某地區(qū)HIV/AIDS患者T淋巴細(xì)胞亞群與中醫(yī)證型的相關(guān)性分析*

王春芳，徐立然，符林春

(1.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州450000;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州510405)

艾滋病全稱獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immune deficiency syndrome，AIDS)，是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染引起的傳染病。人體內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞是HIV的主要受體，在HIV直接和間接作用下，CD4+T細(xì)胞被大量破壞和功能受損，導(dǎo)致細(xì)胞免疫缺陷，同時(shí)其他免疫細(xì)胞均不同程度受損，促進(jìn)各種嚴(yán)重的機(jī)會(huì)性感染和腫瘤發(fā)生，導(dǎo)致死亡。因此，淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)在評(píng)價(jià)HIV感染者和AIDS患者的免疫狀況及預(yù)后判斷等方面都具有重要作用。近年來(lái)，中醫(yī)藥治療艾滋病取得了較好的臨床療效，然而對(duì)HIV/ AIDS中醫(yī)證型及病機(jī)演變規(guī)律的探索仍處于起步階段。本研究擬探索HIV/AIDS淋巴細(xì)胞亞群與中醫(yī)證型的關(guān)系，為進(jìn)一步研究HIV/AIDS中醫(yī)病機(jī)演變提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2008年3月—2008年7月，選取某省某農(nóng)村地區(qū)HIV/AIDS患者276例，健康對(duì)照者11例。所有HIV感染者均在2004年某省有償獻(xiàn)血人群艾滋病普查中被確診，感染途徑均為1990—1995年之間的有償獻(xiàn)血感染。HIV/AIDS組男158例，女118例;年齡35～67歲，平均(45.0±3.5)歲。健康對(duì)照組男6例，女5例;年齡36～65歲，平均(44.1±3.9)歲。2組患者一般資料對(duì)比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入病例標(biāo)準(zhǔn)

①符合HIV/AIDS診斷標(biāo)準(zhǔn)(采用2005年中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒布的《艾滋病診療指南》［1］標(biāo)準(zhǔn))及中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)(參照1997年中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《中醫(yī)臨床診療術(shù)語(yǔ)證候部分》［2］，并結(jié)合筆者前期對(duì)HIV/AIDS患者的臨床調(diào)查，擬訂中醫(yī)證候辨證標(biāo)準(zhǔn));②年齡在18～60歲;③有艾滋病流行病史及臨床表現(xiàn)，HIV抗體確證試驗(yàn)陽(yáng)性〔均經(jīng)河南省疾病預(yù)防控制中心(CDC)進(jìn)行免疫印跡確認(rèn)試驗(yàn)(WB)HIV抗體陽(yáng)性者〕;④CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)為≤400個(gè)/μL(美國(guó)BD公司的流式細(xì)胞檢測(cè)儀);⑤癥狀體征積分≥8分;⑥簽署知情同意書。

1.2.2 排除病例標(biāo)準(zhǔn)

①急性感染期的患者;②患有嚴(yán)重的精神及神經(jīng)疾病者;③合并有其他嚴(yán)重原發(fā)性疾病(嚴(yán)重腦血管疾病，EKG嚴(yán)重異常，ALT＞正常1.5倍，CK＞正常;WBC≤3×109L－1等);④有嚴(yán)重的機(jī)會(huì)性感染和機(jī)會(huì)性腫瘤者。

1.3 樣本的采集、處理及觀察指標(biāo)

