辣椒不同外植體處理方法對(duì)組織培養(yǎng)再生的影響

曹亞從 張正海 王立浩 毛勝利 張寶璽

（農(nóng)業(yè)部園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)蔬菜花卉研究所，北京 100081）

辣椒（Capsicum annuumL．）屬于茄科（Solanaceae），是一種重要的蔬菜作物，與番茄、馬鈴薯等其他茄科蔬菜作物相比，其組織培養(yǎng)的再生率很低（Liu et al.，1990），屬于頑拗型再生植物。辣椒不同基因型的外植體，其內(nèi)源激素水平有很大差異，而且不同組織器官內(nèi)源激素分布有差異（李浚明，2002），所以不同基因型、不同組織器官很難建立一個(gè)通用的組織培養(yǎng)再生體系。辣椒再生困難主要表現(xiàn)為芽誘導(dǎo)率以及伸長(zhǎng)率低。在辣椒芽誘導(dǎo)培養(yǎng)中，通常在培養(yǎng)基中添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)，以提高芽誘導(dǎo)率，使用較多的是IAA 和6-BA 組合（Agrawal et al.，1989；Sanatombi ＆ Sharma，2008），以及TDZ（Manoharan et al.，1998；Dabauza ＆ Pena，2001；Ahmad et al.，2006）、ZT（Binzel et al.，1996）等，也有報(bào)道稱通過調(diào)整培養(yǎng)基中的有機(jī)成分可以促進(jìn)芽的分化（Hyde ＆ Phillips，1996；Husain et al.，1999；羅齊軍，2005），無機(jī)物AgNO3也常被用來促進(jìn)芽的分化（Hyde ＆ Phillips，1996）。細(xì)胞分裂素能促進(jìn)細(xì)胞的分裂，對(duì)于伸長(zhǎng)有一定的抑制作用，在辣椒再生培養(yǎng)的伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中通常降低細(xì)胞分裂素的含量，并加入GA3來促進(jìn)再生芽的伸長(zhǎng)（Berljak，1999；Steinitz et al.，1999；Arouset al.，2001；Joshi ＆ Kothari，2007）。

外植體的類型對(duì)于辣椒的組織培養(yǎng)再生有很大影響，Valadez-Bustos 等（2009）的研究表明，以子葉為外植體時(shí)，再生芽難以形成正常植株，多為叢生的畸形芽或葉狀體，而以下胚軸為外植體誘導(dǎo)出的芽容易生成再生植株。張宗江等（1994）研究認(rèn)為由子葉誘導(dǎo)出的葉狀體實(shí)際上是外植體組織的延伸，所以并不能形成正常的芽。筆者曾以本試驗(yàn)中的5 個(gè)品系為試材，以子葉作為外植體進(jìn)行辣椒的組培再生，發(fā)現(xiàn)了相似的現(xiàn)象，只得到了較少的再生植株（待發(fā)表）。

組織培養(yǎng)再生是遺傳轉(zhuǎn)化的必要前提，本試驗(yàn)以5 個(gè)基因型的辣椒為試材，采用不同處理方法的外植體，在添加或不添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)的MS 培養(yǎng)基上進(jìn)行再生培養(yǎng)，以期建立良好的再生體系，旨在為辣椒的遺傳轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 試驗(yàn)材料 3 個(gè)甜椒自交系（0510、0516、77013）和2 個(gè)辣椒自交系（0818、0819）均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所辣椒課題組選育。

1.1.2 培養(yǎng)基成分 M0，MS+蔗糖30.0 g·L-1+瓊脂8.0 g·L-1（pH 6.0）；M1，MS + IAA（0.2、0.4 mg·L-1）+ 6-BA（4.0、5.0、6.0 mg·L-1）+ 蔗糖30.0 g·L-1+ 瓊脂8.0 g·L-1（pH 6.0）；M2，MS + IAA（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg·L-1）+ 6-BA（4.0、5.0、6.0 mg·L-1）+ AgNO3（0、5.0、10.0 mg·L-1）+ 蔗糖30.0 g·L-1+ 瓊脂8.0 g·L-1（pH 6.0）；M3，MS + ZT 或TZT（2.0 mg·L-1）+蔗糖30.0 g·L-1+ 瓊脂8.0 g·L-1（pH 6.0）。

