堿性淀粉酶的發(fā)酵生產(chǎn)及其應(yīng)用研究進展

楊海泉，劉龍，李江華，堵國成，陳堅

1 江南大學(xué)工業(yè)生物技術(shù)教育部重點實驗室，江蘇 無錫 214122

2 江南大學(xué)生物工程學(xué)院，江蘇 無錫 214122

3 江南大學(xué)糧食發(fā)酵工藝與技術(shù)國家工程實驗室，江蘇 無錫 214122

淀粉酶為作用于淀粉、糖原等α-1,4-葡聚糖，水解α-1,4-糖苷鍵的酶。根據(jù)酶水解產(chǎn)物異構(gòu)類型的不同可分為α-淀粉酶 (EC3.2.1.1) 與β-淀粉酶 (EC3.2.1.2)。α-淀粉酶能水解淀粉分子內(nèi)部α-1,4-葡萄糖苷鍵，水解產(chǎn)物為糊精、麥芽寡糖、麥芽糖和葡萄糖[1-2]，在食品、紡織、醫(yī)藥和飼料等工業(yè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用[3-6]。β-淀粉酶是一種外切葡糖苷酶，從淀粉的非還原端開始裂解α-1,4-糖苷鍵，產(chǎn)物為麥芽糖和β-極限糊精，可應(yīng)用于食品、釀酒等工業(yè)領(lǐng)域[7]。根據(jù) pH穩(wěn)定性不同，淀粉酶可以分為耐酸型、普通型和耐堿型3類。堿性淀粉酶在pH 9~11的堿性環(huán)境下具有高效催化活性和穩(wěn)定性[8-10]。堿性淀粉酶在強堿性條件下水解淀粉的潛力，使其可以應(yīng)用于淀粉加工、紡織退漿以及用于自動洗衣機的洗滌劑添加等工業(yè)領(lǐng)域[4-6,8]。添加堿性淀粉酶可有效除去餐具和衣物上的淀粉類污垢，提高紡織品印染質(zhì)量，有著良好的實際應(yīng)用效果和廣闊的市場需求，相關(guān)研究也因此受到廣泛重視[2,11]。日本學(xué)者Horikoshi在1971年首先報道了產(chǎn)自嗜堿芽胞桿菌A-40-2的堿性α-淀粉酶[12]。此后關(guān)于堿性淀粉酶的研究陸續(xù)報道，其中大多數(shù)研究主要集中在產(chǎn)堿性淀粉酶嗜堿微生物的篩選、培養(yǎng)及酶的分離純化等方面[4,9,13-15]。近年來，對堿性淀粉酶的研究逐漸向重組表達以及酶分子改造等方面發(fā)展[4,6,16]。

1 堿性淀粉酶的特性

不同來源的堿性淀粉酶酶學(xué)性質(zhì)和理化性質(zhì)有一定差別，性質(zhì)不同對其工業(yè)應(yīng)用的影響也不同。工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)具體需要，選用合適來源具有特定性質(zhì)的酶。因此，堿性淀粉酶酶學(xué)性質(zhì)的研究顯得尤為重要。

1.1 酶對底物的作用特性

堿性淀粉酶和其他酶類一樣，具有反應(yīng)底物特異性。不同來源的堿性淀粉酶其反應(yīng)底物也各不相同。堿性α-淀粉酶顯示出對淀粉及其衍生物具有最高的特異性，這些淀粉及衍生物包括支鏈淀粉、直鏈淀粉、環(huán)糊精、糖原質(zhì)和麥芽三糖等。吳襟等對來源于嗜堿芽胞桿菌的堿性 α-淀粉酶進行研究發(fā)現(xiàn)，該堿性淀粉酶對于各種來源的淀粉均有較好的水解效果，但對普魯蘭寡糖、右旋葡聚糖和環(huán)狀糊精沒有水解活性[2]。Li等分離篩選到一株嗜鹽芽胞桿菌 Halobacillus sp. 菌株，所產(chǎn)β-淀粉酶在堿性條件下降解可溶性淀粉，產(chǎn)物主要為β-麥芽糖[7]。