HIV/AIDS患者及健康對(duì)照者清晨8:00空腹，取靜脈血8 mL，其中4 mL按1∶1加入1個(gè)有乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝劑的真空采血管，輕搖，存在(20±5)℃環(huán)境下，備用。收集樣品在4 h以內(nèi)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，由某大學(xué)醫(yī)學(xué)院血液病研究所采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)(x－)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn);等級(jí)資料組間比較采用Ridit分析。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對(duì)276例HIV/AIDS患者進(jìn)行中醫(yī)辨證，歸納為6個(gè)證型，不同證型之間及各證型與健康對(duì)照組T細(xì)胞亞群分布比較見(jiàn)表1。各證型組與健康對(duì)照組對(duì)比，除痰濕內(nèi)蘊(yùn)型在CD3+方面沒(méi)有表現(xiàn)顯著性下降，其余各證型組CD3+、CD4+T細(xì)胞水平均較健康人明顯下降(P＜0.05)。276例HIV/AIDS不同證型之間對(duì)比，CD3+T細(xì)胞水平在氣血虧虛兼痰濕組最低，與氣血虧虛兼血瘀組、氣血虧虛組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其他各組之間對(duì)比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。CD4+T細(xì)胞水平在痰濕內(nèi)蘊(yùn)組最低，與氣血虧虛組、氣血虧虛兼血瘀組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);其他各組之間對(duì)比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 HIV/AIDS不同證型之間及各證型與健康對(duì)照組T細(xì)胞亞群分布對(duì)比 個(gè)/μL，±s

表1 HIV/AIDS不同證型之間及各證型與健康對(duì)照組T細(xì)胞亞群分布對(duì)比 個(gè)/μL，±s

注:與健康對(duì)照組對(duì)比，*P＜0.05;與氣血虧虛兼血瘀組、氣血虧虛組對(duì)比，#P＜0.05;與氣血虧虛兼血瘀組、氣血虧虛組對(duì)比，△P＜0.05。

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3 討論

人類T淋巴細(xì)胞具有識(shí)別特異性抗原的能力，對(duì)體內(nèi)的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)類型和強(qiáng)度都有較重要的調(diào)節(jié)作用。T淋巴細(xì)胞免疫功能狀況是決定HIV感染病情發(fā)展的最重要因素，同時(shí)，其他淋巴細(xì)胞群諸如NK細(xì)胞等在HIV感染中可能也起到一定的作用［3］。人體感染艾滋病病毒后，隨著疾病的進(jìn)展，各項(xiàng)免疫指標(biāo)均有明顯變化，而中醫(yī)證候?qū)W也認(rèn)為，同一種疾病在不同的發(fā)展階段會(huì)有不同的表現(xiàn)，即證型的轉(zhuǎn)換。因此，筆者將HIV/AIDS進(jìn)行中醫(yī)辨證分型，同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群的表面標(biāo)志，以了解不同證型HIV感染者T細(xì)胞亞群的變化，試圖探討HIV/AIDS淋巴細(xì)胞亞群與中醫(yī)證型之間的關(guān)系。

在T淋巴細(xì)胞分類中，CD3+T細(xì)胞包含2個(gè)細(xì)胞亞群，即CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞代表T輔助細(xì)胞，而CD8+T細(xì)胞代表T抑制細(xì)胞和T殺傷細(xì)胞。HIV感染的免疫病理改變主要包括CD4+T細(xì)胞數(shù)量的下降和功能的改變，以及機(jī)體的異常免疫激活。CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)能直接反映艾滋病患者的免疫功能狀態(tài)，其減少的程度與本病的臨床特征有一定的關(guān)系，臨床上常以CD4+T細(xì)胞數(shù)量的多少作為劃分疾病的分期和進(jìn)行抗病毒治療的依據(jù)［4］。許多機(jī)制被用來(lái)解釋CD4+T細(xì)胞數(shù)量的下降，其中細(xì)胞凋亡包括自發(fā)性凋亡、Fas介導(dǎo)的凋亡及活化誘導(dǎo)的凋亡，被認(rèn)為是CD4+T細(xì)胞數(shù)量下降的重要機(jī)制，此外，CD4+T淋巴細(xì)胞增殖能力的下降也是CD4+T淋巴細(xì)胞減少的原因之一。

