地榆四黃散的提取工藝優(yōu)化及凝膠劑的制備*

王 穎 ，劉志東 ，曹 晴 ，李 琳

（1.天津中醫(yī)藥大學，天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學現(xiàn)代中藥發(fā)現(xiàn)與制劑技術教育部工程研究中心，天津 300193）

地榆四黃散的提取工藝優(yōu)化及凝膠劑的制備*

王 穎1，2，劉志東1，2，曹 晴1，2，李 琳1，2

（1.天津中醫(yī)藥大學，天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學現(xiàn)代中藥發(fā)現(xiàn)與制劑技術教育部工程研究中心，天津 300193）

[目的]優(yōu)選地榆四黃散的提取工藝，并制備凝膠劑。[方法]采用正交實驗法，以沒食子酸、黃芩苷、黃芩素和大黃類相關成分的提取含量為指標，進行方差分析,篩選最優(yōu)提取工藝，并制備凝膠劑。[結果]四黃最佳提取工藝為用10倍量的50%乙醇熱回流提取3次，每次1.5 h；地榆為用8倍量的水，回流提取3次，每次提取1.5 h。用1.5%的卡波姆及中藥提取液制備凝膠劑的工藝可行。[結論]該凝膠劑制備工藝簡便，質(zhì)地細膩均勻。

地榆四黃散；提取工藝；凝膠劑

燒燙傷為日常生活中常見損傷，是由于熱力（如熱水、蒸汽、熱油、烈日暴曬、物理損傷、化學因素等）作用于人體而引起的，輕則引起皮膚水皰紅斑；重則肌肉腐爛感染為瘡。地榆四黃散用于治療燒燙傷療效顯著，其中黃芩、黃連、黃柏、大黃性味苦寒，具有清熱解毒消炎的功效，使熱毒下泄?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃連、黃柏、大黃對葡萄球菌及大腸桿菌有明顯抑制作用，故對燒燙傷“感染關”能起到預防作用。生地榆性味苦、酸，微寒，具有清熱涼血、止血、燥濕收斂的功效，能使?jié)B液減少，促進創(chuàng)面愈合，是燒燙傷常用之中藥。5藥合用，藥證相符，藥到病除[1]。

現(xiàn)此方常用劑型為散劑，其中散劑與皮膚的黏合性不好，在患處停留時間短，易感染和污染衣物，有刺激性。筆者從這5味藥材的提取工藝優(yōu)化研究入手，篩選最佳提取工藝并將此方制備成水溶性凝膠劑，促進藥物滲透，黏附性好，增加藥物在皮膚表面的附著時間，使用方便，易于清洗，使其更好地發(fā)揮藥用功效。

1 儀器與試藥

DV－Ⅲ 流變儀（Brookfield，美國）；ZDHW 電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；DELTTA320 pH計（Mettler Toledo，瑞士）；RE52C旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；GM－0.33II型沸騰隔膜真空泵（天津Autoscience公司）；Agilent1200 HPLC（安捷倫公司）；JD－16A精密恒溫水浴鍋（上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司）；RW 20 D S25高速攪拌儀（德國）?？ú罚–arbopol 974P）（Lubrizol，美國）；黃芩苷、黃芩素、大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、沒食子酸對照品（批號：10081205，規(guī)格：20 mg，天津一方科技方有限公司）；大黃、黃芩、黃連、黃柏、地榆藥材（安國市順全隆中藥材有限公司）；甘油、磷酸（天津市光復科技發(fā)展有限公司）；1，2－丙二醇、三乙醇胺、尼泊金乙酯（天津市光復精細化工研究所）；除流動相甲醇、乙腈為色譜純外，其他所用試劑均為分析純。

