豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷與防治

銀梅,唐海蓉,寧紅梅,陳桂香

（河南科技學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453003）

1 發(fā)病情況

新鄉(xiāng)市某規(guī)?；i場于2012年2月先有7頭仔豬發(fā)病,該廠技術(shù)人員及時(shí)使用青霉素、地塞米松、氨基比林、維生素C等藥物治療,但是效果不明顯.隨后,立即采取隔離、消毒、更新飼料等措施.然而,幾天后又發(fā)現(xiàn)育肥豬和母豬相繼發(fā)病,2周內(nèi)共有27頭豬發(fā)病,其中15頭死亡.根據(jù)發(fā)病的情況初步懷疑為豬瘟.

2 臨床癥狀與病理變化特點(diǎn)

發(fā)病豬體溫升高,達(dá)41～42℃；耳根、四肢和臀部皮膚發(fā)紅；精神沉郁,食欲減退,渴欲增強(qiáng)；眼結(jié)膜發(fā)紅,有的發(fā)紺；呼吸困難；眼角有膿性分泌物；有的豬腹瀉,糞便腥臭,有的患病豬排便干硬；病豬站立不穩(wěn),行走共濟(jì)失調(diào),喜臥,瀕死期呈游泳狀,最終衰竭而死亡.

共剖檢6頭,其中2頭為病情較嚴(yán)重的豬,4頭為病死豬.剖檢后發(fā)現(xiàn)病理變化比較相似：胸腔均有大量積液；全身淋巴結(jié)腫大,尤其是腸系膜淋巴結(jié)腫大非常明顯,顏色呈紅色,有的呈紫色,切面多汁,呈大理石樣；肝臟腫大,顏色變淺；脾臟邊緣梗死,呈紫黑色；腎臟表面有散在的數(shù)量不等的出血點(diǎn)；膀胱黏膜有少量出血點(diǎn)；喉頭黏膜有少量的出血點(diǎn)；扁桃體點(diǎn)狀出血；回腸和盲腸黏膜有不同程度的出血性卡他性炎癥特點(diǎn).

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 涂片鏡檢

取病死豬心、脾、腎、淋巴結(jié)等組織涂片,染色,鏡檢.未觀察到細(xì)菌.

3.2 細(xì)菌培養(yǎng)

將切取病死豬心、脾、腎、淋巴結(jié)等組織無菌操作接種在麥康凱、血液、瓊脂、巧克力瓊脂平板及肉湯培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)24 h,觀察細(xì)菌生長狀況.經(jīng)培養(yǎng)后,培養(yǎng)基上均無細(xì)菌生長.

3.3 ELISA方法診斷

用檢測豬瘟抗原ELISA診斷試劑盒診斷.具體操作如下：從試劑盒取出一條（8個(gè)孔）用抗體包被的微量反應(yīng)板,設(shè)1個(gè)陽性對照孔、1個(gè)陰性對照孔,相應(yīng)位置做好標(biāo)記.先在8個(gè)反應(yīng)孔中都加入50 μL的檢測抗體,然后在陰性對照孔中加50 μL陰性對照樣品,在陽性對照孔中加50 μL陽性對照樣品,在剩下的6個(gè)反應(yīng)孔中分別加入50 μL被檢血清樣品,用振蕩器振蕩,將反應(yīng)板中的溶液混勻.在37℃孵育2 h,用PBST洗滌5次.將反應(yīng)板拍干；在各孔中加入辣根過氧化酶標(biāo)記二抗50 μL,在37℃孵育20 min,洗滌5次,將反應(yīng)板在吸水紙上拍干；在每個(gè)反應(yīng)孔中加入TMB底物100 μL；在暗處室溫下孵育10 min,同時(shí)觀察顏色變化；最終在每個(gè)反應(yīng)孔中加入終止液100 μL終止反應(yīng)（加入的順序同底物的加入順序）；在酶標(biāo)儀上測量樣品與對照孔在450 nm波長的吸光值.

TMB底物加后,檢測樣品孔和陽性對照孔顏色均呈深藍(lán)色,陰性對照孔顏色未發(fā)生變化.450 nm波長下,陽性對照孔OD值為2.23,陰性對照孔OD值為0.007,被檢測6個(gè)樣品OD值分別為2.08、1.98、2.78、2.54、2.12、1.87.

本檢測試劑盒的判定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)為450 nm波長的OD值大于0.5為陽性,0.3～0.5為疑似,小于0.3為陰性.根據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn),確定被檢測樣品結(jié)果均為陽性,從而確診為豬瘟.

4 防治

隔離病豬,全群徹底消毒,減少各種應(yīng)激,加強(qiáng)營養(yǎng).對全群無癥狀母豬50頭份、育肥豬30頭份、仔豬10頭份豬瘟弱毒疫苗進(jìn)行緊急免疫.對病豬,肌肉注射抗豬瘟血清、黃芪多糖注射液和氟苯尼考注射液,每日2次,連用7 d.發(fā)熱明顯的豬只肌肉注射柴胡注射液和氨基比林注射液,進(jìn)行退熱.經(jīng)過治療癥狀較輕病豬逐漸康復(fù),但重癥豬陸續(xù)死亡.對逐漸康復(fù)的病豬也用10頭份豬瘟弱毒疫苗進(jìn)行免疫.繼續(xù)觀察40 d未出現(xiàn)新病例,本次疫情得到控制.

5 討論

目前,因?yàn)榉N豬帶毒、疫苗質(zhì)量、野毒在豬群中的循環(huán)傳播、混合感染、抗生素的濫用等原因而出現(xiàn)豬體的免疫力下降,免疫失敗,新生仔豬免疫耐受等原因?qū)е仑i群豬瘟的感染率和發(fā)病率仍然很高,嚴(yán)重影響著我國養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展.隨著疫苗的廣泛使用,豬瘟發(fā)病情況日趨復(fù)雜,出現(xiàn)了隱性感染豬瘟、溫和型豬瘟、非典型豬瘟、母豬帶毒綜合征等感染的新形式[1],并且非典型豬瘟、溫和型豬瘟和隱形感染豬瘟都缺乏典型的流行病學(xué)特點(diǎn)、特征性的臨床癥狀和剖檢病理變化,僅依臨床檢查很難診斷,必須結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷方能確診,極易錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)[2].

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是基于抗原與抗體特異性反應(yīng)原理的一種方法[3].該技術(shù)已經(jīng)被普遍應(yīng)用于動物重大傳染病的診斷和流行病學(xué)調(diào)查.同時(shí),ELISA試劑盒的出現(xiàn)使得該方法所用到的試劑的保存條件易滿足,并且使得人工操作的程序得到優(yōu)化,簡單易行.ELISA方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn),這對于疫病病原的快速檢測及疫病的預(yù)防、診斷以及治療具有十分重要的意義[4].

豬瘟是一種發(fā)病率和死亡率都很高的后天免疫抑制性疾病,一旦發(fā)生容易繼發(fā)感染,病情加重和復(fù)雜化.對重癥豬瘟目前尚無較好的治療和控制方法,應(yīng)盡早淘汰,減少損失.

[1]王美君,侯艷紅,倪嬌,等.豬瘟免疫失敗的原因及其防治對策[J].中國畜牧獸醫(yī),2011,38（2）：217-219.

[2]王三虎,趙坤,韓瑞.豬瘟的研究進(jìn)展[J].河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2008,36（2）：69-76.

[3]楊漢春.動物免疫學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2012.

[4]張仁標(biāo).四種豬瘟ELISA試劑盒的比較分析[J].福建畜牧獸醫(yī),2011,33（5）：24-25.