針刺對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)組織病理學(xué)的影響

逄紫千，閻 慧，解占峰

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117)

糖尿病是一種常見(jiàn)多發(fā)的慢性代謝性疾病,糖尿病神經(jīng)病變(DPN)是糖尿病慢性并發(fā)證中發(fā)病率最高的1種，且發(fā)病較早，甚至隱性糖尿病既有周圍神經(jīng)病變,已成為糖尿病患者致殘的主要原因。該病的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，目前多學(xué)者認(rèn)為主要是代謝障礙和微血管病變導(dǎo)致神經(jīng)纖維密度減少或脫失，遠(yuǎn)端軸索變性及節(jié)段性脫髓鞘，引起神經(jīng)傳導(dǎo)障礙。由于DPN發(fā)病隱匿,約40%～60%的患者無(wú)明顯癥狀，因此在糖尿病早期，臨床上周圍神經(jīng)病變癥狀及體征多不明顯，但其神經(jīng)結(jié)構(gòu)、功能可能已受到損害。研究證明，在人和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性糖尿病的早期周圍神經(jīng)病變是可逆的，而晚期不可逆。因此,早期發(fā)現(xiàn)DPN顯得尤為重要。神經(jīng)電生理的測(cè)定為DPN的早期診斷提供了客觀依據(jù),尤其在無(wú)神經(jīng)病變癥狀和體征者中，可發(fā)現(xiàn)亞臨床病變[1]。本實(shí)驗(yàn)采用針刺的方法對(duì)糖尿病大鼠早期神經(jīng)電生理及相應(yīng)病理的變化進(jìn)行觀察，旨在發(fā)現(xiàn)針刺對(duì)DPN不同病變程度的神經(jīng)電生理變化特點(diǎn)，為DPN的早期診斷、治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 冰凍切片機(jī)(CM1900型，LEICA公司，日本)，透射電子顯微鏡(2000型，JEM公司，日本)，圖像分析儀(V3.3，Tiger公司，美國(guó))，光學(xué)顯微鏡及攝像系統(tǒng)(980153型，COIC公司，日本)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥物 STZ(Sigma公司)；0.1 mol/L檸檬酸緩沖液，4%多聚甲醛，2.5%戊二醛，10%水合氯醛。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 90只Wistar雄性大鼠6～8周齡，體質(zhì)量180～220 g。隨機(jī)分為6組，對(duì)照組、糖尿病組、西藥1組、西藥2組、治療1組(DM大鼠成模后1個(gè)月開(kāi)始給藥)和治療2組(DM成模后2個(gè)月開(kāi)始給藥)。

1.4 動(dòng)物制模方法 大鼠禁食不禁水24 h后，用STZ溶于0.1 mol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH 4.5) 配制成濃度為1 %的溶液,以60 mg/ kg劑量給大鼠單次腹腔注射,對(duì)照組以等劑量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射平行進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。72 h 后尾靜脈采血測(cè)血糖,血糖高于16.7 mmol/L的大鼠入選糖尿病大鼠模型。

1.5 治療方法 造模成功后，西藥1組：成模1個(gè)月后，每日喂服彌可保,劑量為15 μg/次，連續(xù)治療4周；西藥2組：成模2個(gè)月后開(kāi)始治療，方法同西藥1組。針刺1組：成模后1個(gè)月開(kāi)始治療，選肺俞、脾俞、腎俞、三陰交、合谷、足三里6個(gè)穴位，隔日針刺1次，采用平補(bǔ)平瀉法，針上通電，疏密波，中等強(qiáng)度刺激，每次治療30 min。連續(xù)治療4周；針刺2組：成模后2個(gè)月開(kāi)始治療，方法同針刺1組。

1.6 時(shí)間點(diǎn) 對(duì)照組和糖尿病組分別在造模成功后4、8、12處死部分大鼠取材。西藥組、針刺組分別在針刺1、2個(gè)月時(shí)取材。

1.7 組織病理標(biāo)本的制備 將用2.5%戊二醛中和4%多聚甲醛中固定好的取出的神經(jīng)用10%的多聚甲醛溶液固定大鼠坐骨神經(jīng)組織依次經(jīng)過(guò)軟蠟和3次硬蠟，最后硬蠟包埋，切成14 μm的厚度;染色；梯度乙醇脫水；二甲苯透明；中性樹(shù)膠封片。本實(shí)驗(yàn)采用3種染色方式,其中Glees-Marsland銀染色，結(jié)果軸索棕黑色；髓鞘Weil鐵明礬蘇木精染色，結(jié)果:髓鞘黑蘭色。

