小凹蛋白-1在腦缺血／再灌注損傷后基質(zhì)金屬蛋白酶的活化和血腦屏障破壞中的作用及其機(jī)制

鄭國慶 董其謙 王小同 王紀(jì)佐 顧 勇 沈劍剛

1浙江省溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，溫州325027；2天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，天津300211；3香港大學(xué)中醫(yī)藥藥學(xué)院，香港

目的：研究缺血／缺氧后，小凹蛋白-1對基質(zhì)金屬蛋白酶在腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。方法：在體分離腦缺血／再灌注損傷大鼠的腦微血管，采用免疫印跡法檢測小凹蛋白-1、基質(zhì)金屬蛋白酶-2和基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)；采用免疫熒光檢測缺血／再灌注損傷后腦微血管小凹蛋白-1的表達(dá)；采用原位明膠酶譜法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-2／-9活性。應(yīng)用針對小凹蛋白-1的特異性小分子干擾RNA處理后，采用體外明膠酶譜法檢測原代培養(yǎng)的腦血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2活性。結(jié)果：在分離的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中，基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達(dá)在缺血／再灌注6h明顯升高，而基質(zhì)金屬蛋白酶-9在缺血／再灌注損傷48h時顯著增加。與假手術(shù)組比較，缺血／再灌注損傷后基質(zhì)金屬蛋白酶活性明顯增加。在分離的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中，缺血／再灌注損傷6h、24h和48h，小凹蛋白-1表達(dá)下降；缺血／再灌注組的小凹蛋白-1陽性微血管數(shù)減少。與對照組比較，特異性小分子干擾RNA干預(yù)后24h小凹蛋白-1表達(dá)水平下降。體外明膠酶譜法檢測顯示，小凹蛋白-1引起腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中基質(zhì)金屬蛋白酶活性增加。結(jié)論：小凹蛋白-1可能是與腦缺血／再灌注損傷后基質(zhì)金屬蛋白酶活化和血腦屏障破壞有關(guān)的一個關(guān)鍵蛋白質(zhì)。