2 實驗方法與結果

經(jīng)查閱文獻得知，大黃中的主要藥效成分為蒽醌類衍生物如大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃酸等，可溶于乙醇，不溶于或難溶于水中[2]。黃芩中主要有效成分為黃酮類化合物，黃連、黃柏中主要含有生物堿，常用提取溶劑為乙醇[3-4]。地榆中主要含有鞣質(zhì)和皂苷[5]，鞣質(zhì)具有收斂作用，能與蛋白質(zhì)結合形成不溶于水的大分子化合物,沉淀在黏膜表面,從而起到止血、保護黏膜等多種作用[6]，用水和醇為溶劑提取的報道都有。綜上，將此方分為兩組提取，即第一組：大黃、黃芩、黃連、黃柏；第二組：地榆。

2.1 四黃正交實驗設計及方差分析 利用正交設計，以黃芩苷、黃芩素、大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素含量為指標，選擇乙醇濃度、料液比、提取時間3個因素，每個因素各選3個水平，采用L9（34）正交表進行設計實驗。見表1。

稱取處方量的大黃、黃芩、黃柏、黃連，分別按表1和表2進行回流提取，每個實驗提取3次。過濾藥渣合并濾液，60℃減壓回收乙醇，測其含量。色譜條件：流動相為一定比例的乙腈和水，梯度洗脫時間為 0、30、45、50 min，對應乙腈的比例（V/V）為 15%，35%，95%，15%；檢測波長：270 nm，流速：1 mL/min；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL。由于指標較多，采用綜合加權評分法進行數(shù)據(jù)處理，并用SPSS 18.0進行方差分析，實驗結果見表2，方差分析見表3。

表1 四黃提取工藝因素水平表Tab.1 The extraction technology factors of Sihuang

表2 四黃正交實驗結果Tab.2 The results of orthogonal experiment of Sihuang

表3 四黃提取工藝方差分析Tab.3 Analysis of variance of extraction technology ofSihuang

用正交實驗的直觀分析法進行分析，從R值的大小可知：因素的主次順序為A＞C＞B。最優(yōu)組合為A1B3C2。

方差分析可見因素A對實驗結果影響顯著（P＜0.05），而因素B與C對實驗結果影響不大。即最佳組合為：A1B3C2，即用50%乙醇回流提取，每次加10倍量，提取3次，每次提取1.5 h。

2.2 地榆正交實驗設計及方差分析 利用正交設計，以沒食子酸的含量為指標，選擇溶劑、料液比、提取次數(shù)、提取時間4個因素，每個因素各選3個水平，采用L9（34）正交表進行設計實驗（表4）。

表4 地榆提取工藝因素水平表Tab.4 The extraction technology factors of Diyu

稱取處方量的地榆，分別按表4和表5進行回流提取。過濾藥渣合并濾液，60℃減壓回收乙醇，測其含量。色譜條件：甲醇-0.1%磷酸溶液（15∶85，V/V）紫外檢測波長：273 nm；流速:1 mL/min；柱溫：35℃；進樣量：20 μL。實驗結果見表5，方差分析見表6。

表5 地榆提取工藝因素水平表Tab.5 The results of orthogonal experiment of Diyu

表6 地榆提取工藝的方差分析Tab.6 Analysis of variance of extraction technology of Diyu

用正交試驗的直觀分析法進行分析，從R值的大小可知:因素的主次順序為A>D>B>C。最優(yōu)組合為A1B2C2D3。

在正交設計中，如果沒有重復實驗，又無空白項時，常取其中一因素離均差平方和最小項作為誤差估計[7]。本實驗中選擇C作為誤差進行方差分析，從表6中可看出由方差分析可知,A、B、C、D對沒食子酸的提取率的影響無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。最佳提取條件為A1B2C2D3，即用8倍量的水，回流提取3次，每次提取1.5 h。

