加替沙星眼用凝膠劑的制備與質量控制

翟學娜，劉 青，王姿婧，房志仲

（1.天津市眼科醫(yī)院藥劑科，天津醫(yī)科大學眼科臨床學院藥劑科，天津300020；2.天津醫(yī)科大學藥學院，天津市臨床藥物關鍵技術重點實驗室，天津300070）

加替沙星（gatifloxacin）是第四代氟喹諾酮類藥物，對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和耐青霉素肺炎鏈球菌顯示了很強的抗菌效能，并對厭氧菌、支原體、衣原體、分枝桿菌均有一定的抗菌作用，所以受到國內(nèi)外的廣泛關注[1-2]。加替沙星在眼科領域的應用研究已取得廣泛進展。0.3%加替沙星滴眼液繼2004年3月獲FDA批準后，又于同年7月在日本獲準上市，商品名ZYMAR。ZYMAR是第一種進入市場，用于治療眼部感染的第四代氟喹諾酮類藥物，主要用于敏感菌株引起的細菌性結膜炎[3]。普通眼用藥物在眼中滯留時間短，由于眼瞼的眨動和淚液的分泌，只有1%～10%的藥物可透過角膜[4]，生物利用度低。卡波姆制成的眼用凝膠劑可延長藥物在角膜的滯留時間，從而增加藥物吸收并延長作用時間。用卡波姆940制成的硝酸毛果蕓香堿緩釋滴眼劑，縮瞳持續(xù)時間較其它滴眼劑長2～3倍，且延長時間隨卡波姆濃度的增加而增加，卡波姆974與眼的接觸時間有濃度依賴性，濃度為2%的卡波姆凝膠與眼的接觸時間約為2～2.5h，接觸時間與凝膠彈性呈良好相關性[5]。為此，我們根據(jù)設計并制備了加替沙星眼用凝膠劑，按照《中國藥典》二部（2010）版附錄中關于滴眼劑的要求制定了質量標準[6]，為申報醫(yī)院制劑提供實用依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 高效液相色譜儀（美國 Spectraphysics）；輸液泵SP8810；Spectra Focus紫外檢測器；柱溫箱（CBL Model 100）；Anastar色譜工作站；電子分析天平（BP211D，德國Sartorius）；超聲波清洗器（7KQ-100B型，昆山市超聲儀器有限公司）。滲透壓測定儀（SMC30，天津醫(yī)藥儀器有限公司）；黏度計（NDS-8S型，上海天平儀器廠）；電動攪拌器（WH-S型，天津市威華儀器設備有限公司）；pH計（雷磁pHs-25型，上海精密科學儀器有限公司）。

1.1.2 試劑 加替沙星對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：130518-200402，規(guī)格：供含量測定用）；鹽酸加替沙星注射液（浙江弘盛藥業(yè)有限公司，規(guī)格：0.2g/10mL，批號：090315）；卡波姆974P（路博潤，批號：0100772788）；甲醇（色譜純，天津市彪奇科技發(fā)展有限公司），其它試劑均為市售分析純，重蒸水自制。

1.2 方法

1.2.1 加替沙星滴眼用凝膠劑的制備

1.2.1.1 處方：加替沙星3g（相當于注射劑15支）；卡波姆974P 5g；氯化鈉8.5g；5%尼泊金乙酯醇溶液10mL；重蒸水加至1000mL。

1.2.1.2 制備：稱取卡波姆974P粉末5.0g，加入盛有500mL重蒸水的燒杯中，使其充分溶脹（冰箱中冷藏過夜）后，取出，加熱至室溫，邊加熱邊攪拌1h（200r/min）。將加替沙星注射液用少量重蒸水稀釋，用少量重蒸水溶解氯化鈉，加至卡波姆974P溶液中，快速攪拌中加入尼泊金乙酯醇溶液 (必要時加熱)，混勻，以0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.0～7.0，混勻，抽濾，經(jīng)濾器加重蒸水至全量，分裝，以100℃流通蒸汽滅菌30min，即得。

1.2.2 加替沙星滴眼用凝膠劑的含量測定[7-9]

1.2.2.1 色譜條件：色譜柱：TIANHE?C18柱（200× 4.6mm，5μm）；流動相：三乙胺磷酸溶液[三乙胺溶液(1→100)，用磷酸調(diào)節(jié)pH至4.5]-乙腈(87:13)；檢測波長：325nm；柱溫：40℃；流速：0.8mL/min；靈敏度：0.01AUFS；進樣量：20μL。理論塔板數(shù)按加替沙星峰計算，不低于2500。

