）

當(dāng)前養(yǎng)禽業(yè)中禽流感的流行及免疫現(xiàn)狀

孫海龍1，左紹航2，王林果1，鄭念軍1，王選強(qiáng)1

（1.普萊柯生物工程股份有限公司，河南洛陽(yáng)471000；2.山東布恩集團(tuán)，山東臨沂 276020）

禽流感專(zhuān)題之免疫防控

禽 流 感（Avian influenza,AI）是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一種禽類(lèi)的烈性傳染病。自1978年在意大利的雞群中首次發(fā)現(xiàn)本病以來(lái)，已在美洲、歐洲等世界上許多國(guó)家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)有本病流行。我國(guó)自1995年首次報(bào)道禽流感發(fā)生以來(lái)，每年都有禽流感發(fā)生的報(bào)道，尤其是低致病性禽流感在我國(guó)的流行幾乎呈常態(tài)化。由于禽流感病毒（AIV）血清型眾多，變異性強(qiáng)，給免疫預(yù)防工作帶來(lái)極大的挑戰(zhàn)?，F(xiàn)將我們?cè)趯?shí)際生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室研究了解的一些情況做下匯總，望同行給予批評(píng)指正。

一、高致病禽流感（HPAI）的流行動(dòng)態(tài)及預(yù)防

1.高致病性禽流感（HPAI）的流行狀況。高致病性禽流感（HPAI）目前在我國(guó)主要呈現(xiàn)局域性、波浪式流行，每年的10月中下旬到來(lái)年的5月中下旬出現(xiàn)發(fā)病高峰，以后逐漸趨于平靜；對(duì)于蛋雞和種雞主要是造成產(chǎn)蛋性能下降，商品肉雞近幾年發(fā)病明顯增加；2008年以前水禽帶毒不發(fā)病，近年來(lái)水禽不僅帶毒而且發(fā)病出現(xiàn)死亡。

2.高致病性禽流感（HPAI）發(fā)展趨勢(shì)。近年來(lái)，我國(guó)的養(yǎng)殖業(yè)在預(yù)防禽流感的發(fā)生及發(fā)展上取得了巨大成就，為我國(guó)的禽類(lèi)養(yǎng)殖挽回了經(jīng)濟(jì)損失。但隨著免疫壓力和環(huán)境污染壓力的增加，禽流感病毒的變異速度在不斷加快，已形成現(xiàn)有疫苗毒株（H5N1RE-4+RE-5）不能完全保護(hù)的現(xiàn)狀。有專(zhuān)家學(xué)者對(duì)國(guó)內(nèi)不同地區(qū)的HPAIV進(jìn)行分子生物學(xué)的分析比較，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有疫苗毒株與流行毒株在抗原性上出現(xiàn)較大的差異。如2008年第7分支在局部地區(qū)再現(xiàn)，2009年以后2.3.2分支有取代2.3.4分支趨勢(shì)，變成主要流行譜系。因此，從理論上，Re-4 、Re-5毒株需要更換。

3.高致病禽流感（HPAI）的免疫預(yù)防。高致病性禽流感（HPAI）防控措施，首先是對(duì)發(fā)病禽場(chǎng)周?chē)?公里范圍內(nèi)的禽類(lèi)完全隔離和撲殺；其次是在平時(shí)的飼養(yǎng)中加強(qiáng)生物安全措施體系的建立，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高禽類(lèi)自身的抵抗能力；第三是免疫接種預(yù)防（1）商品肉雞 5～10日齡皮下注射禽流感H5N1RE-4+RE-5疫苗 ；（2）蛋雞和種雞，開(kāi)產(chǎn)前最少免疫3次滅活疫苗，讓雞群抗體滴度保證在7 log2以上，使雞群具有完全的抗感染和抗死亡的能力。具體可參考以下免疫程序：15～20日齡進(jìn)行H5滅活疫苗首免；45～50日齡進(jìn)行二免；115～120日齡進(jìn)行三免；40周齡加強(qiáng)免疫。肉種雞三免在140～145日齡進(jìn)行。