1.2 無菌苗的獲得

種子在75%酒精中浸泡處理1 min，再用有效氯9%的次氯酸鈉溶液浸泡10 min，然后用無菌水以流水的方式?jīng)_洗20 s，獲得無菌種子。將無菌種子播于M0和M1培養(yǎng)基，置于27 ℃、每天光照16 h 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，獲得無菌苗。

1.3 不同處理方法外植體的再生

1.3.1 下胚軸切段的再生 采用M0培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的無菌苗，當(dāng)無菌苗的下胚軸剛伸直時(shí)（播種后10～12 d），切去子葉、生長(zhǎng)點(diǎn)和根，將下胚軸截為1 cm 左右的小段作為外植體，置于M0和M2培養(yǎng)基（Agrawal et al.，1989；Arroyo ＆ Revilla，1991；Christopher ＆ Rajam，1996；Sanatombi ＆ Sharma，2008），20 d 更換一次培養(yǎng)基。

1.3.2 直接斬首后下胚軸的再生 采用M0和M1培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的無菌苗，分3 個(gè)時(shí)段進(jìn)行處理，分別是：無菌苗還未脫掉種皮時(shí)（播種后約7 d），緊挨萌發(fā)孔處切去子葉及生長(zhǎng)點(diǎn)；無菌苗長(zhǎng)至彎鉤狀時(shí)（播種后約9 d），從彎鉤處剪去子葉及生長(zhǎng)點(diǎn)；無菌苗的下胚軸剛伸直時(shí)（播種后10～12 d），從子葉下方約5 mm 處剪去子葉和生長(zhǎng)點(diǎn)。去除子葉和生長(zhǎng)點(diǎn)的帶根下胚軸繼續(xù)置于原培養(yǎng)基中培養(yǎng)，20 d 更換一次培養(yǎng)基。

1.3.3 針刺斬首后下胚軸的再生 采用M0培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的無菌苗，分2 個(gè)時(shí)段進(jìn)行處理，分別是：當(dāng)無菌苗長(zhǎng)至彎鉤狀時(shí)，用無菌針刺破下胚軸彎鉤處，繼續(xù)在原培養(yǎng)基上培養(yǎng)12 d 后，從子葉以下1～2 mm 處剪去子葉及生長(zhǎng)點(diǎn)（Ramirez-Malagón ＆ Ochoa-Alejo，1996）；當(dāng)無菌苗的下胚軸剛伸直時(shí)，從子葉下方約5 mm 處刺破下胚軸，繼續(xù)在原培養(yǎng)基上培養(yǎng)12 d 后，從子葉以下1～2 mm 處剪去子葉及生長(zhǎng)點(diǎn)。20 d 更換一次培養(yǎng)基。

1.3.4 半粒種子的再生 處理方法參照Ezura等（1993）的方法，將無菌濾紙放于已滅菌的培養(yǎng)皿中，用無菌水將濾紙浸潤(rùn)后，將無菌種子置于濾紙上預(yù)培養(yǎng)3 d，培養(yǎng)條件同無菌苗的培養(yǎng)。預(yù)培養(yǎng)3 d 的無菌種子從萌發(fā)孔處橫切為兩部分（圖1），將帶有子葉、胚芽和部分下胚軸的半粒種子（圖1 中B 部分）置于M0培養(yǎng)基，將帶有部分下胚軸及胚根的半粒種子（圖1 中A 部分）置于M0和M3培養(yǎng)基（Binzel et al.1996），20 d 更換一次培養(yǎng)基。

圖1 種子切割示意圖（用于半粒種子培養(yǎng)）

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

外植體培養(yǎng)90 d 后，對(duì)外植體數(shù)、出芽外植體數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理方法外植體對(duì)辣椒組織培養(yǎng)再生的影響

不同處理方法外植體對(duì)辣椒的組織培養(yǎng)再生有明顯的影響，表2 中比較了幾種處理方法外植體再生率的差異。在添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中外植體未誘導(dǎo)形成再生芽（表1），此處僅討論未添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基中外植體的再生情況。