機(jī)體的異常免疫激活主要表現(xiàn)為T細(xì)胞的過(guò)度活化。CD8+T細(xì)胞能夠清除受感染細(xì)胞內(nèi)的病毒，HIV進(jìn)入人體后會(huì)激活CD8+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞活化后分化為細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CT1)，通過(guò)對(duì)被感染CD4+T細(xì)胞的細(xì)胞殺傷作用，起到抑制病毒復(fù)制的作用，但最終卻不能控制HIV的感染，其中原因除了病毒因素(如病毒變異、減少被感染細(xì)胞MHC2的表達(dá)等)外，還與HIV特異性CD8+T細(xì)胞的持續(xù)耗竭有關(guān)。此外研究發(fā)現(xiàn)，大部分HIV特異性CD8+T細(xì)胞分泌穿孔素的水平較低，引起的細(xì)胞裂解效應(yīng)不明顯，有人認(rèn)為HIV特異性CD8+T細(xì)胞可能不屬于高效殺傷細(xì)胞。疾病晚期CD8+T細(xì)胞的克隆形成能力降低，導(dǎo)致HIV細(xì)胞毒T細(xì)胞的最終消亡［5］。

本研究結(jié)果顯示，各證型與健康對(duì)照組T細(xì)胞亞群分布對(duì)比，除痰濕內(nèi)蘊(yùn)型外，各證型CD3+、CD4+T細(xì)胞水平均較健康人下降(P＜0.05)，反映HIV/AIDS較正常人免疫功能的整體低下。而痰濕內(nèi)蘊(yùn)型CD4+T細(xì)胞水平作為各組中最低的一組，在CD3+T細(xì)胞方面與其他組對(duì)比，沒(méi)有表現(xiàn)顯著性下降，可能與其CD4+T細(xì)胞明顯減少的同時(shí)CD8+T細(xì)胞被激活，數(shù)量增加有關(guān)(本研究顯示其CD8+T細(xì)胞數(shù)量最高，盡管與其他組對(duì)比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。HIV/AIDS不同證型T細(xì)胞亞群分布對(duì)比，氣血虧虛組、氣血虧虛兼血瘀組CD4+T細(xì)胞水平較高，痰濕內(nèi)蘊(yùn)組CD4+T細(xì)胞水平明顯下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而CD3+T細(xì)胞水平在氣血虧虛兼痰濕組中明顯低于氣血虧虛兼血瘀組、氣血虧虛組。結(jié)果提示，HIV/AIDS虛證(氣血虧虛)或虛實(shí)夾雜證(氣血虧虛兼血瘀)可能為早期表現(xiàn)，以邪實(shí)為主的痰濕內(nèi)蘊(yùn)證及氣血虧虛兼痰濕證患者機(jī)體免疫功能下降更為顯著，可能為疾病發(fā)展到較嚴(yán)重階段的主要證型，提示艾滋病病毒侵襲人體后，五臟氣血陰陽(yáng)正氣受損，繼而因虛致實(shí)，產(chǎn)生瘀血痰濕病理性產(chǎn)物，早期病理性產(chǎn)物以瘀血為主，進(jìn)一步發(fā)展產(chǎn)生痰濕濁邪。

由本研究可以看出，HIV/AIDS中醫(yī)證型的不同，與機(jī)體淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的變化密切相關(guān)，在CD3+、CD4+、CD8+等指標(biāo)方面，表現(xiàn)出虛證、虛實(shí)夾雜證與實(shí)證(痰濕內(nèi)蘊(yùn))之間免疫損害由淺入深的規(guī)律?；谀壳搬t(yī)學(xué)界對(duì)HIV感染造成的免疫異常的認(rèn)識(shí)，結(jié)合我們以前的臨床及研究［6－7］，是否提示艾滋病病毒侵襲人體后，五臟氣血陰陽(yáng)正氣受損，較早表現(xiàn)出以氣血虧虛或脾腎兩虛等為主的虛證，此時(shí)免疫損害尚較輕，隨著疾病進(jìn)展，因虛致實(shí)，產(chǎn)生瘀血痰濕病理性產(chǎn)物，免疫損害逐漸加深。由于此次研究的對(duì)象以某地區(qū)輸血感染艾滋病人群為主，且排除了急性感染期及有嚴(yán)重機(jī)會(huì)性感染的患者，故還需在今后的工作中擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步研究HIV/AIDS中醫(yī)證型與相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性，為深入探討艾滋病這種新發(fā)病的病因病機(jī)、證候演變規(guī)律提供思路和佐證。

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