敦煌前列寶對(duì)慢性前列腺炎模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)及血管內(nèi)皮功能的影響*

朱向東，丁文君，程暢和

(1.甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000;2.甘肅省中醫(yī)院腎病科，甘肅蘭州730050)

慢性非細(xì)菌性前列腺炎是男性泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)病、多發(fā)病，好發(fā)于青壯年［1］。其病因及發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，屬難治性疾病，臨床缺乏有效的治療方法和藥物。敦煌前列寶是以敦煌出土卷子《輔行訣臟腑用藥法要》中所載“大瀉腎湯”為基礎(chǔ)，依據(jù)慢性前列腺炎臨床表現(xiàn)加減化裁而成，經(jīng)臨床反復(fù)應(yīng)用，療效肯定。筆者觀察了敦煌前列寶對(duì)慢性前列腺炎模型大鼠血液流變學(xué)及血管內(nèi)皮功能的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

SPF級(jí)Wistar大鼠32只，雄性，3月齡，體質(zhì)量(240±20)g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證:SCXK(甘)2004－0006。動(dòng)物購(gòu)置后適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，全部實(shí)驗(yàn)操作均于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，設(shè)施使用合格證為SYXK(甘) 2004－0006。

1.2 藥品、試劑與儀器

敦煌前列寶由茯苓、生甘草、制大黃、黃芩、赤芍、干姜、川牛膝、益母草按比例組成，藥材由甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中藥房提供，煎煮后過(guò)濾去渣，水浴濃縮濾液，使每mL藥液含生藥1.72 g;前列泰膠囊，陜西東泰制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)Z20050021，以蒸餾水配制成10μL/g混懸液備用;消痔靈注射液，北京第四制藥廠產(chǎn)品，批號(hào)0710312，實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水配制成250 g/L備用。ET-1放免試劑盒，蘭州軍區(qū)總醫(yī)院安寧分院核檢驗(yàn)科提供，批號(hào)S20063089。Biofuge Fresco低溫高速離心機(jī)，德國(guó)賀力氏(Heraeus)公司產(chǎn)品;BS124s電子分析天平，德國(guó)賽多利斯(Sartorius)公司產(chǎn)品;UV－2401 PC型紫外分光光度計(jì)，日本島津(SHIMADZU)公司產(chǎn)品; BH 2型光學(xué)顯微鏡，日本奧林巴斯公司產(chǎn)品;MDF－71超低溫冰箱，日本三洋(SANYO)公司產(chǎn)品;HH－601數(shù)顯恒溫水浴箱，江蘇省金壇市恒豐儀器廠產(chǎn)品;LBY－N6A自清洗旋轉(zhuǎn)式黏度儀，北京普利生儀器有限公司產(chǎn)品;K－80型全自動(dòng)血液黏度測(cè)定儀，中外合資北京世帝儀器公司。

1.3 分組、模型的建立與給藥

將32只大鼠依體質(zhì)量編號(hào)，按隨機(jī)數(shù)字表法選取8只為正常對(duì)照組，其余24只動(dòng)物造模后稱量體質(zhì)量，按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型對(duì)照組、前列泰組、敦煌前列寶組3組，每組8只。模型的建立參照文獻(xiàn)方法［2］:將實(shí)驗(yàn)大鼠用100 g/L水合氯醛(250～300μg/g)麻醉，無(wú)菌操作下取下腹部正中切口約1 cm，直達(dá)腹腔，提出膀胱及兩側(cè)精囊，暴露附屬于精囊內(nèi)側(cè)的前列腺背葉，注入前列腺雙側(cè)背葉250 g/L消痔靈注射液共0.2 mL，縫合肌肉、皮膚。創(chuàng)口處噴慶大霉素注射液以防感染。造模期為7 d。

敦煌前列寶組予敦煌前列寶水煎劑10μL/g灌胃，相當(dāng)于8.6 g/kg生藥，是臨床用量的1倍;前列泰組予前列泰混懸液 10μL/g灌胃，相當(dāng)于0.66 g/kg生藥，是臨床用藥量1倍;模型對(duì)照組、正常對(duì)照組按用藥組的方法，灌服蒸餾水，灌胃量10 mL/(kg·d)。每日給藥1次，連續(xù)30 d。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