表1 不同處理方法、不同基因型的外植體再生狀況

5 份材料的下胚軸切段均能形成愈傷組織（圖2-a），但均未誘導(dǎo)出再生芽。

當(dāng)無菌苗還未露出子葉、長(zhǎng)至彎鉤狀或下胚軸剛伸直時(shí)切去子葉及生長(zhǎng)點(diǎn)，在傷口處會(huì)形成大量愈傷組織。90 d 后統(tǒng)計(jì)再生狀況，只有0516 還未露出子葉時(shí)直接斬首后的帶根下胚軸（圖2-b），以及0819 長(zhǎng)至彎鉤狀態(tài)時(shí)直接斬首后的帶根下胚軸（圖2-c）各長(zhǎng)出一個(gè)伸長(zhǎng)的再生芽。

針刺下胚軸的傷口處會(huì)形成白色愈傷組織，剪去子葉及生長(zhǎng)點(diǎn)7～10 d 后，部分針刺傷口處會(huì)分化出葉片，約30 d 后有明顯伸長(zhǎng)的再生芽形成（圖2-d），斬首的傷口處不分化形成葉片及再生芽。90 d 后統(tǒng)計(jì)再生狀況，0510 下胚軸剛伸直時(shí)針刺后斬首的帶根下胚軸，以及0516下胚軸彎鉤狀時(shí)針刺后斬首的帶根下胚軸未形成再生植株。

帶有子葉、胚芽以及部分下胚軸的半粒種子會(huì)在傷口處形成根（圖2-e）；帶有胚根及部分下胚軸的半粒種子播于MS 固體培養(yǎng)基上后，長(zhǎng)出正常的根，有的外植體傷口處只形成大量白色愈傷組織（圖2-f），有的外植體傷口處形成少量白色愈傷組織，也有外植體在傷口處形成綠色不定芽，并形成葉片（圖2-g），大約播種30 d 后，部分外植體有再生芽出現(xiàn)（圖2-h）。外植體形成明顯再生芽的誘導(dǎo)時(shí)間存在差異，播種后30～90 d 期間均有伸長(zhǎng)的再生芽形成。大部分外植體只形成一個(gè)伸長(zhǎng)的再生芽，只有極少數(shù)形成兩個(gè)以上伸長(zhǎng)的再生芽（圖2-i）。

不同處理方法的外植體，形成再生芽的時(shí)間也存在差異。當(dāng)以帶有胚根和部分下胚軸的半粒種子作為外植體時(shí)，從播種開始大約30 d 有再生芽形成；直接斬首后的外植體，從播種開始約40 d 有再生芽形成；針刺后斬首的外植體，從播種開始大約45 d 有再生芽形成。

以帶有胚根和部分下胚軸的半粒種子作為外植體時(shí)，再生率最高，而且再生速度快，再生芽能正常伸長(zhǎng)，在本試驗(yàn)中此種處理方法的外植體最有利于辣椒的組培再生。

圖2 不同處理方法外植體對(duì)辣椒組織培養(yǎng)再生的影響

2.2 植物生長(zhǎng)物質(zhì)對(duì)辣椒幼苗及外植體組織培養(yǎng)再生的影響

在不添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，辣椒幼苗及外植體的根部生長(zhǎng)狀態(tài)正常（圖3-a），在添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的幼苗及外植體根部變粗，生長(zhǎng)狀態(tài)異常（圖3-b）。

圖3 植物生長(zhǎng)物質(zhì)對(duì)辣椒根部生長(zhǎng)的影響

在添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的下胚軸切段、直接斬首后帶有根的下胚軸和半粒種子均未誘導(dǎo)出再生芽（表1）。

2.3 基因型對(duì)辣椒組織培養(yǎng)再生的影響

本試驗(yàn)中，不同基因型的辣椒再生率存在差異（表2）。在不添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，2 個(gè)辣椒品系的平均再生率（9.00%）明顯高于3 個(gè)甜椒品系的平均再生率（0.77%）。

表2 不同處理方法、不同基因型的外植體在未添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基上的再生率 %

