海南產(chǎn)三叉苦的化學(xué)成分研究

鮑長(zhǎng)余，范超君，陳湛娟，畢和平，2*

（1.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 海口 571158；

2.海南師范大學(xué)“省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)”教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571158）

海南產(chǎn)三叉苦的化學(xué)成分研究

鮑長(zhǎng)余1，范超君1，陳湛娟1，畢和平1，2*

（1.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?571158；

2.海南師范大學(xué)“省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)”教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 海口 571158）

海南產(chǎn)三叉苦［Melicope ptelefolia（Champ.ex Benth.）Hartley］莖用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%的乙醇提取，提取液依次用石油醚、乙酸乙酯、氯仿和正丁醇充分萃取，硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠柱色譜反復(fù)分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu).結(jié)果分離得到12個(gè)化合物，分別鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯（phthalic acid dibutyl ester）（1），香蘭素（vanillin）（2），β-谷甾醇β-sitosterol（3），木栓酮（riedelin）（4），β-胡蘿卜苷（β-daucosterol）（5），leptonol（6），苯甲酸正丁異丁酯（phthalic acid butyl isobutyl ester）（7），methylleptol A（8），異吳茱萸酮酚（isoevodionol）（9），lepten A（10），evodione（11），東莨菪素（scopoletin）（12），其中化合物（2）、（4）、（7）、（12）首次從該植物中分離得到.

三叉苦；提取；分離；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

三叉苦[Melicope ptelefolia（Champ.ex Benth.）Hartley]又名三丫苦，三叉虎，三椏苦等，為蕓香科蜜茱萸屬植物[1]，始載于《嶺南采藥錄》，藥用莖、葉或根，分布于我國(guó)海南、廣州、廣西、臺(tái)灣、福建、云南等省區(qū).本品味苦、寒，具有清熱、除濕等功效.用于治療風(fēng)濕痹痛、黃疸型肝炎、流行性腦脊髓炎、咽喉腫痛、瘧疾、濕疹皮炎，跌打腫痛、咽喉炎、感冒發(fā)熱等[2-3].為進(jìn)一步開發(fā)其藥用價(jià)值，闡明其有效成分，本文對(duì)海南產(chǎn)三叉苦莖的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與藥材

Bruker AV400MHz超導(dǎo)核磁共振儀（瑞士Bruker公司）；XT4型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（北京科儀電子儀器廠，溫度計(jì)未校正）；Sephadex LH-20（Phar?macia公司）；BSZ-100自動(dòng)部分收集器（上海青浦滬西儀器有限公司）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）.

石油醚（沸程60-90℃）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等均為國(guó)產(chǎn)分析純，乙醇（75%）為國(guó)產(chǎn)食品級(jí)，薄層硅膠GF254和柱色譜硅膠（200～300目）均為青島海洋化工廠.

三叉苦采于海南省澄邁縣,由海南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院鐘瓊芯高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為Melicope ptelefolia（Champ.ex Benth.）Hartley 的莖，標(biāo)本現(xiàn)保存于海南師范大學(xué)“省部共建”熱帶藥用植物化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室.

1.2 提取與分離

取干燥的三叉苦莖6.0 kg，粉碎后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)75%乙醇浸泡，回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮，得黑色浸膏.浸膏用水懸溶，依次用等體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各反復(fù)萃取6次.萃取液減壓濃縮，依次得到石油醚浸膏（A）46.1 g，氯仿浸膏（B）138.8 g，乙酸乙酯浸膏（C）69.0 g，正丁醇浸膏（D）23.6 g.經(jīng)硅膠柱色譜、葡聚糖凝膠柱色譜反復(fù)分離純化，利用核磁共振波譜法，結(jié)合理化分析，鑒定得：A部分得化合物（1）～（5），B部分得化合物（6）～（11），C部分得化合物（12）.