于末次給藥后24 h，稱大鼠體質(zhì)量，將大鼠以50μg/g的戊巴比妥鈉腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，肝素抗凝，測(cè)血液流變學(xué)各參數(shù)。取出前列腺組織，剝離被膜及周圍脂肪組織，以生理鹽水涮洗，濾紙吸干，電子天平稱量質(zhì)量，計(jì)算大鼠前列腺指數(shù)。將大鼠前列腺自中軸均分2份，右側(cè)部分保存于40 g/L多聚甲醛/0.1M PBS(pH值7.2)固定液中，室溫下經(jīng)水洗、梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋等處理后，切片，HE染色，光鏡下觀察前列腺局部病理變化;左側(cè)部分勻漿，將勻漿液以3 000 r/min離心15 min，將上清液裝入試管，按照ET-1試劑盒說(shuō)明書采用放免法檢測(cè)ET-1含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)(x－)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的兩兩比較采用最小顯著性差異法LSD-t法。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠前列腺濕質(zhì)量、體質(zhì)量及腺體指數(shù)對(duì)比

模型對(duì)照組及藥物組大鼠體質(zhì)量與正常對(duì)照組對(duì)比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明各組之間前列腺腺體質(zhì)量有可比性。模型對(duì)照組前列腺指數(shù)與正常對(duì)照組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。與模型對(duì)照組對(duì)比，前列泰組、敦煌前列寶組大鼠前列腺指數(shù)降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05、P＜0.01)，但敦煌前列寶組與前列泰組兩組間對(duì)比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量、前列腺濕質(zhì)量及腺體指數(shù)對(duì)比 ±s

表1 各組大鼠體質(zhì)量、前列腺濕質(zhì)量及腺體指數(shù)對(duì)比 ±s

注:與正常對(duì)照組對(duì)比，*P＞0.05，＊＊P＜0.05;與模型對(duì)照組對(duì)比，##P＜0.05，###P＜0.01;與前列泰組對(duì)比，ΔP＞0.05。

組 別 動(dòng)物數(shù) 大鼠體質(zhì)量/g 單側(cè)前列腺濕質(zhì)量/mg 前列腺指數(shù)/(mg·g－1)正常對(duì)照組 8 379.714 3±39.373 1 0.453 7±0.090 3 0.003 1±0.000 8模型對(duì)照組 8 366.375 0±37.332 2* 0.646 6±0.139 1 0.005 2±0.000 6＊＊前列泰組 8 370.875 0±37.146 2* 0.465 6±0.154 9 0.004 5±0.000 5##敦煌前列寶組 8 373.857 1±67.966 7* 0.447 5±0.070 2 0.003 3±0.000 4###Δ

2.2 各組大鼠前列腺組織病理學(xué)對(duì)比

正常腺體組織柔軟，有光澤，彈性好，與周圍組織無(wú)粘連，易分離。模型對(duì)照組腺體明顯增大，與周圍組織粘連較重，部分組織表面可見(jiàn)暗紅色或灰白色片狀結(jié)節(jié)。前列泰組腺體中度增大，與周圍組織有粘連，彈性較差，部分組織表面呈暗紅色，其程度較模型對(duì)照組明顯減輕。敦煌前列寶組腺體與周圍組織有輕度粘連，腺體較柔軟，表面有光澤，但腺體較正常對(duì)照組有輕度的腫脹。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠前列腺組織病理學(xué)對(duì)比(HE染色，100×)

2.3 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)對(duì)比

與正常對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組紅細(xì)胞壓積、血漿黏度及全血黏度升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與模型對(duì)照組對(duì)比，敦煌前列寶組各血液流變學(xué)指標(biāo)均降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。與前列泰組對(duì)比，敦煌前列寶組的各血液流變學(xué)指標(biāo)偏低，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)對(duì)比 ±s