辣椒品系、甜椒品系內(nèi)部再生率也存在差異。甜椒品系0516 的平均再生率（1.07%）明顯高于0510（0.42%）和77013（0.82%），辣椒品系0818 的平均再生率（9.85%）明顯高于0819（8.16%）。

2.4 AgNO3對(duì)外植體的影響

在下胚軸切段進(jìn)行再生的過程中，添加 AgNO3的培養(yǎng)基中外植體的顏色較深，在不添加AgNO3的培養(yǎng)基中外植體的顏色較淺，而且呈現(xiàn)出玻璃化的狀態(tài)。添加AgNO3可能對(duì)減少外植體的玻璃化狀態(tài)有一定的作用，但對(duì)于外植體的再生并無明顯的促進(jìn)作用。

3 結(jié)論與討論

根部和幼嫩葉片能夠合成生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素（武維華，2008），Ramirez-Malagón 和Ochoa-Alejo（1996）以及Pozueta-Romero等（2001）認(rèn)為子葉在生長(zhǎng)過程中形成的植物激素對(duì)于形成伸長(zhǎng)的再生芽有重要作用，切除子葉和生長(zhǎng)點(diǎn)后，只帶有胚根和下胚軸的外植體并不能形成伸長(zhǎng)的再生芽。然而，與其結(jié)果不同的是，在本試驗(yàn)中帶有胚根和部分下胚軸的外植體能夠在不添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中形成再生芽，此結(jié)果說明根在再生芽形成過程中有重要作用，可能是根部合成的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素促進(jìn)了下胚軸的再生。針刺后斬首的帶根下胚軸（下胚軸形成傷口后一段時(shí)期內(nèi)仍保留子葉，并有真葉形成）的再生率高于直接斬首的帶根下胚軸（下胚軸形成傷口后不保留子葉），說明葉片對(duì)再生芽的形成有促進(jìn)作用，可能是葉片合成的激素在一定程度上促進(jìn)了再生芽的分化。

在辣椒的組織培養(yǎng)再生中，常使用生長(zhǎng)素（IAA）和細(xì)胞分裂素類（6-BA、TDZ、ZT）這兩類植物生長(zhǎng)物質(zhì)來促進(jìn)再生芽的分化（Agrawal et al.，1989；Binzel et al.，1996；Ahmad et al.，2006）。然而，在本試驗(yàn)中不帶子葉、胚芽及胚根的下胚軸切段，即使在添加了生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的培養(yǎng)基中，也未分化出再生芽。可能原因是本試驗(yàn)中采用的植物生長(zhǎng)物質(zhì)濃度、配比沒有滿足所采用外植體再生的需求。

基因型對(duì)辣椒的離體再生有很大影響，這也是對(duì)辣椒再生研究最多的一個(gè)影響因素。對(duì)于特定的培養(yǎng)方法，選擇合適的基因型是建立高效、穩(wěn)定再生體系的前提。本試驗(yàn)中采用的2 個(gè)辣椒品系（0818、0819）的再生率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于3 個(gè)甜椒品系（0510、0516、77013），這與前人的報(bào)道相吻合（陳靜嫻和聶凡，1990；Dabauza & Pena，2001；羅齊軍和曾富華，2007），辣椒品系比甜椒品系易形成再生植株。

辣椒的組培再生芽可以由外植體傷口處直接誘導(dǎo)形成，也可以由傷口處形成的愈傷組織再分化形成，但是在辣椒的組培再生中，由愈傷組織再分化出芽的比率很低（沈火林 等，1993），再生芽往往是由傷口處直接形成（別之龍和劉佩英，1996）。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象，再生芽往往在傷口邊緣的表皮處形成，當(dāng)傷口處形成大量白色愈傷組織，并將傷口覆蓋后，往往不能形成再生芽。將帶有胚根和部分下胚軸的半粒種子形成的白色愈傷組織剝除后，可以看到在傷口周圍有一些很小的綠色芽點(diǎn)，可能是大量的白色愈傷組織阻礙了這些綠色芽點(diǎn)的繼續(xù)發(fā)育；然而，針刺后斬首的帶根下胚軸，在其針刺傷口處，可形成大量白色愈傷組織，再生芽與大量白色愈傷組織同時(shí)存在，但是，再生芽往往在傷口邊緣形成，并不是由愈傷組織再分化形成，這些現(xiàn)象表明，不經(jīng)愈傷組織或胚狀體結(jié)構(gòu)而形成的再生芽，可能與亞麻下胚軸再生培養(yǎng)中觀察結(jié)果相似（李浚明，2002），再生芽可能是由下胚軸的表皮細(xì)胞形成。

