淫羊藿對記憶障礙小鼠學習記憶能力的影響

王麗娟，王慶妍，王 勇，黎 蓉，謝梅彬

淫羊藿為小檗科多年生草本淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim、箭 葉 淫 羊 藿 Epimedium Sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim)等干燥地上部分。淫羊藿性味辛、甘、溫，有補腎陽、強筋骨、祛風濕等功效，主要含有黃酮類物質，是安神、健腦、補腎以及治療風濕及腦疾病的首選藥材［1-2］。文獻報道，補陽藥鹿茸、右歸丸能顯著增強小鼠的學習記憶功能，對藥物引起的學習記憶障礙有改善作用［3-4］。補陽藥淫羊藿具有抗衰老作用［5］，而對學習記憶功能的影響未見報道。

本實驗以東莨菪堿和乙醇制作學習記憶獲得障礙和記憶再現障礙模型，通過避暗法和迷津法研究炙淫羊藿提取物對小鼠學習記憶障礙的改善作用。

1 材料

1.1 動物

昆明種小鼠，體重17g～23g，雌雄兼用，由天津市實驗動物中心提供(合格證號為SCXK(津)2005-0001)。

1.2 主要藥品與試劑

炙淫羊藿飲片產地河南，購于天津老百姓大藥房;吡拉西坦由天津金世制藥有限公司生產(批號20071027);氫溴酸東莨菪堿由上海禾豐制藥有限公司生產(批號061101);無水乙醇由天津市華東試劑廠生產(批號 20061124)。

1.3 主要儀器

MG-2型迷津刺激器(張家港市生物醫(yī)學儀器廠)，ZH-500型小鼠避暗儀(安徽淮北正華生物儀器有限公司)，RE-2000旋轉蒸發(fā)儀(上海市亞榮生化儀器廠)。

2 方法

2.1 淫羊藿提取物的制備

將炙淫羊藿生藥干燥后粉碎、稱重，分別加10倍量70%乙醇回流提取3次，每次40min，溫度40℃［6］。合并3次提取液，抽濾并濃縮至0.25g·ml－1并保存于冰箱。使用時用蒸餾水稀釋至所需濃度。

2.2 小鼠記憶獲得障礙模型制作及學習記憶能力測試方法

2.2.1 迷津法 選健康成年小鼠60只，體重19.8g±2.0g，雌雄各半，隨機分成5組，每組12只。1組為生理鹽水組，2組為模型組，3組為吡拉西坦組(0.5g·kg－1)，4 組為淫羊藿高劑量組(5.0g·kg－1)，5 組為淫羊藿低劑量組(3.5g·kg－1)。各組均灌胃給藥，容量為 10ml·kg－1，1組及 2組給等容量生理鹽水，每日1次，連續(xù)14d，于第13天給藥后1h開始訓練。訓練前10min 1組腹腔注射等容量生理鹽水，其余各組小鼠均腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(1.5mg·kg－1)。訓練時先將小鼠放于起步區(qū)適應2min，然后通電(40V)，動物受到電擊后直接逃至安全區(qū)為正確反應，逃至電擊區(qū)為錯誤反應。如此訓練15次，記錄正確反應與錯誤反應次數。24h后進行測試，觀察指標及方法同訓練時［7-8］。結果以均值±標準差(珋x±s)表示，通過t檢驗比較2組間差異的顯著性。

2.2.2 避暗法 選健康成年小鼠60只，體重20.0g±1.7g，雌雄各半，隨機分成5組，分組方法及給藥方法同2.2.1。于第13天給藥后1h開始訓練，訓練前10min 1組腹腔注射生理鹽水，其余各組均腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(1.5mg·kg－1)。訓練時先將小鼠放入避暗箱明室內，小鼠進入暗室受到電擊(40V)后逃至明室，此后會再次進入暗室。適應3min后將小鼠背向暗室放入明室同時記時，小鼠進入暗室受到電擊視為錯誤反應。訓練5min，記錄小鼠自放入明室至首次進入暗室的時間(潛伏期)、5min內錯誤次數及累加遭受電擊的時間(錯誤反應時間)作為學習成績。24h后重新測試，將小鼠背向暗室放入明室同時記時，余方法同訓練，記錄小鼠首次進入暗室的潛伏期、5min內錯誤反應次數及累加遭受電擊的時間作為記憶成績［7］。結果以均數 ±標準差(珋x±s)表示，通過t檢驗比較2組間差異的顯著性。

2.3 小鼠記憶再現障礙模型制作及學習記憶能力測試方法

2.3.1 迷津法 選健康成年小鼠70只，體重20.2g±1.6g，雌雄各半，隨機分成5組。分組方法及給藥方法同2.2.1。于第13天給藥后1h開始訓練，24h后進行測試。測試前15min 1組灌胃生理鹽水，其余各組小鼠均灌胃35%乙醇，容量為10ml·kg－1，造成動物記憶再現障礙。測試方法及數據處理方法同2.2.1。

2.3.2 避暗法 選健康成年小鼠70只，體重20.0g±1.6g，雌雄各半，隨機分成5組，分組方法及給藥方法同2.2.1。于第13天給藥后1h開始訓練，訓練方法及觀察指標同2.2.2，24h后進行測試。測試前15min 1組灌胃生理鹽水，其余各組小鼠均灌胃35%乙醇，容量為10ml·kg－1，造成動物記憶再現障礙，測試方法及數據處理方法同2.2.2。結果以均數±標準差(珋x±s)表示，通過t檢驗比較2組間差異的顯著性。記憶能力。