1.2.2.2 溶液的制備：（1）對照品溶液的制備：取加替沙星對照品約30mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，即得0.3mg/mL對照品溶液，備用。（2）供試品溶液的制備：取加替沙星眼用凝膠劑1支，精密量取2.0mL，置10mL量瓶中，以流動相定容至10mL，即得供試品溶液。（3）陰性對照溶液的制備：按處方比例配成不含加替沙星的眼用凝膠劑陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。分別精密吸取陰性對照溶液、供試品溶液及對照品溶液各20μL，注入液相色譜儀中。

1.2.2.3 線性關系考察：分別精密量取對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL置10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，進樣測定，記錄色譜圖。以加替沙星峰面積（Y）為縱坐標，溶液濃度（C）為橫坐標，繪制標準曲線。

1.2.2.4 精密度試驗：按照“1.2.2.1項下”精密吸取同一供試品溶液重復進樣6次，測定峰面積。

1.2.2.5 穩(wěn)定性試驗：精確稱取樣品，按供試品溶液制備方法操作，在“1.2.2.1項下”色譜條件下，分別在0、4、8、12和24h內(nèi)注入高效液相色譜儀，測定峰面積。

1.2.2.6 重復性試驗：分別量取供試品溶液6份，按“1.2.2.2（2）項下”操作，在“1.2.2.1項下”色譜條件下，各取20μL進樣，測定峰面積。

1.2.2.7 加樣回收率實驗：精密量取供試品1mL，分別在供試品中精密加入相當于加替沙星含量的80%、100%和120%的加替沙星對照品溶液0.8、1.0、1.2mL各3份，用流動相稀釋至刻度，作為加樣回收率實驗的供試品溶液。各取20μL進樣，進樣測定，記錄色譜圖，以外標法計算加替沙星的回收率。

1.2.2.8 樣品測定：取本品3批，按供試品溶液的制備方法，按“1.2.2.1項下”色譜條件進樣，分別測定加替沙星的含量。

1.2.2.9 加替沙星眼用凝膠劑質量檢查：取各批次樣品，按照《中國藥典》（二部）2010年版滴眼劑附錄項下[6]要求檢查其外觀性狀、pH值、黏度和含量。

1.2.2.10 樣品穩(wěn)定性考察：取各批次樣品，進行6個月的加速試驗（溫度40℃，相對濕度75%）和12個月的長期試驗（溫度25℃，相對濕度60%），記錄其外觀性狀的變換，同時測定pH值、黏度和含量等評價指標。

2 結果

2.1 HPLC測定結果 由圖1和圖2可見，加替沙星的保留時間約為13min，理論塔板數(shù)按加替沙星峰計算為3845；加替沙星與相鄰雜質峰的分離度為5.56。因此，在所制訂的質量標準中要求理論塔板數(shù)按加替沙星峰計算應大于2500，加替沙星峰與相鄰雜質峰的分離度大于2.0。圖3空白對照溶液色譜圖中與對照品相同保留時間處無干擾，除溶劑峰外，未見其他色譜峰，表明輔料不干擾樣品測定。

2.2 線性關系考察 結果表明，加替沙星濃度在15～180μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好。以加替沙星峰面積（Y）為縱坐標，溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。得標準曲線方程：Y=16829536.9C+5703.2，r=0.99989。

2.3 精密度試驗 加替沙星峰面積的RSD=0.21%。2.4穩(wěn)定性試驗 供試品溶液中加替沙星峰面積RSD=0.98%，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復性試驗 供試品中加替沙星含量RSD= 0.55%，本試驗重復性較好。

圖2 加替沙星眼用凝膠劑色譜圖Fig 2 Chromatogram of gatifloxacin ophthalmic gel

圖3 空白輔料的高效液相色譜圖Fig 3Chromatograms of blank

2.6 加樣回收率試驗 結果見表1。

2.7 樣品測定 取本品3批進行測定，加替沙星平均含量為99.78%，RSD=0.21%。

2.8 加替沙星眼用凝膠劑質量檢查 取各批次樣品，按照《中國藥典》2010年版滴眼劑附錄項下要求檢查其外觀性狀、pH值、黏度和含量等，結果見表2。

表1 加樣回收率試驗結果Tab 1 Result of recovery test

表2 加替沙星眼用凝膠劑質量檢查Tab 2 Quality control of gatifloxacin ophthalmic gel

2.9 樣品穩(wěn)定性考察 3個批次樣品的外觀性狀、pH值、黏度和含量等均未發(fā)生明顯變化，符合《中國藥典》（二部）2010版滴眼劑項下要求，說明本試驗制備的加替沙星眼用凝膠劑質量穩(wěn)定。