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針晶（氯仿），分子式為C16H22O4.易溶于氯仿、丙酮，254 nm紫外燈下有褐色暗斑，1H NMR（400 MHz；CDCl3）δ 0.93（6H，m，H-6′和H-6"）表明2個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)，δ7.66（2H，dd，J=3.4，5.6 Hz，H-3和H-4），δ7.47（2H，dd，J=3.4，5.6 Hz，H-2和H-5）為4個(gè)sp2雜化的芳香環(huán)質(zhì)子信號(hào)，表明有一個(gè)苯環(huán)，1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δH：0.93（6H，q，J=7.6Hz，H-11和H-11′），1.42（4H，m，H-10和H-10′），1.68（4H，m，H-9和H-9′），4.26（4H，t，J=6.4 Hz，H-8和H-8′），7.47（2H，dd，J=8.8，4.4Hz，H-4和H-5），7.66（4H，dd，J=8.8，4.4Hz，H-3和H-6）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）.以上數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)與文獻(xiàn)報(bào)道[3]的鄰苯二甲酸二丁酯數(shù)據(jù)基本一致,故確定化合物1為鄰苯二甲酸二丁酯.

化合物2：淺黃色針狀粉末，分子式為C8H8O3.有香氣，mp80～81℃，溶于氯仿、丙酮、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，微溶于水.在紫外燈254 nm下顯暗斑，365 nm為下紅棕色，5%硫酸乙醇溶液顯棕色，碘顯黃色，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,表明有酚羥基.H-NMR（CDCl3，400MHz）可見一個(gè)醛基質(zhì)子信號(hào)δ9.85（1H，s，CHO-1）、一個(gè)甲氧基信號(hào)δ3.96（3H，s，OCH3-3）以及一組ABX偶合系統(tǒng)的特征信號(hào).波譜數(shù)據(jù)位：1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ（ppm）：7.41（1H，d，J=1.6Hz，H-2），7.04（1H，d，J=8.4Hz，H-5），7.43（1H，dd，J=8.4，1.6Hz，H-6），9.83（1H，s，CHO）6.32（1H，brs，OH），3.94（3H，s，OCH3）.13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ/ppm：129.9（C-1），108.8（C-2），147.2（C-3），151.7（C-4），114.4（C-5），127.6（C-6），190.9（CHO），56.1（OCH3）.以上波譜常數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道[4]基本一致，確定化合物2為香蘭素.

化合物3：白色針狀結(jié)晶，分子式為C29H50O.難溶于乙醇，不溶于甲醇、水，易溶于氯仿、乙醚、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，m.p.140～142℃.5%H2SO4乙醇溶液顯色為紫紅色.它與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行TLC展開，3種不同的展開劑系統(tǒng)的Rf值均一致，混合熔點(diǎn)不下降，根據(jù)以上數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)，結(jié)合與文獻(xiàn)報(bào)道[5]，鑒定化合物3為β-谷甾醇（β-sitosterol）.

化合物4：白色針狀晶體，分子式為C30H48O，mp 260—262℃，TLC遇濃硫酸顯紫紅色，1H-NMR（400 MHz，CDCl3）：0.72（3H，s，H-24），0.87（3H，s，H-25），0.88（3H.d.J=6.8 Hz.H-23），0.95（3H，5，H-30），1.00（3H，s，H-26），1,01（3H，s，H-29），1.05（3H，s，H-27），1.18（3H，s，H-28），13C-NMR（100 MHz，CDCl3）：213.1（C3），59.5（C-10），58.2（C-4），53.1（C-8），42.8（C-18），42.1（C-5），41.5（C-2），41.3（C-6），39.7（C-22），39.3（C-13），38.3（C-14），37.5（C-9），36.0 C-16），35.6（C-19），35.4（C-l1），35.0（C-29），32.8（C-21），32.4（C-17），32.1（C-30），31.8（C-28），30.5（C-15），30.0（C-20），28.2（C-12），22.3（C-1），20.2（C-27），18.6（C-7），18.2（C-25），18.0（C-26），14.7（C-23），6.8（C-24）.該結(jié)果與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)一致，鑒定為木栓酮.