1.2 耐堿性與耐熱性

pH對酶活力影響較大，不同來源的堿性淀粉酶具有不同最適反應(yīng)pH和穩(wěn)定pH范圍 (表1)。在最適pH條件下反應(yīng)，可最大程度發(fā)揮酶活力，提高酶反應(yīng)效率。在穩(wěn)定pH范圍內(nèi)，堿性淀粉酶穩(wěn)定性最強，減小了酶在貯存過程中的損失。在工業(yè)應(yīng)用中，應(yīng)確定反應(yīng)和貯存的最佳條件，最大程度上提高堿性淀粉酶的使用效率和貯存穩(wěn)定性。

溫度對堿性淀粉酶酶活力及穩(wěn)定性具有較大影響，來源于不同微生物的堿性淀粉酶的最適反應(yīng)溫度和穩(wěn)定溫度范圍也不同 (表1)。在最適反應(yīng)溫度和穩(wěn)定溫度范圍內(nèi)，堿性淀粉酶的催化效率和穩(wěn)定性最高。具有較高熱穩(wěn)定性的堿性淀粉酶在洗滌劑制造工業(yè)以及醫(yī)藥和分析化學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的商業(yè)應(yīng)用價值[14]。

表1 堿性淀粉酶的耐堿性與耐熱性Table 1 Alkali resistance and heat resistance of alkaline amylase

1.3 金屬離子對酶活力的影響

堿性淀粉酶是金屬酶，部分金屬離子對酶有激活作用，但也有許多金屬離子尤其是重金屬離子對其有抑制作用。金屬離子對酶的作用具有一定選擇性，不同金屬離子對不同來源的堿性淀粉酶的作用各不相同 (表2)。

1.4 理化特性

一些化學(xué)試劑對堿性淀粉酶活力具有一定影響，其中包括巰基、N-溴琥珀酸亞胺、p-羥基汞苯甲酸、碘乙酸、N,O-雙 (三甲基硅烷基) 乙酰胺 (BSA)、乙二胺四乙酸 (EDTA)、乙二醇雙 (2-氨基乙基醚) 四乙酸 (EGTA) 以及表面活性劑等[6,8,20]。不同來源的堿性淀粉酶對化學(xué)試劑敏感程度存在較大差異。Burhan等對來源于芽胞桿菌Bacillus sp. ANT-6的堿性淀粉酶進行研究發(fā)現(xiàn)，10 mmol/L EDTA、8 mol/L尿素及0.1% SDS對該堿性淀粉酶都有較強抑制作用[8]。吳襟等對來自嗜堿性芽胞桿菌的堿性淀粉酶進行研究發(fā)現(xiàn)，高濃度EDTA對其有部分抑制作用，而SDS對酶活影響不大[2]。Wang等對產(chǎn)自嗜堿菌Alkalimonas amylolytica的堿性淀粉酶進行研究發(fā)現(xiàn)，5 mmol/L EDTA對酶活性幾乎沒有影響[1]。Murakami等將來自嗜堿芽胞桿菌Bacillus halodurans MS-2-5的堿性淀粉酶在E. coli中進行表達后對其性質(zhì)進行研究發(fā)現(xiàn)，重組堿性淀粉酶被EDTA抑制，而巰基試劑 (如 p-羥基汞苯甲酸 (PCMB) 和一碘代乙酸) 對酶活性沒有明顯抑制作用[6]。

2 堿性淀粉酶的生產(chǎn)

來源不同的堿性淀粉酶的產(chǎn)量存在較大差異。獲得高產(chǎn)堿性淀粉酶菌株的主要方法包括：1) 篩選一株高效生產(chǎn)堿性淀粉酶的優(yōu)良菌株；2) 利用傳統(tǒng)方法對產(chǎn)酶菌株進行物理、化學(xué)誘變以及發(fā)酵過程優(yōu)化等研究，提高酶產(chǎn)量；3) 通過分子生物學(xué)手段構(gòu)建堿性淀粉酶重組生產(chǎn)菌株，實現(xiàn)酶的高效異源表達。