2.3 凝膠劑的制備

2.3.1 制備工藝 稱取處方量的地榆、大黃、黃芩、黃柏、黃連，分別按上述最佳工藝提取藥材，過濾藥渣合并濾液，60℃減壓回收乙醇，濃縮至適量，備用。將處方量卡波姆撒于適量水中，使其充分溶脹，用適量乙醇將尼泊金乙酯溶解后與甘油、丙二醇一起加入卡波姆中，使用高速攪拌機邊攪拌邊加入藥液，充分攪勻。加入適量的三乙醇胺調(diào)節(jié)pH至6.0，再加蒸餾水至足量，充分攪勻，即得1 000 g凝膠。

2.3.2 黏度的測定 依據(jù)流變儀的使用說明，調(diào)整零點，將新制備的6號凝膠加入流變儀的測定容器中，以一定的剪切速率測定黏度，記錄其黏度值。獨立測定4次，取其平均值，結果見表7。

表7 黏度測定結果Tab.7 The result of viscosity determination

3 討論

文章對地榆四黃散的提取工藝進行優(yōu)化，使用SPSS 18.0進行方差分析，篩選出最佳工藝。并將原有劑型改為凝膠劑，制備出的凝膠細膩、均勻，光澤度好，易涂展。選用卡波姆934P制備水溶性凝膠基質(zhì)，具有無油膩感、無刺激性、易于涂布、皮膚偶合效果好等優(yōu)點。處方中加入的甘油主要起潤滑、保濕作用，可使凝膠細膩、均勻，使用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH值和黏度，且調(diào)節(jié)pH在6～7時適于提取物的穩(wěn)定，黏度大，有助于凝膠的涂布，并不對人體皮膚產(chǎn)生刺激作用[8]。

[1] 王 華.地榆四黃散治療燒燙傷78例[J].中醫(yī)外治雜志，2006，15（4）：56.

[2] 楊金玲.大黃主要成分提取工藝研究[J].山東中醫(yī)雜志，2008，27（2）：124-126.

[3] 陳月圓,李典鵬,高江林.黃柏中總生物堿的提取及測定方法研究[J].廣西植物,2003,23（6）：565-567.

[4] 李彤彤,李 宏,侯茂君,等.黃芩化學成分及黃芩苷提取方法研究進展[J].天津藥學，2002，14（3）：7-8.

[5] 沙 明，曹愛民，王 冰，等.高效液相色譜法測定地榆中沒食子酸的含量[J].中國中藥雜志，1999,24（2）：99-100.

[6]袁振海,孫立立.地榆現(xiàn)代研究進展[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2007，14（3）：90－92.

[7] 胡志潔.SPSS 11.5軟件在正交實驗設計中的應用[J].醫(yī)學信息雜志，2007，20（5）：737-740.

[8] 舒樂新，趙啟鐸，劉志東，等.Labrasol對葛根素角膜透過性的研究[J].天津中醫(yī)藥，2010，27（6）：506-508.

Optimization of extracting art of Diyu SiHuang power and preparation of gel

WANG Ying1,2,LIU Zhi-dong1,2,CAO Qing1,2,LI Lin1,2
（1.Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine,Ministry of Education;2.Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique,Tianjin 300193,China）

[Objective]To optimize the extracting art for Diyu Sihuang powder and prepare a gel.[Methods]Using orthogonal design method and taking extracted amount of gallic acid,baicali,baicalein and some related components of Rhubarb as the observing indexes,the extracting art was optimized by analysis of variance.Gel from the extract was developed.[Results]The optimum extracting conditions of Sihuang were obtained by adding ten times amount of 50%alcohol and extracted under reflux for 1.5 h,3 times;while Diyu was obtained by adding eight times amount of water and extracted under reflux for 1.5 h,3 times.The gel was prepared by using 1.5%Carbopol and the extraction was feasible.[Conclusion]The preparation technology of gel is simple,the produced gel was fine and uniform.

Diyu Sihuang power;extract technology;gel

R284.2

A

1672-1519（2012）01-0080-03

中國博士后科學基金特別資助項目（2010003304）。

王 穎（1986-），女，碩士研究生，主要從事緩控釋制劑的研究。

劉志東。

2011-09-22）