化合物5：白色粉末（氯仿-甲醇），分子式為C35H60O6.可溶于氯仿、丙酮，不溶于石油醚.與硫酸顯紫紅色，Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性.IR光譜示有羥基（3416 cm-1）和酯羰基（1734 cm-1）化合物樣品與β-daucosterol對(duì)照品共薄層Rf值一致，測(cè)混合熔點(diǎn)不下降，故鑒定該化合物為β-胡蘿卜甙.以上數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)與文獻(xiàn)報(bào)道[7]的β-胡蘿卜苷數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為β-胡蘿卜苷.

化合物6：橙黃色油狀物質(zhì)，分子式為C14H18O5.易溶于氯仿、丙酮，254 nm紫外燈下顯藍(lán)色，與碘化鉍鉀反應(yīng)顯淡黃色，與FeCl3反應(yīng)顯紫色，與濃H2SO4顯黑色.1H NMR（400 MHz，CDCl3）：13.60（s，1H，OH-5），6.67（d，J=10.0 Hz，1H，H-4），5.52（d，J=10.0 Hz，1H，H-3），4.00（s，3H，OCH3），3.79（s，3H，OCH3），2.64（s，3H，COCH3），1.50（s，6H，C（CH3）2-2）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）：δ203.5，156.4，155.6，153.8，134.1，126.6，116.0，108.2，105.9，78.3，61.2，61.1，32.1，28.3.以上數(shù)據(jù)與理化分析與文獻(xiàn)[8]一致，該化合物鑒定為leptonol.

化合物7：紅色油狀物質(zhì)，分子式為C16H22O4.1H NMR（400 MHz；CDCl3）給出2個(gè)甲基信號(hào)質(zhì)子[δ 0.97（6H，m，H-6′和H-6"）]，4個(gè)sp2雜化的芳香質(zhì)子信號(hào)[δ 7.51（2H，dd，J=3.4，5.6 Hz，H-3 和H-4），7.71（2H，dd，J=3.4，5.6 Hz，H-2和H-5）].波譜數(shù)據(jù)為1H NMR（400 MHz，CDCl3）：7.71-7.74（m，2H，H-2，5），7.51-7.54（m，2H，H-3，4），4.31（t，J=6.7 Hz，2H，H-1′），4.09（d，J=6.7 Hz，2H，H-1"），1.99-2.09（m，1H，H-2"），1.68-1.76（m，2H，H-2′），1.40-1.49（m，2H，H-3′），0.99（d，J=6.8 Hz，6H，H-3"，H-4"），0.95（t，J=7.4 Hz，3H，H-4′）；由以上信息和數(shù)據(jù)，結(jié)合文獻(xiàn)[9]得出化合物7為鄰苯二甲酸正丁異丁酯.

化合物8：無(wú)色油狀液體，分子式為C17H24O5.易溶于氯仿、丙酮，254 nm紫外燈下有褐色暗斑，6.52（1H，d，J=10.Hz），δ：5.58（1H，d，J=10 Hz）為色烯體系中的特征氫原子δ：3.86（2H，s），3.85（2H，s）為苯環(huán)上化學(xué)環(huán)境相同的氫原子信號(hào)，認(rèn)為甲氧基上H，波譜數(shù)據(jù)為1H NMR（400 MHz，CDCl3）：6.52（d，J=9.9 Hz，1H，H-4），5.58（d，J=9.9 Hz，1H，H-3），4.86（q，J=6.7 Hz，1H，H-1′），3.86（s，3H，OCH3），3.85（s，3H，OCH3），3.72（s，3H，OCH3），3.35-3.45（m，2H，H-1"），1.61（d，J=6.8 Hz，3H，H-2′），1.49（s，3H，CH3-2），1.42（s，3H，CH3-2），1.18（t，J=7.0 Hz，3H，H-2"）；以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)照一致，故化合物8被鑒定為5，7，8-三甲氧基-6-（1′-乙氧乙基）-2，2-二甲基-2H-[1]-苯并吡喃（methylleptol A）.

