高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法測(cè)定甘桔冰梅片中桔梗皂苷D含量

彭善貴，文永盛

(四川省成都市食品藥品檢測(cè)中心，四川 成都 610045)

甘桔冰梅片是由桔梗、甘草、冰片、薄荷等8味中藥加工制成的片劑，現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為WS－10871(ZD－0871)－2002。桔梗為方中君藥，用量較大，其宣肺利咽、祛痰排膿[1]的作用與成藥功效密切相關(guān)，桔梗含量高低直接影響藥品質(zhì)量。桔梗含多種皂苷，以桔梗皂苷D為主[2]。筆者參照2010年版《中國(guó)藥典(一部)》桔梗含量測(cè)定項(xiàng)，用高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(HPLC－ELSD)法測(cè)定甘桔冰梅片中桔梗皂苷D，方法準(zhǔn)確、可靠、操作簡(jiǎn)便?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀；Waters 2424型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；UV－2501PC型紫外分光光度計(jì)(日本島津)；AE－240型電子天平；SK250H型超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。甘桔冰梅片(重慶華森制藥有限公司，批號(hào)為100901)；桔梗皂苷D對(duì)照品(成都曼思特生物科技有限公司，純度標(biāo)示為99.8%)；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑試藥均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈－水(26∶74)；流速：1.0mL/min；漂移管溫度：85℃，氣體流速2.9 SLPM/min。理論板數(shù)按桔梗皂苷D峰計(jì)算不低于4 000。在此條件下，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取桔梗皂苷D對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1mL含0.5mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取本品30片，去包衣，稱(chēng)重，研細(xì)，取約15片重，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理(功率為250W，頻率為40 kHz) 40min，放冷，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次(30，30，25，20 mL)，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30mL，棄去氨試液，蒸干正丁醇液，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

圖1 HPLC－ELSD圖譜

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：去除處方中的桔梗，制備陰性樣品。按上述供試品溶液制法制成缺桔梗的陰性對(duì)照品溶液。將對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液在同一條件下測(cè)定，結(jié)果表明，方法專(zhuān)屬性良好，見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察：精密稱(chēng)取桔梗皂苷D對(duì)照品4.76 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各2，5，10，15，20，25μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積的常用對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)(Y)、進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，得回歸方程 Y=1.368X+5.262 5，r=0.999 2(n=6)。結(jié)果表明，桔梗皂苷D進(jìn)樣量在0.952～11.900μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取0.476g/L的對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定桔梗皂苷D峰面積。結(jié)果的 RSD=1.28%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，12，24 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定桔梗皂苷D峰面積。結(jié)果的RSD=1.26% (n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品5份，按供試品溶液制備方法制備并測(cè)定含量。結(jié)果平均含量為0.662 mg/g，RSD=0.74%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱(chēng)取已知含量的樣品(批號(hào)為100901，桔梗皂苷D含量為0.662mg/g)6份，約2.5g，置錐形瓶中，分別精密加入1.802g/L桔梗皂苷D對(duì)照品溶液1mL，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品(批號(hào)分別為100901，100801，100601)，測(cè)定含量。結(jié)果平均含量為0.66mg/g。

3 討論

曾對(duì)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定條件(漂移管溫度、載氣流量、最低檢測(cè)限)進(jìn)行了考察，結(jié)果漂移管溫度為85℃，氣體流速為2.9 SLPM/min時(shí)最佳。如果試驗(yàn)中漂移管溫度和氣體流速不穩(wěn)定，高效液相色譜圖會(huì)漂移，影響桔梗皂苷D的出峰時(shí)間及峰面積。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

在選擇提取溶劑時(shí)，曾對(duì)甲醇、乙醇、50%甲醇進(jìn)行了比較，結(jié)果50%甲醇提取的效率較高、樣品溶液顏色深淺適中、色譜圖背景無(wú)干擾，處理方法簡(jiǎn)便、可行。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：259－260.

[2]夏 泉，董婷霞，詹華強(qiáng)，等.HPLC－ELSD法測(cè)定不同來(lái)源桔梗中桔梗皂苷E的含量 [J].藥物分析雜志，2006，26(5)：637－639.