兔葡萄球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

曹文娟

（四川省宜賓市翠屏區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 宜賓 644000）

葡萄菌球菌是革蘭氏陽性菌，存在于皮膚、黏膜、腸道、呼吸道及乳腺中。致病性葡萄球菌常引起各種化膿性疾患、敗血癥或膿毒敗血癥，多種動(dòng)物和人均易感染，兔最為敏感。初生仔兔可以同過臍帶感染發(fā)生膿毒血癥；哺乳母兔可發(fā)生乳房炎，哺乳仔兔因吸吮含金黃色葡萄球菌的乳汁而引起腸炎。由于兔葡萄球菌血清型較多，臨床中對(duì)該病的免疫防治存在一定的困難。本文從典型兔乳房膿腫病例中分離到一株致病菌，經(jīng)鑒定為致病性兔葡萄球菌。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示該菌對(duì)青霉素、慶大霉素、氨芐青霉素高度敏感，對(duì)磺胺嘧啶、環(huán)丙沙星不敏感。現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基 按常規(guī)方法制備普通瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基、肉湯培養(yǎng)基和LB營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，備用。

1.1.2 病料來源 采自翠屏區(qū)李莊鎮(zhèn)某養(yǎng)兔場一典型的膿腫型乳房炎病例。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康兔子、小白鼠。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng) 無菌操作取典型病例的膿汁接種于普通瓊脂培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基中劃線培養(yǎng)，37℃恒溫培養(yǎng)24h，從可疑的優(yōu)勢菌落中挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)。

1.2.2 細(xì)菌的鑒定

1.2.2.1 顯微鏡檢 挑取分離的典型單個(gè)菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，觀察細(xì)菌的顯微形態(tài)特性。

1.2.2.2 致病性測定 將純化的分離菌用生理鹽水洗下，調(diào)整濃度至麥?zhǔn)媳葷岬谝还芟喈?dāng)濃度，給3只小白鼠分別腹腔注射菌液0.1mL、0.2mL、0.3mL，同時(shí)設(shè)3只對(duì)照，分別注射生理鹽水0.1mL、0.2mL、0.3mL。飼養(yǎng)觀察1周，其間如果小白鼠死亡，則進(jìn)行細(xì)菌回收。

1.2.2.3 動(dòng)物回歸試驗(yàn) 用6只健康家兔在腹部皮膚及乳房處用針頭劃傷，然后將純化的細(xì)菌涂布于傷口處，同時(shí)設(shè)對(duì)照兔2只（不作處理）。隔離飼養(yǎng)2周，觀察傷口的變化情況。

1.2.2.4 生化特性測定 取純化培養(yǎng)的細(xì)菌分別接種到葡萄糖、乳糖、麥牙糖、蔗糖、甘露醇、硫化氫等微量發(fā)酵管中（糖類發(fā)酵管開口朝下），37℃培養(yǎng)24～72h，觀察并判定和記錄結(jié)果。

1.2.2.5 藥敏試驗(yàn) 采用紙片法，選擇常用的抗菌藥物進(jìn)行試驗(yàn)，觀察該菌對(duì)各種藥物的敏感程度。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 細(xì)菌培養(yǎng)特性 在普通瓊脂上長成圓形、濕潤、不透明、凸起、表面光滑、邊緣整齊、直徑約1～2mm的菌落，在血液瓊脂上能形成明顯的溶血環(huán)。

2.2 顯微鏡檢 顯微鏡下可以見到大量排成葡萄串狀的革蘭氏陽性球菌。

2.3 致病性測定 小白鼠接種后表現(xiàn)為精神不振、昏睡等癥狀，24h后接種了0.3mL菌液的小鼠死亡，從死亡小鼠肝臟中能回收到與接種菌一致的細(xì)菌，對(duì)照組正常。

2.4 動(dòng)物回歸試驗(yàn) 家兔攻毒24h后傷口出現(xiàn)炎癥，48h后傷口潰爛化膿，流出黃白色膿汁，傷口周圍皮膚呈紫紅色。傷口處能回收到與接種菌一致的細(xì)菌，取膿汁涂片后染色鏡檢，可觀察到葡萄串狀的革蘭氏陽性球菌。

2.5 生化試驗(yàn) 結(jié)果見表1。

表1 分離菌的生化試驗(yàn)結(jié)果

2.6 藥敏試驗(yàn) 結(jié)果見表2。

表2 分離菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果 mm

3 討論與分析

隨著人們大量使用抗菌藥物，使得細(xì)菌的耐藥率不斷上升，而耐藥葡萄球菌所致的感染是臨床治療的棘手問題，抗生素的不合理使用是這些耐藥菌產(chǎn)生的重要因素。葡萄球菌由于產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，可對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生不同程度的耐藥。金黃色葡萄球菌的耐藥性強(qiáng)，對(duì)很多抗菌藥物不敏感。本次藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示該菌對(duì)青霉素、克林霉素、慶大霉素、氨芐青霉素等高度敏感，對(duì)磺胺嘧啶、環(huán)丙沙星不敏感。金黃色葡萄球菌的特點(diǎn)為多重耐藥，對(duì)現(xiàn)有的β-內(nèi)酰胺類抗生素如青霉素類和頭孢菌素類均不敏感，對(duì)氯霉素、克林霉素、林可霉素、氨基糖苷類、磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素及喹諾酮類藥也不怎么敏感，僅對(duì)萬古霉素100%敏感，對(duì)其他抗生素也有不同程度地耐藥。

通過做動(dòng)物回歸試驗(yàn)，結(jié)果表明兔葡萄球菌可以經(jīng)多種途徑感染發(fā)病。在生產(chǎn)當(dāng)中以皮膚和黏膜的傷口感染為主要途徑，哺乳母兔可經(jīng)乳頭孔感染，幼兔經(jīng)臍帶感染，也可以接觸傳播，四季均可發(fā)病，但以夏秋季多發(fā)。仔兔吸吮了患乳房炎的乳汁后，可能引起仔兔的黃尿病。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，分離菌為致病性兔葡萄球菌，該菌對(duì)青霉素、克林霉素、慶大霉素、氨芐青霉素等敏感，對(duì)磺胺嘧啶、環(huán)丙沙星不敏感。參考文獻(xiàn)：

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