化合物9：黃色針狀晶體（氯仿），分子式為C14H16O4，mp為 129.5 °C（未校正），易溶于氯仿、丙酮；254 nm紫外燈下暗斑，365 nm紫外燈下棕紅色，與碘化鉍鉀反應(yīng)顯黃色，與FeCl3反應(yīng)顯紫色，與濃 H2SO4顯黑色.1H-NMR（400 MHz，CDCl3）：14.28（1H，s）顯示分子中存在活潑氫；δ：6.65（1H，d，J=10 Hz），δ：5.45（1H，d，J=10 Hz）為色烯體系的特征氫原子（J=10 Hz），δ：3.85（3H，s）為甲氧基的特征信號(hào)；δ：2.60（3H，s），1.44（6H，s）為甲基信號(hào)，前者化學(xué)位移大于2.0說(shuō)明與不飽和碳原子相連，后者6H表明有2個(gè)化學(xué)環(huán)境完全一樣的甲基.波譜數(shù)據(jù)為：1H NMR（400 MHz，CDCl3）：14.27（s，1H，H-4），6.65（d，J=10.0 Hz，1H），5.89（s，1H），5.45（d，J=10.0 Hz，1H），3.85（s，3H），2.60（s，3H，OCH3），1.44（s，6H）；有以上理化性質(zhì)和數(shù)據(jù)，對(duì)照文獻(xiàn)[11]得出化合物9為異吳茱萸酮酚（isoevodionol）.

化合物10：黃色油狀液體，分子式為C16H20O4，易溶于氯仿、丙酮；254 nm紫外燈下顯藍(lán)色，365 nm下紅棕色，與碘化鉍鉀反應(yīng)顯淡黃色.1H-NMR（400 MHz，CDCl3）：6.56（1H，d，J=10 Hz），δ：5.59(1H,d，J=10 Hz)苯并吡喃環(huán)的H-3和H-4特征質(zhì)子信號(hào)；δ：3.85（s，3H），δ：3.84（s，3H），δ：3.67（s，3H）均為-OCH3上信號(hào)，1.44（6H，s）為-CH3上H信號(hào)，后者6H表明有2個(gè)-CH3化學(xué)環(huán)境完全一樣，波譜數(shù)據(jù)為：1H NMR（400 MHz，CDCl3）：δ：6.75（dd，J1=18.0 Hz，J2=12.0 Hz，1H，H-1′），6.56（d，J=10.0 Hz，1H，H-4），6.02（dd，J1=18.0 Hz，J2=2.5 Hz，1H，H-2"），5.59（d，J=9.9 Hz，1H，H-3），5.37（dd，J1=12.0 Hz，J2=2.5 Hz，1H，H-2′），3.85（s，3H，OCH3），3.84（s，3H，OCH3），3.67（s，3H，OCH3），1.47（s，6H，gem-dimethyl）.有以上理化性質(zhì)和數(shù)據(jù)，對(duì)照文獻(xiàn)[10]得出化合物10為leptene A.

化合物11：柱狀結(jié)晶，分子式為C16H20O5，易溶于氯仿、丙酮，mp較低為57.9～61.0°C（未校正）；254 nm紫外燈下顯藍(lán)色熒光，與碘化鉍鉀反應(yīng)顯淡黃色，與濃H2SO4顯黑色.1H-NMR（400 MHz，CD?Cl3）：6.47（1H，d，J=10 Hz），：5.56（1H，d，J=10 Hz）為色烯體系的特征氫原子（J=10 Hz），δ：3.84（3H，s）為甲氧基的特征信號(hào)；δ：3.85（s，3H），δ：3.84（s，3H），δ：3.67（s，3H）均為-OCH3 上信號(hào)，1.47（6H，s）為-CH3上H信號(hào)，后者6H表明有2個(gè)化學(xué)環(huán)境完全一樣的甲基.波譜數(shù)據(jù)位：1H NMR（400 MHz，CDCl3）:δ 6.75（dd，J1=18.0 Hz，J2=12.0 Hz，1H，H-1′），6.56（d，J=10.0 Hz，1H，H-4），6.02（dd，J1=18.0Hz，J2=2.5 Hz，1H，H-2"），5.59（d，J=9.9 Hz，1H，H-3），5.37（dd，J1=12.0 Hz，J2=2.5 Hz,1H，H-2′），3.85（s，3H，OCH3），3.84（s，3H，OCH3），3.67（s，3H，OCH3），1.47（s，6H，gem-dimethyl）.以上分析和數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]一致，鑒定為evodione.