表1 迷津法觀察淫羊藿對東莨菪堿所致小鼠學習記憶障礙的改善作用(珔x±s，n=12)

3 結果

3.1 淫羊藿對東莨菪堿致記憶獲得障礙小鼠學習記憶能力的影響

3.1.1 迷津法 表1顯示，用東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙，采用迷津法訓練和測試小鼠的學習

結果顯示，東莨菪堿能使小鼠(模型組)的學習成績和記憶成績明顯降低，與生理鹽水組比較，差異非常顯著(P＜0.01)。淫羊藿和吡拉西坦能明顯減少小鼠錯誤反應次數，改善小鼠由東莨菪堿所致的學習及記憶獲得障礙，與模型組比較，差異極顯著(P ＜0.01)。

3.1.2 避暗法 表2顯示，用東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙，采用避暗法訓練和測試小鼠的學習記憶能力。

表2 避暗法觀察淫羊藿對東莨菪堿所致小鼠學習記憶障礙的改善作用(珔x±s，n=12)

結果顯示，模型組小鼠的學習記憶成績較生理鹽水組明顯降低(P＜0.01)，即潛伏期明顯縮短，錯誤次數明顯增多，累加電擊時間明顯延長;測試成績略好于訓練成績，但與生理鹽水組比較，各項指標差異仍非常顯著(P＜0.01)。而淫羊藿和吡拉西坦能明顯延長小鼠的潛伏期，減少錯誤反應的次數，縮短累加電擊時間，與模型組比較各指標差異顯著(均P＜0.05)。

學習記憶能力的影響(珔x ± s，n=14)

3.2 淫羊藿對乙醇所致記憶再現障礙小鼠學習記憶能力的影響

3.2.1 迷津法 表3顯示，采用迷津法觀察淫羊藿對乙醇所致的記憶再現障礙小鼠學習記憶能力的影響。

結果顯示，35%乙醇能增加小鼠測試時錯誤反應次數。吡拉西坦和淫羊藿均能減輕這種損傷，使學習能力有所增強，記憶再現障礙得到改善。

3.2.2 避暗法 表4顯示，采用避暗法觀察淫羊藿對乙醇所致記憶再現障礙小鼠學習記憶能力的影響。

結果顯示，模型組小鼠測試時的潛伏期明顯縮短(P＜0.01)，觸電時間明顯延長(P＜0.01)，錯誤次數明顯增加(P＜0.01)。淫羊藿能明顯延長小鼠進入暗室的潛伏期，減少錯誤反應次數，縮短遭受電擊的時間，測試時表現更明顯(與模型組比較，均 P＜0.05)，且作用略優(yōu)于吡拉西坦。

表4 淫羊藿對乙醇所致記憶再現障礙小鼠學習記憶能力的影響(珔x±s，n=14)

4 討論

學習和記憶是兩個相互聯(lián)系的神經活動過程，是人類認識和感知世界的主要手段。許多疾病，尤其是神經系統(tǒng)的病變可導致學習記憶功能減退。改善學習記憶功能對于延緩衰老，提高記憶衰退患者的生活質量，減輕家庭和社會的負擔無疑將起到積極的作用。

學習和記憶是一個極其復雜的生理生化過程，其影響因素很多。首先，中樞遞質與學習記憶活動有關，擬膽堿藥可加強記憶活動，而抗膽堿藥東莨菪堿則能使學習記憶功能減退。其次，中樞神經系統(tǒng)的基本功能——興奮與抑制是影響學習記憶的一個重要因素。中樞的過度抑制會使學習記憶能力下降，高濃度乙醇會作用于大腦及小腦，抑制中樞產生近記憶力喪失、時空定向力障礙、共濟失調等［7］。

該實驗采用東莨菪堿和乙醇分別造成小鼠學習記憶獲得障礙和記憶再現障礙，增加動物的錯誤反應次數及延長反應時間。吡拉西坦是促思維記憶藥，常用于腦血管疾病和神經外科手術后等。實驗中比較了淫羊藿與吡拉西坦對小鼠學習記憶能力的影響。結果表明，淫羊藿對東莨菪堿及乙醇所致的學習及記憶障礙均有明顯的改善作用，其效果與吡拉西坦相近或略佳。淫羊藿改善學習記憶能力的作用可能與其活血化瘀和改善腦組織的血液供給有關，其確切作用機制還有待進一步研究。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典［S］.北京:化學工業(yè)出版社，2005:229.

［2］ 蘇家輝.淫羊藿藥材資源與質量考察研究［J］.中國中醫(yī)藥現代遠程教育，2010，8(17):86-87.

［3］ 王曉麗，張大方.鹿茸提取物對東莨菪堿及亞硝酸鈉所致小鼠學習記憶障礙的影響［J］.長春中醫(yī)學院學報，2005，21(4):37-38.

［4］ 戴薇薇，金國琴，張學禮，等.左歸丸、右歸丸對衰老大鼠海馬學習記憶相關基因BDNF mRNA表達的影響［J］.中藥藥理與臨床，2007，23(4):14-16.

［5］ 沈映君.中藥藥理學［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:906-907.

［6］ 朱春林，高素琴.淫羊藿提取工藝優(yōu)選［J］.時珍國醫(yī)國藥，2001，12(8):687.

［7］ 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學［M］.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:827.-829.

［8］ 王麗娟，王亞麗，李蓓，等.獨一味對小鼠學習記憶能力的影響［J］.時珍國醫(yī)國藥，2009，20(7):1761-1762.