2.1 產(chǎn)酶微生物篩選

嗜堿微生物作為極端微生物，是一類僅能在堿性條件下 (pH 9.0~11.0) 生長的微生物總稱，由于具有許多特殊性能，日益受到關(guān)注，其中對嗜堿芽胞桿菌研究最多[22]。Li等篩選獲得一株生產(chǎn)堿性β-淀粉酶的Halobacillus sp. 菌株[7]。作者篩選獲得一株生產(chǎn)堿性淀粉酶的嗜堿芽胞桿菌Bacillus alcalophilus JN21菌株[11]。

2.2 高產(chǎn)菌株選育

堿性淀粉酶生產(chǎn)菌株篩選是獲得堿性淀粉酶的第一步，但初步篩選的產(chǎn)酶菌株產(chǎn)酶量相對較低。堿性淀粉酶高產(chǎn)菌株選育常采用傳統(tǒng)紫外線 (UV)、Co-r射線、亞硝基胍 (NTG) 和硫酸二乙酯 (DES) 等方法。傳統(tǒng)堿性淀粉酶生產(chǎn)菌株的選育存在正突變率較低、不利于選出優(yōu)良產(chǎn)酶菌株等缺點。采用復(fù)合誘變方法可在一定程度上克服上述缺點，達到選育目的。劉建龍等采用復(fù)合誘變修復(fù)方法，將紫外線、亞硝基胍誘變處理與He-Ne激光輻照相結(jié)合，通過選擇適宜的激光輻射劑量，正突變率明顯提高，成功選育出一株優(yōu)良的堿性淀粉酶生產(chǎn)菌株[23]。

表2 金屬離子對堿性淀粉酶酶活力的影響Table 2 Effects of metal ions on the activity of alkaline amylase

2.3 產(chǎn)酶重組菌的構(gòu)建

野生型堿性淀粉酶生產(chǎn)菌株存在一定局限性，利用傳統(tǒng)育種等手段，其產(chǎn)酶量較難得到實質(zhì)性提高[11,13-14,19,23]。利用分子生物學(xué)手段對堿性淀粉酶進行高效異源表達是提高產(chǎn)量的一種有效方式[11]。Wang與Murakami等分別將來源于Alkalimonas amylolytica和B. halodurans的堿性淀粉酶基因序列成功在E. coli中進行表達，優(yōu)化后堿性淀粉酶最高產(chǎn)量達52 U/mL[1,6]。作者將來源于B. alcalophilus的堿性淀粉酶基因序列成功在B. subtilis中進行高效表達，優(yōu)化后堿性淀粉酶最高產(chǎn)量為441 U/mL，較野生菌提高了79倍[11]。

2.4 過程優(yōu)化與分離純化

為了進一步提高堿性淀粉酶生產(chǎn)菌株的產(chǎn)酶能力，需要進行過程優(yōu)化與控制研究，包括培養(yǎng)基組成、發(fā)酵溫度、pH、培養(yǎng)模式等。作者對產(chǎn)堿性淀粉酶重組枯草芽胞桿菌進行培養(yǎng)基優(yōu)化，確定培養(yǎng)基成分為0.6%淀粉、1.45%蛋白胨、1.3%豆餅粉，堿性淀粉酶產(chǎn)量提高了4.5倍[11]。Pancha等對堿性淀粉酶生產(chǎn)菌株Bacillus sp. 進行培養(yǎng)基優(yōu)化發(fā)現(xiàn)，添加乳糖、酵母粉和酪蛋白可顯著提高酶的產(chǎn)量[15]。Saxena等對Bacillus sp. PN5的發(fā)酵溫度和pH優(yōu)化后發(fā)現(xiàn)，60 ℃時堿性淀粉酶產(chǎn)量較優(yōu)化前提高2倍；發(fā)酵pH為10.0時產(chǎn)酶最高[13]。