二、當(dāng)前低致病性禽流感（LPAI）的流行新動(dòng)態(tài)

1.H9N2亞型仍為當(dāng)前禽流感流行的主型。H9N2亞型禽流感呈地方性流行、持續(xù)存在，肉雞50%左右的感染能夠檢測(cè)到LPAIV，個(gè)別地區(qū)發(fā)病發(fā)病綿延不斷，嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，傳染源的存在及疫源地的根除十分困難，疫情隱患長(zhǎng)期存在；市場(chǎng)開(kāi)放、流通頻繁、檢疫工作滯后等給流行創(chuàng)造了便利條件；不免疫或不按免疫程序免疫；疫苗保護(hù)力達(dá)不到理想效果；生物安全措施落實(shí)不到位。

2.臨床表現(xiàn)出多樣性。H9N2是多種疫病發(fā)生的誘因，典型暴發(fā)：突然發(fā)病、感染率高、傳播范圍大；非典型流行：沒(méi)有特征癥狀，主要引起產(chǎn)蛋下降、育雛及育成雞ND等疫苗免疫失敗；條件性發(fā)病。

3.H9N2亞型禽流感抗原性在漂變。禽流感病毒H9N2亞型抗原漂變、基因重組的現(xiàn)象十分普遍，已形成一個(gè)遺傳分支。有研究資料表明：1998～1999 年間的毒株抗原性無(wú)變化,疫苗保護(hù)率為100%；2000年后毒株間抗原性發(fā)生了變化, 疫苗保護(hù)率在下降，尤其是2008年以后，各地毒株的抗原性發(fā)生較大的變化，使得經(jīng)典毒株的疫苗保護(hù)率在個(gè)別地區(qū)出現(xiàn)較低的問(wèn)題。

4.較高致病力的H9N2亞型毒株的出現(xiàn)。H9N2亞型禽流感各地區(qū)不同分離株的親緣關(guān)系在2003-2008年間較近。但是在2008年冬季以后，一些地方出現(xiàn)變異株；從病毒HA抗原結(jié)構(gòu)的基因序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，各地方毒株出現(xiàn)個(gè)別差異性變化、親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，給防疫帶來(lái)困難，特別是在和水禽混養(yǎng)地區(qū)情況更為嚴(yán)重。在免疫和環(huán)境壓力下, H9N2亞型禽流感病毒的HA基因已發(fā)生了較大變異,對(duì)此必須高度警惕。

5.我國(guó)H9N2流行分支有區(qū)域性。第Ⅰ亞分支在華東、華北、東北、西北、西南地區(qū)流行；第Ⅱ亞分支福建、廣西最近零星分離；華中地區(qū)流行第Ⅳ亞分支；華南地區(qū)流行第Ⅵ亞分支。

三、當(dāng)前低致病性禽流感（LPAI）的免疫狀況及保護(hù)情況

滅活疫苗免疫是目前預(yù)防低致病性H9N2亞型禽流感的重要防線(xiàn)。在我國(guó)H9N2亞型禽流感病毒的滅活疫苗已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，滅活全病毒疫苗安全性好，抗原組分齊全，免疫原性強(qiáng)，不會(huì)出現(xiàn)毒力返強(qiáng)和變異危險(xiǎn)，能夠經(jīng)受同亞型AIV的攻擊，能給免疫雞群提供一定的免疫保護(hù)。

H9N2亞型禽流感病毒對(duì)SPF雞均屬低致病力毒株，單獨(dú)感染該亞型病毒不能導(dǎo)致雞只發(fā)病，該亞型禽流感病毒引起禽類(lèi)感染和發(fā)病與環(huán)境因素及混合感染密切相關(guān)。感染后的HI試驗(yàn)結(jié)果表明，這些病毒抗原性比較復(fù)雜，出現(xiàn)抗原變異株。