化合物12：白色粉末，分子式為C10H8O4，溶于氯仿、甲醇，mp 202～204℃.在紫外燈，365 nm顯亮藍(lán)色熒光，5%硫酸-乙醇溶液中不顯色，三氯化鐵顯色呈陽(yáng)性，說(shuō)明含有酚羥基.1H NMR（400 MHz，CDCl3）譜圖中δ：7.78（1H，d，J=9.6 Hz，H-4）和δ：6.12（1H，d，J=9.2 Hz，H-3）處的兩個(gè)氫信號(hào)為典型的香豆素類化合物中的3位，4位的特征峰信號(hào)，可推斷此化合物為香豆素類化合物；7.02（1H，s，H-5）和6.67（1H，s，H-8）處為苯環(huán)上處于對(duì)位的兩個(gè)氫；3.81（3H，s，6-OCH3）處為苯環(huán)上的甲氧基信號(hào) ；6.12（1H，d，J=9.6Hz，3-H），7.78（1H，d，J=9.6Hz，4-H），7.02（1H，s，5-H），6.67（1H，s，8-H），3.81（3H，s，-OCH3）.以上理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[12]的東莨菪素基本一致，故鑒定化合物12為東莨菪素（scopoletin）.

3 結(jié)論

從海南產(chǎn)三叉苦莖提取部分分離得到的12個(gè)化合物，分別鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯（phthalic acid dibutyl ester）（1），為香蘭素（Vanillin）（2），β-谷甾醇（β-sitosterol）（3），木栓酮（riedelin）（4），β-胡蘿卜苷（β-daucosterol）（5），leptonol（6），苯甲酸正丁異丁酯（phthalic acid butyl isobutyl ester）（7），methylleptol A（8），異吳茱萸酮酚（isoevodionol）（9），lepten A（10），evodione（11），東莨菪素 (scopo?letin)（12），化合物（2）、（4）、（7）和（12）為首次從該植物中分離得到.

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Study on the Chemical Constituents from the stems of Melicope ptelefolia（Champ.ex Benth.）Hartley in Hainan

BAO Changyu1，F(xiàn)AN Chaojun1，CHEN Zhanjuan1，BI Heping1，2＊
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Haikou571158，China）

To research the chemical constituents from the stems ofMelicope ptelefolia（Champ.ex Benth.）Hartley in hainan,12 compounds were obtained by silica chromatography and preparative TLC from the stems ofMelicope ptelefolia（Evodia lepta Spr.Merr.）The chemical structures of these compounds were identified by modern spectroscopy as well as physico-chemical analysis.These compounds were identified to be phthalic acid dibutyl ester（1），vanillin（2），β-sitos?tero（l3），riedelin（4），β-daucostero（l5），leptono（l6），phthalic acid butyl isobutyl ester（7），methylleptol A（8），isoevo?dionol(9)，lepten A（10），evodione（11），（scopoletin）（12）.Compound（2）、（4）、（7）、（12）was isolated from Evodia lepta Spr.Merr.for the first time.

Evodia lepta Spr.Merr.；Extraction；Isolation；chemical constituents；structure identification

R 284.2

A

1674-4942（2012）01-0066-04

2012-01-10

海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（80418）

*通訊作者

黃 瀾