高純度堿性淀粉酶是一種重要的水解淀粉類酶制劑，可應(yīng)用于酶反應(yīng)機理和生化反應(yīng)平衡常數(shù)等研究。堿性淀粉酶分離純化方法很多，主要依據(jù)酶分子大小、形狀、電荷性質(zhì)、溶解度、穩(wěn)定性、專一性結(jié)合位點等性質(zhì)。高純度堿性淀粉酶的獲得，需要綜合運用各種方法。鹽析沉淀、凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水作用層析、親和層析和電泳等是堿性淀粉酶分離純化的主要方法。吳襟等對來源于嗜堿芽胞桿菌alkaliphilic Bacillus sp. BG-CSN的堿性淀粉酶進行純化，先后采用了硫酸銨鹽析沉淀、Octyl-Sepharose CL-4B 疏水柱層析、DEAESepharose Fast Flow離子交換柱層析、DEAEToyopearl 650M 離子交換柱層析和 Sephadex G-100分子凝膠過濾柱層析等方法，純化后比酶活提高了23倍[2]。Murakami等采用多種方法對重組表達堿性淀粉酶進行純化，分別為：DEAE-cellulose柱、DEAE-Toyopearl 650 S柱、Phenyl-Toyopearl 650 M 柱、PAGE (Polyacry lamide gel electrophoresis) 柱等[4]。

3 堿性淀粉酶分子改造

堿性淀粉酶應(yīng)用于紡織、洗滌劑等工業(yè)領(lǐng)域，對其酶學(xué)性質(zhì)有不同的要求，主要包括抗氧化性和熱穩(wěn)定性。來源于野生菌株未經(jīng)改造的堿性淀粉酶，在抗氧化性和熱穩(wěn)定性等方面存在一定局限性。針對以上局限性，利用蛋白質(zhì)工程對酶進行修飾及分子改造可以達到提高抗氧化性和熱穩(wěn)定性的目的。堿性淀粉酶分子改造與修飾需要對其進行結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系、突變以及分子模型研究，這些研究的前提是進行各種與酶物理化學(xué)性質(zhì)相關(guān)氨基酸殘基的鑒定分析。

堿性淀粉酶抗氧化性是其應(yīng)用于洗滌劑等行業(yè)的重要指標(biāo)之一。半胱氨酸和甲硫氨酸是兩種易氧化氨基酸。甲硫氨酸發(fā)生氧化后生成相應(yīng)亞砜衍生物，導(dǎo)致堿性淀粉酶活性降低甚至失活。利用耐氧化氨基酸替代酶分子中甲硫氨酸，可以提高酶的抗氧化性。耐氧化氨基酸為較小且不含硫的氨基酸，例如亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、絲氨酸和蘇氨酸。Khemakhem等將堿性淀粉酶活性位點周圍的甲硫氨酸 (Met197) 替換為丙氨酸，耐氧化性有極大提高[24]。

熱穩(wěn)定性提高對于堿性淀粉酶的應(yīng)用具有重要意義。堿性淀粉酶熱穩(wěn)定性分子改造，首先需要對酶三維結(jié)構(gòu)和相應(yīng)氨基酸進行分析，確定關(guān)鍵位點和關(guān)鍵區(qū)域。針對關(guān)鍵位點及區(qū)域進行分子改造，改變酶分子不同位點、區(qū)域之間的相互作用，達到熱穩(wěn)定性提高的目的[25-27]。分子改造主要包括不同氨基酸替換突變、氨基酸敲除等。Ali等對堿性淀粉酶三維結(jié)構(gòu)進行比對分析發(fā)現(xiàn)異亮氨酸 (Ile214) 和甘氨酸 (Gly215) 為影響酶熱穩(wěn)定性的關(guān)鍵位點。對這兩個氨基酸殘基進行敲除，敲除后堿性淀粉酶在100 ℃的半衰期由15 min提高至70 min[27]。

