高效液相色譜法測(cè)定心可舒片中丹參素鈉和原兒茶醛含量

屈 蓉，仇雅靜，陳驍鵬，葉 慧

(江蘇省泰州市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 泰州 225300)

心可舒片為2011年江蘇省評(píng)價(jià)性抽樣品種之一，收載于2010年版《中國(guó)藥典(一部)》[1]，由丹參、葛根、三七、山楂、木香5味藥組方。丹參具有活血化瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰的功效，為心可舒片的主藥之一。生產(chǎn)工藝中，丹參為加水煎煮兩次，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮使用。丹參素鈉和原兒茶醛為丹參的主要水溶性成分[2]，這兩者的測(cè)定方法主要有分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、電化學(xué)法、毛細(xì)管電色譜法和微流控芯片法[3]。標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)原兒茶醛進(jìn)行了薄層鑒別，未對(duì)其含量進(jìn)行質(zhì)量控制。考慮到基層檢驗(yàn)檢測(cè)單位儀器的普及性，采用高效液相色譜法對(duì)丹參中的水溶性成分丹參素鈉、原兒茶醛進(jìn)行含量測(cè)定，為全面控制心可舒片的質(zhì)量提供了可靠依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(Waters2695/2996/Empower色譜系統(tǒng))。丹參素鈉對(duì)照品、原兒茶醛對(duì)照品(供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為110855－200809和110810－200506)；心可舒片(山東沃華醫(yī)藥科技股份有限公司)；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry C18柱(150mm×3.9mm，3.5μm)；流動(dòng)相：甲醇－0.5%醋酸溶液(10∶90)；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備

精密稱取丹參素鈉對(duì)照品25.03 mg，置50 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，作為對(duì)照品貯備液A。精密稱取原兒茶醛對(duì)照品10.56mg，置100mL量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，作為對(duì)照品貯備液B。取樣品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得供試品溶液。取除丹參外的處方藥材，參照制劑生產(chǎn)工藝制備陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制備，即得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：分別吸取線性關(guān)系考察項(xiàng)下的對(duì)照品混合液、上述供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，結(jié)果見圖1。供試品溶液中丹參素鈉、原兒茶醛達(dá)到基線分離，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾，基線穩(wěn)定，方法可行。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取對(duì)照品貯備液A，分別精密吸取2，4，6，8，10mL，置20mL量瓶中；另取對(duì)照品貯備液B，分別精密吸取1，3，5，7，9mL，置上述相應(yīng)的20mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，制成對(duì)照品混合液。分別進(jìn)樣10μL，在上述色譜條件下，測(cè)得峰面積。以峰面積 Y為縱坐標(biāo)、對(duì)照品質(zhì)量濃度 X(μg/mL)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得丹參素鈉回歸方程為 Y=5 076.8 X+ 17 337，r=0.999 1(n=5)，線性范圍為50.06～250.30μg/mL；原兒茶醛回歸方程為 Y=39 492X－17 395，r=0.999 5(n=5)，線性范圍為5.28～47.52μg/mL。

檢測(cè)限確定：分別取質(zhì)量濃度為100.12μg/mL的丹參素鈉和15.84μg/mL的原兒茶醛對(duì)照品溶液，稀釋至適當(dāng)質(zhì)量濃度，按信噪比3∶1計(jì)算檢測(cè)限。本色譜條件下，丹參素鈉檢測(cè)限為9.34μg/mL，原兒茶醛檢測(cè)限為1.76μg/mL。

精密度試驗(yàn)：精密吸取線性關(guān)系考察項(xiàng)下第2個(gè)質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，在擬訂的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果丹參素鈉的 RSD為0.7%(n=5)，原兒茶醛的RSD為0.5%(n=5)。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取批號(hào)為110449的樣品5份，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果丹參素鈉的 RSD為1.1%(n=5)，原兒茶醛的RSD為1.3%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取批號(hào)為110449的供試品溶液10μL，按上述色譜條件，分別于0，2，4，8，12，24 h時(shí)各進(jìn)樣1次，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果丹參素鈉的 RSD為1.0%，原兒茶醛的 RSD為1.2% (n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取批號(hào)為110449的樣品5份，每份約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品貯備液A 3mL、對(duì)照品貯備液B 2mL，按供試品溶液制備方法制備，在上述色譜條件下，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.4 樣品含量測(cè)定

精密稱取不同批號(hào)的15批樣品，按供試品溶液制備方法制備，在上述色譜條件下，進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/片)

3 討論

將丹參素鈉和原兒茶醛對(duì)照品溶液分別在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外吸收掃描，丹參素鈉在282 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，原兒茶醛在278 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。綜合考慮，選用280 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

試驗(yàn)中用甲醇和50%甲醇作為溶劑并進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，前者結(jié)果明顯優(yōu)于后者，故選用50%甲醇作為溶劑。選用25mL和50mL 50%甲醇作溶劑進(jìn)行考察，所測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差異，從環(huán)保節(jié)約的角度出發(fā)，選用25 mL作為提取量?？疾炝?0，30，45 min 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，結(jié)果顯示，超聲提取30min所測(cè)結(jié)果高于提取20min，且與45min無(wú)明顯差異，故選擇超聲處理30min。

對(duì)15個(gè)批號(hào)的樣品中丹參素鈉和原兒茶醛含量之和進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算，得 RSD為36.5%，說(shuō)明各個(gè)批號(hào)的差異性較大，說(shuō)明有必要增加此項(xiàng)目對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制。今后還可進(jìn)一步開展心可舒片中丹參指紋圖譜的研究工作。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：604－605.

[2]張文生，葉正良，岳洪水，等.丹參藥材指紋圖譜研究[J].中藥材，2001，24(7)：478－480.

[3]吳小林，鐘曉維，李偶連，等.微流控芯片對(duì)丹參滴注液中丹參素和原兒茶醛的測(cè)定[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2008，27(8)：885－887.