3 討論

3.1 眼用凝膠劑的特點 卡波姆形成的凝膠在pH 5～11范圍內(nèi)較穩(wěn)定，當pH＜3或＞12時，黏度為1Pa·s，在pH 6～12時較黏稠，pH為8時黏度增到50Pa·s，因此控制pH值可調(diào)節(jié)制劑的穩(wěn)定性和黏度[10]。周勤等[11]根據(jù)臨床需要，研制了馬來酸噻嗎洛爾眼用凝膠劑，為增加其黏度、延長藥物與眼局部接觸時間，加入卡波姆，結果表明，1次/d給藥治療眼高壓癥的作用與馬來酸噻嗎洛爾滴眼液2次/d給藥作用相同，無刺激性且穩(wěn)定性好。羅云等[12]研制的依諾沙星眼用即用型凝膠，是以卡波姆為基質的低黏度凝膠，可像傳統(tǒng)的滴眼液一樣滴入眼內(nèi)，分劑量準確，但較滴眼液的眼內(nèi)滯留時間長，生物利用度高。許多眼用藥物吸收差，主要由于眼淚使其消除加快，用卡波姆制得的眼用凝膠可延長藥物在眼內(nèi)的滯留時間，增加藥物的吸收。寧德俄等[13]用卡波姆940研制了滯留型復方氧氟沙星滴眼液，不但可增稠和延長滯留，且與其它增稠滯留劑相比，卡波姆在高溫滅菌過程中穩(wěn)定，并可保持滴眼劑的黏度不變。汪榮軍[14]以卡波姆940制備了左氧氟沙星眼用凝膠，延長了藥物作用時間，刺激性小。

3.2 加替沙星眼內(nèi)的生物學特性 加替沙星滴眼劑具有良好的眼內(nèi)通透性，毛郴等[15]在兔靜脈滴注加替沙星25mg/kg后，淚液、角膜、房水和虹膜睫狀體Cmax分別為0.37μg/mL、0.17μg/g、1.56μg/mL和0.70μg/g，達到較高藥物濃度。周遠大等[16]給兔1次滴注0.3%加替沙星滴眼液50μL后，淚液濃度0.125h時為1115.75μg/mL，t1/2為0.35h；8h后仍達7.75μg/mL；房水、角膜和虹膜-睫狀體的峰濃度（μg/mL或μg/g）分別為1.94、16.49和8.57，均顯著高于眼感染菌的MIC90。

［1］ 林赴田.氟喹諾酮類抗菌藥的藥理和臨床研究進展[J].國外醫(yī)藥抗生素分冊，2001，22（6）：247

［2］ 鄭莉，梁德榮.新喹諾酮類抗菌藥物-加替沙星[J].華西醫(yī)學，2005，20（1）：174

［3］ 國外藥訊.加替沙星滴眼液在日本獲準上市[J].齊魯藥事，2004，23（7）：13

［4］ 寧黎麗.眼用劑型凝膠特點及研發(fā)過程中需關注的問題[J].中國新藥雜志，2007，16（13）：988

［5］ Edsman K,Carltbrs J,Harju K.Rheological evaluation and ocular contact time of some Carbomer gels for ophthalmic use[J].J Phaml, 1996,137（2）:233

［6］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄32

［7］ 劉寶林，黃金龍.加替沙星滴眼液的穩(wěn)定性研究[J].中國抗生素雜志，2004，29（9）：539

［8］ 趙寧民，張凱，王豫輝.加替沙星原位膠化滴眼劑的制備及質量控制[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2008，28（22）：1962

［9］ 時文祥，毛志英，張發(fā)成.加替沙星滴眼液的制備和質量控制[J].藥學進展，2009，33（3）：134

［10］盧毅，張彤木，陶建生.卡波姆在藥劑學中的應用[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（6）：457

［11］周勤，劉學麗，潘偉娜，等.馬來酸噻嗎洛爾眼用膠體溶液的研制[J].中國藥科大學學報，1998，29（3）：190

［12］羅云，劉剛，宋金春.依諾沙星眼用即用型凝膠的研制[J].山西醫(yī)藥雜志，2007，36（8）：756

［13］寧德俄，常翠，楊宏圖，等.滯留型復方氧氟沙星滴眼液的制備及質量控制[J].藥學實踐雜志，2004，22(5)：287

［14］汪榮軍.左氧氟沙星眼用凝膠的制備[J].安徽醫(yī)藥，2006，10（2）：141

［15］毛郴，周遠大，楊輝.家兔靜注加替沙星后血液及其眼組織分布與藥代動力學研究[J].四川生理科學雜志，2005，27（1）：45

［16］周遠大，何海霞，韓敏，等.加替沙星兔眼內(nèi)組織分布及其藥動學研究[J].中國藥房，2005，16（6）：421