H9N2滅活疫苗使用能使低致病性禽流感的感染率、發(fā)病率和死亡率降低，減少禽類(lèi)養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)損失。有學(xué)者將兩個(gè)不同公司的H9N2滅活疫苗在白羽肉雞實(shí)際生產(chǎn)中做免疫攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)，分別發(fā)現(xiàn)免疫14 d后抗體升到5.25和5.12，而對(duì)照組為1.12；免疫后3周后采用1：10稀釋的H9和NDV混合液進(jìn)行靜脈注射，每只雞0.2 ml， 35 d后再檢測(cè)H9HI效價(jià)，分別為8.3和7.4，對(duì)照組為5.2，記錄發(fā)病率分別為33.3%和40%，對(duì)照組為100%，死亡率分別為13.3%和20%，對(duì)照組為66.7%，說(shuō)明目前市售疫苗并不能完全保護(hù)該亞型與其他病毒混合感染發(fā)病，但免疫接種新流二聯(lián)滅活疫苗的雞群能大大減少死亡率，即使是存在混合感染的情況也能起到較好的免疫保護(hù)效果。

四、免疫中存在的問(wèn)題

1.免疫存在空檔期。H9N2都采用滅活油苗免疫預(yù)防，免疫注射油苗，僅僅產(chǎn)生循環(huán)抗體，且產(chǎn)生抗體速度較慢，一般需要2周以上產(chǎn)生可以起到保護(hù)作用的抗體滴度，故存在短暫的免疫空白期讓病毒入侵。

2.只有滅活疫苗，缺乏黏膜保護(hù)。油苗免疫主要是體液免疫，作為病毒主要入侵的呼吸道卻沒(méi)有合適的活苗作為基礎(chǔ)免疫或者加強(qiáng)免疫，因而缺乏局部黏膜屏障的保護(hù)，不能有效阻止H9病毒進(jìn)入體內(nèi)。進(jìn)入體內(nèi)的H9病毒被體內(nèi)循環(huán)抗體中和，很快中和已經(jīng)產(chǎn)生的體液循環(huán)抗體，導(dǎo)致免疫效果很快失效，大量病毒繼續(xù)進(jìn)入，導(dǎo)致體內(nèi)組織器官損傷，包括免疫器官等組織，從而造成混合感染，發(fā)病損失很大。

3.同一血清型出現(xiàn)不同分支，交叉反應(yīng)差。在疫苗的選擇壓力下,近年來(lái)毒株間抗原性發(fā)生了變化,疫苗保護(hù)率在下降。大量文獻(xiàn)也證實(shí)H9N2亞型禽流感病毒滅活疫苗免疫試驗(yàn)不同病毒疫苗之間交義免疫原性差，不能提供完全的免疫保護(hù)，提示H9N2亞型禽流感的防治疫苗候選株應(yīng)在嚴(yán)格抗原性分析的基礎(chǔ)上及時(shí)更新。

4.多宿主感染，傳染源難于控制。目前國(guó)內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)主要是公司加農(nóng)戶(hù)模式，一個(gè)區(qū)域內(nèi)同時(shí)飼養(yǎng)各種批次的雞只，雖然某個(gè)養(yǎng)殖戶(hù)能做到全進(jìn)全出，但針對(duì)這個(gè)小區(qū)域而言做不到，因而不能做到免疫同步，病毒通過(guò)氣溶膠飛沫傳播，傳染性強(qiáng)；傳播快，很難清除，使得病毒有了生存的空間，大環(huán)境很難控制。

5.現(xiàn)有疫苗具有局限性。疫苗是否具有良好的保護(hù)率，主要從兩個(gè)方面決定，一是保證疫苗血清型和亞型一致；二是疫苗中足夠的抗原量。目前市場(chǎng)上有很多廠家的滅活苗，每個(gè)廠家的質(zhì)量不一，抗原含量有高有低，導(dǎo)致免疫雞群抗體水平不一致，雞群零星發(fā)病。另外我國(guó)南北毒株有著較大的差異，現(xiàn)行的疫苗在其抗原性方面都存在一定的局限性，故導(dǎo)致南北免疫效果的差異。