4 堿性淀粉酶的應(yīng)用

堿性淀粉酶重要用途之一是應(yīng)用于紡織退漿工業(yè)。傳統(tǒng)紡織印染生產(chǎn)工藝污染嚴(yán)重，實行生態(tài)整理、綠色染整成為當(dāng)務(wù)之急，生物酶退漿處理工藝應(yīng)運而生。生物酶退漿具有顯著優(yōu)點：退漿率高、工藝條件溫和、能耗低、對織物損傷小等[28]。酶退漿工藝因其綠色染整加工特性，在高檔織物生產(chǎn)中居于重要地位[29]。生物酶退漿主要應(yīng)用淀粉酶[30]。由于普通淀粉酶耐堿性能差，生物退漿和生物精煉工藝分開進行，存在工藝復(fù)雜、勞動強度大、生產(chǎn)效率低等缺點。在紡織物處理過程中，堿性淀粉酶的應(yīng)用可使退漿與精煉兩步處理工藝合為一步，實現(xiàn)一浴法。一浴法具有如下優(yōu)點：更好的預(yù)洗滌效果、提高織物質(zhì)量、較好的預(yù)處理效益、低污染、纖維表面效果提高等[31]。2005年Novozymes公司推出一種pH值范圍為5~10的堿性淀粉酶，該堿性淀粉酶可替代普通淀粉酶，使退漿與生物精煉處理工藝合為一步成為可能。2008年Novozymes公司采用堿性淀粉酶與果膠酶對退漿與生物精煉一浴法進行實驗，取得了較好結(jié)果，節(jié)省了能源且處理后纖維材質(zhì)也有較大改變[10]。

堿性淀粉酶還可應(yīng)用于加酶洗滌劑助劑。加酶洗滌劑具有增加洗滌效果、縮短洗滌時間、延長織物壽命等優(yōu)點。加酶洗滌劑主要形式是利用多種堿性酶復(fù)配成復(fù)合型加酶洗滌劑，大大提高了洗滌效果，但對于堿性淀粉酶添加目前還處在初級階段。Novozymes公司率先開發(fā)出添加洗滌劑型淀粉酶 Termanyl品種，該酶來源于地衣芽胞桿菌Bacillus licheniformis，在60 ℃、pH 9.0時，酶活力喪失60%以上，pH 10.0時僅有活力20%左右[22]。由此可見，盡管該酶已應(yīng)用于洗滌劑，但在堿性條件下酶活力損失較大。

堿性淀粉酶其他應(yīng)用領(lǐng)域為：與堿性纖維素共同作用，進行環(huán)境處理；在造紙工業(yè)中降低紙漿黏度；醫(yī)藥生產(chǎn)等[11]。隨著酶工程技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，堿性淀粉酶應(yīng)用范圍將不斷擴大。

5 發(fā)展前景

堿性淀粉酶作為一種重要工業(yè)用酶，逐步應(yīng)用于洗滌劑添加和紡織退漿等領(lǐng)域，取得了一定使用效果。在提高效率、提高產(chǎn)品質(zhì)量、節(jié)約資源和環(huán)境保護等方面都有著極其重要的作用。但由于前期主要研究工作集中在堿性淀粉酶生產(chǎn)菌種篩選以及酶學(xué)性質(zhì)等方面，堿性淀粉酶產(chǎn)量以及部分酶學(xué)特性不能滿足實際工業(yè)化生產(chǎn)、應(yīng)用需要，這些局限性阻礙了堿性淀粉酶在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用進程。今后堿性淀粉酶研究前景主要集中在以下幾個方面：堿性淀粉酶優(yōu)良基因篩選及高效表達重組菌株構(gòu)建；利用蛋白質(zhì)工程等手段對堿性淀粉酶進行結(jié)構(gòu)分析及分子改造，改良其酶學(xué)特性 (如抗氧化性、熱穩(wěn)定性等)；通過發(fā)酵過程優(yōu)化控制策略，實現(xiàn)堿性淀粉酶高效生產(chǎn)。

[1] Wang N, Zhang YH, Wang QH, et al. Gene cloning and characterization of a novel α-amylase from alkaliphilic Alkalimonas amylolytica. Biotechnol J, 2006, 1(11): 1258?1265.

