TLR2－PI3K／Akt信號通路在肺炎衣原體感染誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞遷移中的作用＊

王蓓蓓 張騰騰 張利軍 魏俊燕 張俊霞 張麗莙

天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，天津300070；＃通訊作者

目的：觀察肺炎衣原體（C.pn）感染對血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）遷移的影響，探討TLR2－PI3K／Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在C.pn感染誘導(dǎo)VSMC遷移中的作用。方法：組織貼塊法行大鼠原代VSMC培養(yǎng)；免疫熒光法確認(rèn)C.pn成功感染VSMC；Wound－h(huán)ealing assay和Transwell assay觀察C.pn感染對VSMC遷移能力的影響；基因芯片技術(shù)分析感染后VSMC TLR2基因表達(dá)的改變；使用C.pn和TLR2單克隆抗體行免疫熒光染色，共聚焦顯微鏡觀察感染后C.pn與TLR2在VSMC內(nèi)的共定位；RT－PCR、Western blotting分別檢測感染后不同時(shí)間點(diǎn)TLR2和PI3KmRNA和Akt磷酸化水平；分別用TLR2阻斷劑和PI3K抑制劑LY294002預(yù)處理VSMC，Western blotting檢測感染后VSMC Akt磷酸化水平，Wound－h(huán)ealing assay和Transwell assay觀察VSMC遷移能力的改變。結(jié)果：成功建立C.pn感染VSMC模型。Wound healing assay和Transwell assay結(jié)果顯示C.pn感染可明顯促進(jìn)VSMC遷移（PP＜0.05）；基因芯片結(jié)果顯示C.pn感染后TLR2基因表達(dá)明顯上調(diào)；共聚焦顯微鏡觀察到C.pn感染VSMC后，TLR2聚集于C.pn包涵體周圍；RT－PCR結(jié)果表明感染后TLR2表達(dá)水平迅速升高，8h達(dá)高峰，可持續(xù)至24h；Western blotting結(jié)果顯示，感染30min后p－Akt表達(dá)水平開始升高，1h達(dá)高峰，6h開始下降，并持續(xù)至24h；TLR2阻斷劑預(yù)處理的C.pn感染組較單純感染組p－Akt表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），LY294002可顯著抑制C.pn感染誘導(dǎo)的p－Akt的表達(dá)水平上調(diào)（P＜0.05）；C.pn感染組VSMC的遷移能力明顯高于TLR2阻斷劑或PI3K抑制劑預(yù)處理的感染組（P＜0.05）。結(jié)論：C.pn感染可能通過TLR2－PI3K／Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)VSMC遷移。

＊國家自然科學(xué)基金（No：30971225）；高校博士點(diǎn)專項(xiàng)科研基金（No：20111202110011）