辣椒的組培再生研究中，可以利用的外植體類型很多，Ebida 和Hu（1993）研究發(fā)現(xiàn)，子葉、莖尖和下胚軸均能形成再生植株，子葉的再生能力最強(qiáng)。但是由于基因型、培養(yǎng)基等因素的互作，不同研究中會(huì)出現(xiàn)相異的結(jié)果。本試驗(yàn)中，當(dāng)以帶有胚根和部分下胚軸的半粒種子為外植體，2 個(gè)辣椒品系有良好的再生效果，而且再生芽通常能伸長(zhǎng)，形成正常再生植株，但在此方法操作過程中要注意剔除假再生植株，再生芽通常由表皮細(xì)胞處形成，由下胚軸橫切面中心部位形成的芽通常是由原生長(zhǎng)點(diǎn)形成，不是再生芽，需要剔除。

組織培養(yǎng)再生過程中，培養(yǎng)基的成分對(duì)于誘導(dǎo)形成再生植株有重要影響，在辣椒的組培再生中，通常采用MS 培養(yǎng)基，Szász 等（1995）、Ebida 和Hu（1993）、Arroy 和Revilla（1991）均以MS 培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，進(jìn)行辣椒的組織培養(yǎng)再生，誘導(dǎo)出了完整的再生植株，但是在培養(yǎng)基中添加了不同的植物生長(zhǎng)物質(zhì)。而在本試驗(yàn)中，在不添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)的MS 培養(yǎng)基中，以帶有胚根和部分下胚軸的半粒種子為外植體，獲得到了良好的再生效果，避免了因添加植物生長(zhǎng)物質(zhì)而造成植株變異的情況。而且這種方法不需要進(jìn)行再生根的誘導(dǎo)，在一定程度上提高了再生率。

以帶有胚根和部分下胚軸的半粒種子為外植體，再生率較高，無植物生長(zhǎng)物質(zhì)的不良影響，操作比較方便，可以嘗試用于辣椒的遺傳轉(zhuǎn)化研究。

別之龍，劉佩瑛．1996．辣椒的離體培養(yǎng)與遺傳轉(zhuǎn)化．長(zhǎng)江蔬菜，（8）：1-5．

陳靜嫻，聶凡．1990．辣椒子葉培養(yǎng)及其植株再生的研究．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，（3）：255-257．

李浚明．2002．植物組織培養(yǎng)教程．2 版．北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社：51-52，54-55．

羅齊軍．2005．Rs-AFP2基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化辣椒的研究〔碩士論文〕．長(zhǎng)沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)．

羅齊軍，曾富華．2007．辣椒抗病基因工程研究進(jìn)展．亞熱帶植物科學(xué)，36（4）：67-71．

沈火林，王志源，蔣健箴，任華中，王德恒．1993．辣椒的組織培養(yǎng)與植株再生．北京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，19（2）：73．

武維華．2008．植物生理學(xué)．2 版．北京：科學(xué)出版社：271-307．

張宗江，周鐘信，劉艷軍，江倩云，尤明，劉國民，米景九．1994．黃瓜花葉病毒殼蛋白基因轉(zhuǎn)化辣椒及其在轉(zhuǎn)基因株后代的表達(dá)．華北農(nóng)學(xué)報(bào)，9（3）：67-71．

Agrawal S，Chandra N，Kothari S．1989．Plant regeneration in tissue cultures of pepper（Capsicum annuumL.cv.Mathania）．Plant Cell，Tissue and Organ Culture，16（1）：47-55．

Ahmad N，Siddique I，Anis M．2006．Improved plant regeneration inCapsicum annuumL.from nodal segments．Biologia Plantarum，50（4）：701-704．

Arous S，Boussaid M，Marrakchi M．2001．Plant regeneration from zygotic embryo hypocotyls of Tunisian chili（Capsicum annuumL.）．J Appl Hort，3（1）：17-22．