[2] Wu J, Peng P, Shen W, et al. Purification and characterization of α-amylase from an alkaliphilic Bacillus sp. strain BG-CSN. Chin J Biochem Mol Biol, 2005, 21(6): 852?856.吳襟, 彭平, 沈文, 等. 嗜堿性芽孢桿菌堿性α淀粉酶的純化和性質(zhì). 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報, 2005, 21(6): 852?856.

[3] Malhotra R, Noorwez SM, Satyanarayana T. Production and partial characterization of thermostable and calcium-independent α-amylase of an extreme thermophile Bacillus thermooleovorans NP54. Lett Appl Microbiol, 2000, 31(5): 378?384.

[4] Murakami S, Nishimoto H, Toyama Y, et al. Purification and characterization of two alkaline, thermotolerant α-amylases from Bacillus halodurans 38C-2-1 and expression of the cloned gene in Escherichia coli. Biosci Biotechnol Biochem, 2007, 71(10): 2393?2401.

[5] Hashim SO, Delgado O, Hatti-Kaul R, et al. Starch hydrolysing Bacillus halodurans isolates from a Kenyan soda lake. Biotechnol Lett, 2004, 26(10): 823?828.

[6] Murakami S, Nagasaki K, Nishimoto H, et al. Purification and characterization of five alkaline, thermotolerant, and maltotetraose-producing α-amylases from Bacillus halodurans MS-2-5, and production of recombinant enzymes in Escherichia coli. Enzyme Microb Technol, 2008, 43(4/5): 321?328.

[7] Li X, Yu HY. Extracellular production of beta-amylase by a halophilic isolate, Halobacillus sp. LY9. J Ind Microbiol Biotechnol, 2011, 38(11): 1837?1843.

[8] Burhan A, Nisa U, G?khan C, et al. Enzymatic properties of a novel thermostable, thermophilic, alkaline and chelator resistant amylase from an alkaliphilic Bacillus sp. isolate ANT-6. Process Biochem, 2003, 38(10): 1397?1403.

[9] Hagihara H, Igarashi K, Hayashi Y, et al. Novel α-amylase that is highly resistant to chelating reagents and chemical oxidants from the alkaliphilic Bacillus isolate KSM-K38. Appl Environ Microbiol, 2001, 67(4): 1744?1750.

[10] Kuilderd H, Wu G. Applied technologysimultaneous desizing and scouring with enzymes-simultaneous fabric desizing and scouring, using alkaline alpha-amylase and an alkaline scouring enzyme, reduces water. AATCC Rev-Am Assoc Text Chem Color, 2008, 8(6): 33?36.

[11] Yang HQ, Liu L, Li JH, et al. Heterologous expression, biochemical characterization, and overproduction of alkaline α-amylase from Bacillus alcalophilus in Bacillus subtilis. Microb Cell Fact, 2011, 10(1): 77.

[12] Horikoshi K. Production of alkaline enzymes by alkalophilic microorganisms. Agri Biol Chem, 1971, 35(11): 1783?1791.

[13] Saxena RK, Dutt K, Agarwal L, et al. A highly thermostable and alkaline amylase from a Bacillus sp. PN5. Bioresour Technol, 2007, 98(2): 260–265.

[14] Dastager GS, Li WJ, Agasar D, et al. Streptomyces gulbargensis sp. nov., isolated from soil in Karnataka, India. Antonie Van Leeuwenhoek, 2007, 91(2): 99?104.

[15] Pancha I, Jain D, Shrivastav A, et al. A thermoactive α-amylase from a Bacillus sp. isolated from CSMCRI salt farm. Int J Biol Macromol, 2010, 47(2): 288?291.

[16] Khemakhem B, Ali MB, Aghajari N, et al. Engineering of the α-amylase from Geobacillus stearothermophilus US100 for detergent incorporation. Biotechnol Bioeng, 2009, 102(2): 380?389.

[17] Hmidet N, Bayoudh A, Berrin JG, et al. Purification and biochemical characterization of a novel α-amylase from Bacillus licheniformis NH1: cloning, nucleotide sequence and expression of amyN gene in Escherichia coli. Process Biochem, 2008, 43(5): 499?510.