表2 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)對(duì)比 ±s

注:與正常對(duì)照組對(duì)比，＊＊＊P＜0.01;與模型對(duì)照組對(duì)比，##P＜0.05，###P＜0.01;與前列泰組對(duì)比，ΔP＞0.05。

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2.4 各組大鼠前列腺組織勻漿ET-1含量對(duì)比

與正常對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠前列腺組織中 ET-1含量增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與模型對(duì)照組對(duì)比，敦煌前列寶組和前列泰組前列腺組織ET-1含量均減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01、P＜0.05)。與前列泰組對(duì)比，敦煌前列寶組前列腺組織ET-1含量減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠前列腺組織ET-1含量對(duì)比 ±s

表3 各組大鼠前列腺組織ET-1含量對(duì)比 ±s

注:與正常對(duì)照組對(duì)比，＊＊P＜0.05;與模型對(duì)照組對(duì)比，##P＜0.05，###P＜0.01;與前列泰組對(duì)比，ΔΔP＜0.05。

ET-1正常對(duì)照組組別 動(dòng)物數(shù)0.300 0±0.012 0模型對(duì)照組 8 0.505 0±0.010 2＊＊前列泰組 8 0.471 3±0.174 8##敦煌前列寶組 8 0.253 8±0.152 3###ΔΔ 8

3 討論

中醫(yī)典籍中雖無(wú)前列腺炎病名，但根據(jù)其臨床癥狀可歸屬于“精濁”、“白淫”范疇。歷代醫(yī)家對(duì)其病因病機(jī)進(jìn)行了深入探討，認(rèn)為濕熱是前列腺炎早期的主要病機(jī)、精濁瘀阻是其主要病理變化、腎虛是其后期病機(jī)演變的結(jié)果。敦煌前列寶是在敦煌《輔行訣臟腑用藥法要》所載的“大瀉腎湯”的基礎(chǔ)上，依據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)并根據(jù)慢性前列腺炎“腎虛為本，濕熱、血瘀為標(biāo)”的病機(jī)本質(zhì)加減化裁而成?！按鬄a腎湯”以茯苓為君，淡以利竅，甘以助陽(yáng);以大黃為臣，重用以清泄?jié)駸?、活血化?輔以黃芩清熱燥濕、瀉火解毒;獨(dú)特之處是在蕩滌祛實(shí)之中，妙用芍藥護(hù)陰，佐以干姜辛開(kāi)溫陽(yáng)，陰陽(yáng)并調(diào)，氣化以行。敦煌前列寶方是在上方基礎(chǔ)上酌加了川牛膝、益母草，是針對(duì)前列腺炎瘀血病機(jī)，增強(qiáng)其組方的活血化瘀、利尿通淋之功效。

本研究采用傳統(tǒng)的前列腺內(nèi)注射消痔靈方法復(fù)制了慢性非細(xì)菌性前列腺炎動(dòng)物模型［2］，并且以血液流變學(xué)和ET-1為觀察指標(biāo)［3］，研究結(jié)果表明敦煌前列寶可明顯改善實(shí)驗(yàn)性慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠前列腺組織的炎癥狀態(tài)及病理?yè)p傷，其主要機(jī)制可能是通過(guò)提高前列腺指數(shù)，升高模型大鼠全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積百分率及降低前列腺組織中ET-1的表達(dá)，從而改善模型大鼠的血液流變學(xué)異常及內(nèi)皮功能紊亂。此研究為敦煌前列寶臨床治療慢性前列腺炎提供了理論依據(jù)，也為敦煌古方的臨床開(kāi)發(fā)提供了佐證。

［1］王琦.王琦男科學(xué)［M］.北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1997: 653.

［2］史紅，鄭曉亮.慢性非細(xì)菌性前列腺炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展錢伯初［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2007，12(1): 14－18.

［3］陳國(guó)宏，李蘭群，任映.前列通瘀湯對(duì)前列腺蛋白所致慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠前列腺組織細(xì)胞因子影響的研究［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30(6):406－408.