Arroyo R，Revilla M．1991．In vitroplant regeneration from cotyledon and hypocotyl segments in two bell pepper cultivars．Plant Cell Reports，10（8）：414-416．

Berljak J．1999．In vitroplant regeneration from pepper（Capsicum annuumL.cv.‘Soroksari’） seedling explants．Phyton，39（3）：289-292．

Binzel M，Sankhla N，Joshi S，Sankhla D．1996．In vitroregeneration in chile pepper（Capsicum annuumL．）from‘half-seed explants’．Plant Growth Regulation，20（3）：287-293．

Christopher T，Rajam M．1996．Effect of genotype，explant and medium onin vitroregeneration of red pepper．Plant Cell，Tissue and Organ Culture，46（3）：245-250．

Dabauza M，Pena L．2001．High efficiency organogenesis in sweet pepper（Capsicum annuumL．）tissues from different seedling explants．Plant Growth Regulation，33（3）：221-229．

Ezura H，Nishimiya S，Kasumi M．1993．Efficient regeneration of plants independent of exogeneous growth regulators in bell pepper（Capsicum annuumL．）．Plant Cell Reports，12（12）：676-680．

Ebida A，Hu C．1993．In vitromorphogenetic responses and plant regeneration from pepper（Capsicum annuumL.cv.Early California Wonder）seedling explants．Plant Cell Reports，13（2）：107-110．

Husain S，Jain A，Kothari S．1999．Phenylacetic acid improves bud elongation andin vitroplant regeneration efficiency inCapsicum annuumL.Plant Cell Reports，19（1）：64-68．

Hyde C L，Phillips G C．1996．Silver nitrate promotes shoot development and plant regeneration of chile pepper（Capsicum annuumL．）via organogesis．In VitroCellular and Developmental Biology-Plant，32（2）：72-80．

Joshi A，Kothari S．2007．High copper levels in the medium improves shoot bud differentiation and elongation from the cultured cotyledons ofCapsicum annuumL．Plant Cell，Tissue and Organ Culture，88（2）：127-133．

Liu W，Parrott W，Hildebrand D，Collins G，Williams E．1990．Agrobacterium induced gall formation in bell pepper（Capsicum annuumL．）and formation of shoot-like structures expressing introduced genes．Plant Cell Reports，9（7）：360-364．

Manoharan M，Sree Vidya C S，Lakshmi Sita G．1998．Agrobacterium-mediated genetic transformation in hot chilli（Capsicum annuumL.var.Pusa jwala）．Plant Science，131（1）：77-83．

Pozueta-Romero J，Houlne G，Canas L，Schantz R，Chamarro J．2001．Enhanced regeneration of tomato and pepper seedling explants for Agrobacetrium-mediated transformation．Plant Cell，Tissue and Organ Culture，67（2）：173-180．

Ramirez-Malagón R，Ochoa-Alejo N．1996．An improved and reliable chili pepper（Capsicum annuumL．）plant regeneration method．Plant Cell Reports，16（3）：226-231．

Sanatombi K，Sharma G．2008．In vitroplant regeneration in six cultivars ofCapsicumspp．using different explants．Biologia Plantarum，52（1）：141-145．

Steinitz B，Wolf D，Matzevitch-Josef T，Zelcer A．1999．Regenerationin vitroand genetic transformation of pepper（Capsicumspp．）：the current state of the art．Capsicum and Eggplant Newsletter，18：9-15．

Szász A，Nervo G，F(xiàn)ári M．1995．Screening forin vitroshoot-forming capacity of seedling explants in bell pepper（Capsicum annuumL.）genotypes and efficient plant regeneration using thidiazuron．Plant Cell Reports，14（10）：666-669．

Valadez-Bustos M G，Aguado-Santacruz G A，Camillo-Castaeda G，Aguilar-Rincón V H，Espitia-Rangel E，Montes-Hernández S，Robledo-Paz A．2009．In vitropropagation and agronomic performance of regenerated chili pepper（Capsicumspp．）plants from commercially important genotypes．In VitroCellular and Developmental Biology-Plant，45（6）：650-658．