夏枯草提取物的抗氧化活性

張 淼，董寶婧，苗 芳，周 樂

(1.西北農林科技大學生命科學學院，陜西 楊凌712100； 2.西北農林科技大學農學院，陜西 楊凌712100； 3.西北農林科技大學理學院，陜西 楊凌712100)

自由基可攻擊生命大分子造成組織損傷，從而導致疾病與衰老。所以，尋找適當的外源性抗氧化劑，清除體內自由基，對治療疾病和保護人體健康大有裨益。近年來，研發(fā)高效、低毒的天然抗氧化劑和抗衰老保健品，已成為新的研究熱點之一[1]。

1 材料與方法

1.1試驗材料 2010年7月底，在秦嶺采集夏枯草全草，陰干后,粉碎,裝袋備用。

1.2夏枯草不同溶劑提取物的制備 取夏枯草全草粗粉40 g，以70%乙醇，料液比為1∶20，45 ℃條件下進行超聲提取2 h，提取3次，合并提取液，減壓濃縮。加石油醚去除葉綠素后，依次用等體積的乙酸乙酯、正丁醇和水萃取，每級重復3次，得到乙酸乙酯、正丁醇和水提取物。

1.3夏枯草不同溶劑提取物抗氧化活性測定 抗氧化活性測定所用的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)購于上海阿拉丁試劑有限公司；酚嗪硫酸甲酯(PMS)、1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH·)購于美國Sigma公司；氮藍四唑(NBT)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)購于國藥集團化學試劑有限公司；其他試劑均為國產分析純。

1.4數據處理 采用SPSS V13.0和Excel軟件對數據進行處理分析。

2 結果與分析

2.1夏枯草不同溶劑提取物對DPPH·的清除活性 夏枯草不同溶劑提取物對DPPH·均有清除能力，且在一定濃度范圍內清除能力與濃度呈正相關。當提取物濃度達到一定值后，隨著濃度的增加，對DPPH·的清除活性增加逐漸緩慢或趨于平緩。夏枯草3種溶劑提取物相比較，乙酸乙酯提取物對DPPH·的清除活性最強(IC50=0.154 mg·mL-1)，強于陽性對照BHT提取物(IC50=0.311 mg·mL-1)，正丁醇提取物的清除能力弱于乙酸乙酯提取物(IC50=0.204 mg·mL-1)，但也強于陽性對照BHT提取物，水提物清除活性(IC50=0.402 mg·mL-1)略弱于BHT提取物(圖1)。夏枯草3種溶劑提取物及陽性對照BHT清除DPPH·的能力由強到弱依次為乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>BHT提取物>水提取物。

2.2夏枯草不同溶劑提取物對·OH的清除活性 夏枯草不同溶劑提取物都具有清除·OH的活性，且清除能力與濃度呈正相關。在正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物和BHT提取物中，乙酸乙酯提取物的清除能力最強，在濃度為0.6 mg·mL-1時清除活性就已達到88.37%，正丁醇提取物活性稍差于乙酸乙酯提取物，在濃度為0.7 mg·mL-1時清除活性達到85.24%(圖2)，而水提物對·OH的清除活性較弱，在0.3～0.7 mg·mL-1范圍內清除活性不及10%(圖2)。夏枯草3種溶劑提取物及陽性對照BHT清除·OH的活性由強到弱依次為BHT提取物(IC50=0.266 mg·mL-1)>乙酸乙酯提取物(IC50=0.406 mg·mL-1)>正丁醇提取物(IC50=0.538 mg·mL-1)>水提物(IC50=1.244 mg·mL-1)。

圖1 夏枯草不同溶劑提取物對DPPH·清除活性Fig.1 DPPH·radical-scavenging activity of different extracts of Prunella vulgaris

圖2 夏枯草不同溶劑提取物對·OH的清除活性Fig.2 Hydroxyl radical-scavenging activity of different extracts of Prunella vulgaris

圖3 夏枯草不同溶劑提取物對的清除活性Fig.3 Superoxide radical-scavenging activity of different extracts of Prunella vulgaris

2.4夏枯草不同溶劑提取物的還原力 夏枯草不同溶劑提取物均具有還原力，且與提取物濃度呈劑量依賴關系。3種提取物相比較，乙酸乙酯提取物的還原能力最強，正丁醇提取物次之,水提物較差。各提取物還原力均低于陽性對照BHT提取物。夏枯草3種溶劑提取物及陽性對照BHT提取物還原力由強到弱依次為BHT提取物>乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>水提物(圖4)。

圖4 夏枯草不同溶劑提取物的還原力Fig.4 Reducing power of different extracts of Prunella vulgaris

3 討論

本研究采用4種評價方法對夏枯草不同溶劑提取物抗氧化活性進行了分析。結果表明，夏枯草提取物具有良好的抗氧化活性。但由于抗氧化反應機制不同，不同評價方法中各提取物可能表現出不同的抗氧化活性。Su等[13]采用多方法體系對4種草藥提取物的抗氧化活性進行評估發(fā)現，各方法測定結果有所差異，這種差異性主要表現在提取物具有良好的DPPH·清除活性和亞鐵離子螯合活性，但還原能力較差。Chen等[14]從黑靈芝(Ganodermaatrum)子實體中提取并純化出一種活性多糖，用多體系對其抗氧化活性進行測定，發(fā)現此種多糖在不同體系中均表現較高活性，從而證明其有顯著抗氧化活性。馬小媛和錢衛(wèi)平[15]認為，單一的檢測方法不能夠綜合評價某種物質的抗氧化能力?？梢姡斜匾捎枚囿w系綜合評價有效物質的抗氧化活性。綜合本研究各測定結果，夏枯草不同溶劑提取物在一定濃度范圍內，其抗氧化活性與有效物質濃度呈正相關，但當提取物達到一定濃度后，便不再表現出更高的抗氧化能力，這是由于自由基消耗殆盡或反應趨于平衡。所以，抗氧化體系中抗氧化劑濃度的選用應考慮到實際條件和底物濃度，參照生物體內自由基濃度范圍，使評價更有實際意義。