[18] Hashim SO, Delgado OD, Martínez MA, et al. Alkaline active maltohexaose-forming α-amylase from Bacillus halodurans LBK 34. Enzyme Microbial Technol, 2005, 36(1): 139?146.

[19] Syed DG, Agasar D, Pandey A. Production and partial purification of α-amylase from a novel isolate Streptomyces gulbargensis. J Ind Microbiol Biotechnol, 2009, 36(2): 189?194.

[20] Zhao J, Lan XJ, Su J, et al. Isolation and identification of an alkaliphilic Bacillus flexus XJU-3 and analysis of its alkaline amylase. Acta Microbiol Sin, 2008, 48(6): 750?756.

[21] Luo ZG, Yang JF, Luo FX. Properties and applications of α-amylase. Food Res Dev, 2007, 28(8): 163?167.羅志剛, 楊景峰, 羅發(fā)興. α-淀粉酶的性質(zhì)及應(yīng)用. 食品研究與開發(fā), 2007, 28(8): 163?167.

[22] Liu CL, Zhang WX, Yang R. Applying research and prospect of several special α-amylases. Sichuan Food Ferment, 2002, 38(4): 5?9.劉春莉, 張文學(xué), 楊瑞. 特殊 α-淀粉酶的應(yīng)用研究現(xiàn)狀和前景展望. 四川食品與發(fā)酵, 2002, 38(4): 5?9.

[23] Liu JL, Liu JJ, Yang LS. Study on the breeding of alkaline amylase producing strain by UV and He-Ne laser compound mutation and the conditions for enzyme production. Laser J, 2005, 26(3): 83?84.劉建龍, 劉建軍, 楊連生. 堿性淀粉酶菌株的紫外線和 He-Ne激光復(fù)合誘變及其產(chǎn)酶條件的研究.激光雜志, 2005, 26(3): 83?84.

[24] Khemakhem B, Ali MB, Aghajari N, et al. Engineering of the α-amylase from Geobacillus stearothermophilus US100 for detergent incorporation. Biotechnol Bioeng, 2009, 102(2): 380?389.

[25] Nielsen JE, Borchert TV. Protein engineering of bacterial α-amylases. Biochim Biophys Acta, 2000, 1543(2): 253?274.

[26] Declerck N, Machius M, Joyet P, et al. Engineering the thermostability of Bacillus licheniformis α-amylase. Biologia (Bratislava), 2002, 57(Suppl 11): 203?212.

[27] Ali MB, Khemakhem B, Robert X, et al. Thermostability enhancement and change in starch hydrolysis profile of the maltohexaose-forming amylase of Bacillus stearothermophilus US100 strain. Biochem J, 2006, 394(Pt 1): 51?56.

[28] Wang P, Wang Q, Fan XR, et al. evaluation of wetting property of cotton fabrics after enzyme pretreatment. Dye Finish, 2002, 28(12): 28?31.王平, 王強, 范雪榮, 等. 棉織物生物酶前處理潤濕性評價. 印染, 2002, 28(12): 28?31.

[29] Pu ZY, Chen S, Lu T, et al. Study on thermo-stable amylase desizing for cotton fabric. Prog Text Sci Technol, 2006(1): 24?26.蒲宗耀, 陳松, 盧濤, 等. 耐堿耐溫淀粉酶性能及退漿工藝試驗研究. 紡織科技進展, 2006(1): 24?26.

[30] Zhao HJ, Liu ZJ, Wang PJ, et al. Application of enzyme OPT-260 in desizing. Dye Finish, 2003, 29(8): 12?14.趙海軍, 劉志軍, 王佩軍, 等. 液體寬溫退漿酶在前處理中的應(yīng)用. 印染, 2003, 29(8): 12?14.

[31] Feng BB, Xu HY, Cai ZS. Steaming pretreatment with unsaturated steam for cotton fabric with enzymes. Dye Finish, 2004, 30(1): 7?14.馮碧波, 許海育, 蔡再生. 棉織物的生物酶退練一浴連續(xù)工藝探討. 印染, 2004, 30(1): 7?14.