2 病理結(jié)果

對(duì)照組大鼠坐骨神經(jīng)有髓纖維分布密集均勻，單個(gè)纖維飽滿，髓鞘薄厚均勻，軸索粗細(xì)均勻。與對(duì)照組相比,8周時(shí)糖尿病組的坐骨神經(jīng)纖維排列紊亂，髓鞘密度不均勻，部分節(jié)段性髓鞘脫失明顯可見(jiàn),施萬(wàn)細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比明顯減少。12周時(shí)比8周時(shí)神經(jīng)纖維排列稀疏，部分軸突節(jié)段性消失，部分郎飛節(jié)消失，可見(jiàn)沃勒變性，髓鞘脫失更明顯并可見(jiàn)髓球形成，多數(shù)軸突節(jié)段性萎縮性變細(xì)或消失。治療1組經(jīng)過(guò)治療后，與糖尿病8周比較神經(jīng)纖維排列趨向一致，較飽滿、均勻，髓鞘厚度增加且變均勻，病理切片顯示優(yōu)于西藥1組；治療2組仍可見(jiàn)髓鞘脫失與西藥2組對(duì)比無(wú)明顯差異。

3 討論

DPN的主要病理改變表現(xiàn)為周圍神經(jīng)的脫髓鞘和(或)軸索變性。這些改變既影響粗的和細(xì)的有髓纖維，也影響無(wú)髓纖維。但是髓鞘受累在先抑或軸索病變?cè)谙葎t有不少爭(zhēng)論。很多實(shí)驗(yàn)證實(shí),STZ誘導(dǎo)大鼠糖尿病成模后1～2個(gè)月就可觀察到與人類DPN相似的病理改變[2]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)DPN大鼠的坐骨神經(jīng)進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)糖尿病成模后8周時(shí)，坐骨神經(jīng)光鏡下均可見(jiàn)少量髓鞘脫失，12周時(shí)髓鞘脫失明顯，并有軸索萎縮變性；有髓神經(jīng)纖維髓鞘和軸索的改變更明顯，這與以往文獻(xiàn)[3-4]報(bào)道的坐骨神經(jīng)的病理改變相符。此結(jié)果表明DPN早期以脫髓鞘為主要病理改變,且小的無(wú)髓神經(jīng)纖維也同時(shí)受累[5-6]。坐骨神經(jīng)病理改變隨時(shí)間加重，這與臨床上DPN呈漸進(jìn)性的表現(xiàn)一致。4周時(shí)各項(xiàng)電生理指標(biāo)已出現(xiàn)異常，而病理改變?cè)?周時(shí)出現(xiàn)，顯示電生理異常的出現(xiàn)早于形態(tài)學(xué)改變,與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致。

糖尿病患者，臨床上常表現(xiàn)為肢體末端的神經(jīng)癥狀，然而這并不一定就表明有遠(yuǎn)端的病理變化過(guò)程。新近許多研究表明，糖尿病周圍神經(jīng)病變患者的神經(jīng)近端也常受累。如Weis等[8]對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型的活檢發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)遠(yuǎn)端尚未出現(xiàn)異常時(shí)，神經(jīng)近端即可出現(xiàn)節(jié)段性脫髓鞘改變。研究還顯示STZ誘導(dǎo)的DPN模型中坐骨神經(jīng)與股二頭肌、蚓狀肌的肌梭內(nèi)神經(jīng)纖維受累程度相似,說(shuō)明周圍神經(jīng)的近、遠(yuǎn)端在實(shí)驗(yàn)性DPN的早期即同等受累。

本實(shí)驗(yàn)是通過(guò)肌電圖檢測(cè)和組織病理切片觀察所得為改善DPN大鼠周神經(jīng)有髓纖維的形態(tài)及功能而實(shí)現(xiàn)的[9]。從針刺治療發(fā)現(xiàn)及尋找理想的治療時(shí)機(jī)入手,進(jìn)行針刺防治DPN的機(jī)制研究。對(duì)無(wú)癥狀及體征時(shí)即可能有神經(jīng)損害的隱匿性發(fā)病的DPN，并且近端神經(jīng)在遠(yuǎn)端神經(jīng)病變尚不明顯時(shí),已經(jīng)出現(xiàn)病變特征的DPN是臨床難以預(yù)防的，本實(shí)驗(yàn)選取背俞穴及四肢腧穴，針對(duì)上、中、下三焦的癥狀配合腧穴在神經(jīng)節(jié)段上離所調(diào)節(jié)臟腑的位置關(guān)系，進(jìn)行針刺治療，對(duì)針刺前后、不同階段的DPN大鼠組織病理切片比較，可以得出,從組織病理及之前所作神經(jīng)電生理的研究2個(gè)方面觀察,在DPN早期針刺治療效果優(yōu)于晚期治療,能明顯改善神經(jīng)傳導(dǎo)功能，且早期針刺治療優(yōu)于單純西藥治療[9]。H-反射、F波在治療前后改變均有顯著差異,這肯定了針刺對(duì)近端神經(jīng)的治療作用。不同時(shí)期針刺對(duì)DPN大鼠周圍神經(jīng)的脫髓鞘樣病變和軸索損害均有明顯的改善作用。提示針刺對(duì)DPN具有一定的防治作用,其作用可能是通過(guò)辨證組方發(fā)揮中醫(yī)整體調(diào)節(jié)作用,通過(guò)多系統(tǒng)產(chǎn)生良性的調(diào)節(jié)而實(shí)現(xiàn)對(duì)DPN大鼠周圍神經(jīng)有髓纖維的形態(tài)及功能改善而實(shí)現(xiàn)的。

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