夏枯草乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物的抗氧化活性較強，尤其是乙酸乙酯提取物，這可能與夏枯草中黃酮類物質有關。有國內外學者研究發(fā)現，黃酮類物質具有很強的抗氧化能力。Kodama等[16]認為，黃酮類化合物兒茶素是綠茶中最主要的抗氧化成分。吳曉寧等[17]研究表明，烏蕨(Stenolomachusanum)黃酮類物質具有顯著的還原力、抗脂質體氧化和清除自由基等作用。Bergman等[18]對菠菜(Spinaciaoleracea)水提物中的黃酮類物質進行研究分析，證實它有比一般人工抗氧化劑強的抗氧化能力。此外，王川等[19]證實夏枯草黃酮對豬油有抗氧化作用。但目前對夏枯草抗氧化物質研究較少，尚不能確定其種類及結構，需要進一步對各部分的成分進行深入研究。

夏枯草提取物具有良好的抗氧化活性，加之植物藥的天然低毒性，有開發(fā)為天然抗氧化劑和抗衰老保健品的潛力，具有廣泛的發(fā)展前景。

[1] Liu J R，Chen M J，Lin C W.Antimutagenic and antioxidant properties of Milk-Kefir and Soymilk-Kefir[J].Journal Agricultural and Food Chemistry,2005,53:2467-2474.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部) [M].北京:化學工業(yè)出版社,2005:197.

[3] 王祝舉,唐力英,付梅紅,等.夏枯草中的黃酮類化合物研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(8):1966-1967.

[4] 莊玲玲.夏枯草藥理作用研究進展[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2009,5(16):94-95.

[5] 陳顥,李麗娟,李良,等.中藥材中黃酮類化合物的提取及藥理作用研究進展[J].云南化工,2011,38(4):50-52.

[6] Zhang G W,He L,Hu M M.Optimized ultrasonic-assisted extraction of flavonoids fromPrunellavulgarisL.and evaluation of antioxidant activitiesinvitro[J].Innovative Food Science and Emerging Technologies,2011，12:18-25.

[7] 熊雙麗,李安林.夏枯草總黃酮的提取分離與自由基清除活性研究[J].食品科學,2010,31(22):194-197.

[8] Liu F,Ng T B.Antioxidative and free radical scavenging activities of selected medicinal herbs[J].Life Sciences,2000,66(8):725-735.

[9] Sarikurkcu C,Tepe B,Semiz D K,etal.Evaluation of metal concentration and antioxidant activity of three edible mushrooms from Mugla，Turkey[J].Food and Chemical Toxicology，2010,48(5):1230-1233.

[10] Wei Q,Ma X H,Zhao Z,etal.Antioxidant activities and chemical profiles of pyroligneous acids from walnut shell[J].Journal of Analytical and Applied Pyrolysis,2010,88:149-154.

[11] Ozsoy N，Can A，Yanardag P，etal.Antioxidant activity ofSmilaxexcelsaL. leaf extracts[J].Food Chemistry，2008,110 (03):571-583.

[12] Zhang Q F，Zhang Z R，Cheung H Y.Antioxidant activity ofRhizomaSmilacisGlabraeextracts and its key constituent-astilbin [J].Food Chemistry，2009,115(1): 297-303.

[13] Su M S,Shyu Y T,Chien P J.Antioxidant activities of citrus herbal product extracts[J].Food Chemistry，2008,111:892-896.

[14] Chen Y,Xie M Y,Nie S P,etal.Purification,composition analysis and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies ofGanodermaatrum[J].Food Chemistry,2008，107:231-241.

[15] 馬小媛,錢衛(wèi)平.抗氧化能力評價方法[J].化學進展,2011,23(8):1737-1746.

[16] Kodama D H,Gon?alves A E S S,Lajolo F M,etal.Flavonoids,total phenolics and antioxidant capacity:Comparison between commercial green tea preparations[J].Ciência e Tecnologia de Alimentos，2010,30(4):1077-1082.

[17] 吳曉寧,余陳歡,徐靜紅.烏蕨總黃酮體外抗氧化活性的研究[J].醫(yī)藥導報,2010,29(3):292-294.

[18] Bergman M,Perelman A,Dubinsky Z,etal.Scavenging of reactive oxygen species by a novel glucurinated flavonoid antioxidant isolated and purified from spinach[J].Phytochemistry,2003,62:753-762.

[19] 王川,鐘偉,倪青.夏枯草黃酮對豬油抗氧化作用的研究[J].現代食品科技，2010,26(12):1319-1321,1323.