洋蔥組培中應(yīng)注意的幾個(gè)問題

潘美紅，陳振泰，楊海峰，薛萍，孫桂樂

（江蘇連云港市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，222000）

洋蔥是百合科蔥屬植物，近年來組織培養(yǎng)技術(shù)在洋蔥育種上的應(yīng)用得到了迅速發(fā)展。經(jīng)多次試驗(yàn)，在洋蔥組培過程中，形成了以下幾個(gè)觀點(diǎn)。

1 打破休眠

洋蔥在夏季收獲后，即進(jìn)入1.5～2.5個(gè)月的休眠期，期間鱗莖不萌發(fā)，用此期的洋蔥進(jìn)行組織培養(yǎng)會(huì)大大影響效果。一般從大田取回的洋蔥球可通過赤霉素處理或低溫處理來打破休眠。具體方法有：①赤霉素處理，將取回的洋蔥球放入5～10mg/L赤霉素溶液中處理18～24 h；②低溫處理，在大田選擇理想的洋蔥球，取回實(shí)驗(yàn)室，置于4～5℃冰箱中冷藏3～4周。

但是，赤霉素處理對(duì)洋蔥組培效果的影響有待進(jìn)一步研究；低溫處理方法簡單易行，且無副作用。

2 消毒方式

由于洋蔥鱗莖生長在地下，帶菌量多，本著既能有效消毒，又要不殺死材料的原則，通過試驗(yàn)比較，較為有效的消毒方式為：將冷藏后的洋蔥球剝除外皮至直徑為2～3 cm，用自來水沖洗干凈，拿至超凈工作臺(tái)，用75%酒精浸泡1 min（搖晃），然后用0.1%HgCl2溶液浸泡15min（搖晃），再用無菌水沖洗5次后，準(zhǔn)備接種。

3 外植體形式

將消毒好的洋蔥鱗莖放入已消毒并放有吸水紙的培養(yǎng)皿中，用吸水紙將鱗莖表面水分吸干，用手術(shù)刀將鱗莖切至鱗莖盤為1～2 mm厚，貼近鱗莖盤的鱗莖為（4～5）mm×（4～5）mm，高 0.5～1 mm 的外植體，再用刀片在鱗莖表面做“井”字形劃痕，刀深2～3mm，打破頂端優(yōu)勢，利于側(cè)芽發(fā)生。

4 影響增殖的因素

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同品種洋蔥在同一個(gè)培養(yǎng)基上的增殖效果不同，特別是在啟動(dòng)不定芽萌發(fā)時(shí)表現(xiàn)尤為明顯，因此要針對(duì)不同品種，采用不同組分的培養(yǎng)基。

①通過多次試驗(yàn)證明，不同品種的洋蔥在以MS和以花寶（Hyponex，美國花寶公司生產(chǎn)）為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基上增殖，其效果不盡相同。

②在合適的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，添加合適的生長調(diào)節(jié)劑類型，并配以合適的濃度和配比，是影響增殖的關(guān)鍵。

③繼代過程中，在MS培養(yǎng)基中加入適量的多效唑，可以提高增殖率，但是多效唑不能連續(xù)使用，否則可能會(huì)起到負(fù)效果。

5 繼代過程

經(jīng)過多次繼代，洋蔥組織材料出現(xiàn)老化現(xiàn)象；不少組培苗會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的玻璃化現(xiàn)象，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，繼代3～4次后，在增殖培養(yǎng)基中加入適量的間苯三酚，可以適當(dāng)?shù)鼐徑饣驕p少組織材料老化、玻璃化現(xiàn)象。但是，間苯三酚也不能連續(xù)使用，最好間隔3～4次后再用，但是，該方法不能徹底解決問題。另外，洋蔥經(jīng)過多次繼代后，由于組培苗體內(nèi)激素的累積或消耗程度未知，培養(yǎng)基中的生長調(diào)節(jié)劑的量和配比不好控制，一直沿用同樣的培養(yǎng)基配方，效果都比早期的差。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，洋蔥多次繼代后，在增殖培養(yǎng)基中也能生根，影響了增殖效果，因此，進(jìn)行洋蔥組培時(shí)，繼代一定時(shí)間后最好就注入新的外植體，以保證組培的質(zhì)量。但是，洋蔥繼代幾次能獲得最好的增殖效果，有待于進(jìn)一步研究。