五、未來(lái)禽流感疫苗的發(fā)展方向

目前滅活疫苗的使用并沒(méi)有有效的控制H9N2亞型禽流感的流行，甚至在免疫雞群仍然可以分離到病毒。尤為重要的是，某些地區(qū)從人和豬上也分離到了H9N2亞型流感病毒，預(yù)示著有可能給人類(lèi)健康造成新的威脅。另外文獻(xiàn)報(bào)道H9N2亞型不同病毒疫苗之間交義免疫原性差，當(dāng)前疫苗已經(jīng)不能滿(mǎn)足當(dāng)前免疫防疫的需要，提示防治疫苗候選株應(yīng)在嚴(yán)格抗原性分析的基礎(chǔ)上及時(shí)更新，針對(duì)目前防治H9N2現(xiàn)狀作者做以下思考：

1.重組活載體疫苗。重組活載體疫苗是將禽流感病毒具有免疫保護(hù)原性的HA基因或NA基因重組到載體病毒中，用此重組病毒作為疫苗，它可在動(dòng)物體內(nèi)復(fù)制，并不斷地表達(dá)出外源基因，從而誘導(dǎo)禽類(lèi)產(chǎn)生針對(duì)AIV的免疫保護(hù)力，這是一種很有希望的禽流感疫苗研制策略。目前油苗免疫預(yù)防H9N2，缺乏活苗進(jìn)行局部黏膜免疫，重組活載體疫苗的研發(fā)，可以彌補(bǔ)油苗的局限性，并可解決散毒問(wèn)題，如采用ILT作為載體還可做到一針?lè)纼刹〉男Ч?/p>

2.標(biāo)記疫苗。標(biāo)記疫苗是用一種疫苗給動(dòng)物免疫后，通過(guò)與之相配套的血清學(xué)檢測(cè)方法，可以將免疫動(dòng)物和自然感染動(dòng)物區(qū)分開(kāi)來(lái)。在我國(guó)，盡管H9N2亞型禽流感病毒的滅活疫苗已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，主要是因?yàn)槠涿庖咴詮?qiáng)，抗原組分齊全，免疫保護(hù)時(shí)間長(zhǎng)，但其存在著自身的一些缺點(diǎn)，利用血清學(xué)方法不能區(qū)分免疫動(dòng)物和自然感染動(dòng)物，干擾病毒流行病學(xué)監(jiān)測(cè)，尤其是影響禽流感的流行病學(xué)調(diào)查，在很大程度上限制了它的應(yīng)用，而在尚無(wú)疫情發(fā)生的地方不主張免疫，因此在很人程度上限制了它的應(yīng)用，正由于常規(guī)禽流感滅活疫苗的不可克服的缺點(diǎn)，使得開(kāi)發(fā)滅活標(biāo)記疫苗成為必要。流感病毒反向遺傳操作系統(tǒng)的建立為流感病毒疫苗研制提供了有力工具。

3.VLP疫苗。病毒樣顆粒(VLP）是含有某種病毒一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的空心顆粒，形態(tài)結(jié)構(gòu)上類(lèi)似完整病毒，具有與完整病毒相似的免疫原性，并通過(guò)激活抗原提呈細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。VLP不含有病毒核酸，不能自主復(fù)制，因此無(wú)致病性，在疫苗研發(fā)中具有廣泛的應(yīng)用前景?，F(xiàn)已有多種亞型流感VLP合成的報(bào)道，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明這些VLP可誘導(dǎo)產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答。數(shù)種二價(jià)（多價(jià)）混合流感VLP也被合成并證實(shí)在不同亞型流感病毒間具有交叉保護(hù)作用。目前的研究表明流感VLP疫苗具有高免疫效價(jià)、能有效誘導(dǎo)交叉免疫應(yīng)答和安全性高等特點(diǎn)，特別是結(jié)合良好的佐劑使用能夠增強(qiáng)流感VLP疫苗的免疫原性。

4.亞單位疫苗。該種疫苗的優(yōu)點(diǎn)是桿狀病毒系統(tǒng)屬于真核表達(dá)系統(tǒng)，所表達(dá)的HA蛋白能進(jìn)行糖基化形成正確的空間構(gòu)象，具有很好的安全性，并能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠的免疫力。但是亞單位疫苗需要對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行純化，而且在家禽中應(yīng)用成本較高。

高效、安全、實(shí)用的禽流感疫苗的研制一直是世界養(yǎng)禽業(yè)關(guān)注的焦點(diǎn)。為了保障我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展，實(shí)施全面系統(tǒng)的高致病性禽流感的防制措施勢(shì)在必行。

六、H9亞型低致病性禽流感的診斷

診斷原則可根據(jù)流行病學(xué)資料、臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室檢查等手段綜合分析，予以診斷。也可做血清學(xué)診斷如血凝抑制（HI）試驗(yàn)或間接ELISA等。本病缺乏特征性的臨床癥狀和病變，故不容易做出確診，應(yīng)采集病雞氣管、肺、心、腦、脾、胰等組織進(jìn)行病毒分離，同時(shí)抽取發(fā)病時(shí)和發(fā)病后14～28 d的病雞血清進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，以便確診。

七、H9亞型低致病性禽流感的防制

針對(duì)H9N2亞型低致病性禽流感疫情，采取堅(jiān)決淘汰、強(qiáng)化免疫為主的綜合性防疫措施,在嚴(yán)格隔離、封鎖、確保疫源不外溢的情況下采取一些治療措施。以降低死亡率，盡可能地減少經(jīng)濟(jì)損失。

1.建立良好的生物安全體系。

加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，建立健全完整的生物安全體系，加強(qiáng)養(yǎng)禽場(chǎng)的防疫管理，避免從疫區(qū)引進(jìn)禽類(lèi)，防止雞與其它禽類(lèi)（如鴨、鵝等）接觸。

2.加強(qiáng)疫苗免疫。免疫接種是控制疫病發(fā)生的殺手锏，在流行季節(jié)要盡早免疫和多次免疫。合理的免疫程序應(yīng)根據(jù)母源抗體、疫苗的性質(zhì)、疾病流行的特點(diǎn)及家禽的種類(lèi)來(lái)制定。在制定免疫程序時(shí)，可參考如下方案：

（1）蛋雞和種雞：5～10日齡新支流或新流二聯(lián)滅活疫苗首免；35～40日齡 新支流或新流二聯(lián)滅活疫苗二免；120～130日齡 新支流或新流二聯(lián)滅活疫苗三免；40周后加強(qiáng)免疫新支流或新流二聯(lián)滅活疫苗。

（2）快大肉雞（50～60日齡出欄）：1～7日齡免疫新支流或新流二聯(lián)滅活疫苗。

（3）中慢速黃羽肉雞（90日齡以上出欄）：5～7日齡首免新支流或新流二聯(lián)滅活疫苗；視不同飼喂時(shí)間35～40日齡進(jìn)行二免。

3.藥物治療。對(duì)H9N2亞型禽流感，適時(shí)使用抗病毒藥物如雙黃連口服液，仍有一些早期預(yù)防、減輕癥狀和減少損失的作用。對(duì)H9N2亞型禽流感，適當(dāng)使用抗菌藥物控制細(xì)菌性疾病的繼發(fā)感染感染，也可以減少死亡損失。如感染早期在飲水中加入頭孢類(lèi)藥物、利高霉素、強(qiáng)力霉素等，均可減輕一些死亡損失。如能及時(shí)與抗病毒藥物聯(lián)合使用，效果會(huì)更好些。

（在文章的創(chuàng)作和編寫(xiě)過(guò)程中，得到國(guó)家獸藥工程技術(shù)研究中心白朝勇博士的大力幫助和支持，特此表示感謝）