5971例抗核抗體陰性病例的抗核抗體譜分析

蔣小燕

(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610072)

自身免疫性疾病是由遺傳、環(huán)境等多種因素引起的機(jī)體免疫功能紊亂，臨床表現(xiàn)多樣，多器官受累明顯?？购丝贵w(Antinuclear antibody，ANA)是具有多種細(xì)胞核成分的自身抗體，是以真核細(xì)胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱，可用于多種自身免疫性疾病的篩查，但其對(duì)各種疾病診斷的特異性［1］和敏感性不高［2］。而ANA譜采用免疫印跡技術(shù)是將凝膠電泳、抗原抗體反應(yīng)的固相免疫和免疫標(biāo)記方法結(jié)合，把多種純化的生化性質(zhì)明確的抗原包被到膜條上作為固相，然后讓膜條固定到合成的薄膜上，其特異性較ANA有較大的提高。本研究通過對(duì)5971例ANA陰性標(biāo)本進(jìn)行ANA譜檢測(cè)，探討兩者聯(lián)合檢測(cè)的意義及價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 5971例標(biāo)本均來源于2010年1月至2011年6月四川省人民醫(yī)院疑似自身免疫性疾病的門診和住院病例，年齡0～91歲［(45.83±18.65)歲］。其中男2515例，女3456例。

1.2 方法 ①標(biāo)本處理:采集受檢者非抗凝靜脈血3 ml，3000 r/min離心10 min并分離血清。②實(shí)驗(yàn)方法:ANA采用間接免疫熒光法檢測(cè)，用Garlzeiss熒光顯微鏡觀察結(jié)果，滴度＜1∶100判斷為陰性。ANA譜用免疫印跡法，采用EUROLineScan儀器軟件判斷結(jié)果。實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。試劑均來自于歐蒙(杭州)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0軟件處理檢測(cè)數(shù)據(jù)。率的比較采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ANA譜陽性率 在5971例樣本中，ANA譜陽性的標(biāo)本為422例，占7.07%。共有524個(gè)陽性項(xiàng)目。其中抗SSB抗體、抗Scl-70抗體、抗PM-Scl抗體、抗JO-1抗體(抗PCNA)、抗細(xì)胞周期蛋白抗體、抗dsDNA抗體、抗組蛋白抗體(抗tis)、抗核糖體P蛋白抗體(抗RPA)和抗AMA-M2型(抗AMAM2)陽性率分別為0.33%、0.35%、0.35%、0.28%、 0.32%、0.83%、0.63%、0.60%和0.75%。其中抗Ro-52抗體陽性率最高，為2.04%;抗SSA陽性率次之，為1.46%，見表1。

2.2 ANA譜陽性抗體陽性率及性別比 ANA陰性但ANA譜陽性共422例，其中男161例，年齡(49.82±20.18)歲;女261例，年齡(45.53±16.85)歲。單項(xiàng)抗體陽性346例，二聯(lián)抗體陽性66例，三聯(lián)及以上抗體陽性10例。單項(xiàng)抗體陽性病例中，男女陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中抗dsDNA＆抗組蛋白陽性10例，抗SSA＆抗SSB陽性4例，抗dsDNA＆抗核糖體P蛋白陽性11例，抗Ro-52＆抗線粒體M2型陽性3例，抗SSA＆抗組蛋白陽性3例，見表2。

表1 5971例ANA陰性標(biāo)本的ANA譜陽性率

表2 422例ANA譜陽性抗體陽性率及性別比 ［%(n/n)］

2.3 不同年齡組ANA譜陽性率比較 抗PCNA≤20歲組最高，≥50組次之，21～49歲組最低(P＜0.05)。不同年齡組抗Ro-52、抗nRNP、抗SSA、抗Sm、抗Jo-1、抗ScL-1、抗AMA-M2和抗dsDNA陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。

表3 不同年齡組ANA譜陽性率比較

3 討論

自身免疫性疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一是檢測(cè)出特異性或相關(guān)性的自身抗體［3］。ANA是一組具有多種細(xì)胞核成分的自身抗體，理論上考慮若ANA陰性，其他自身抗體不應(yīng)為陽性，但是在臨床中仍然發(fā)現(xiàn)不少ANA陰性而ANA譜的病例。

本次研究結(jié)果顯示，在5971例ANA陰性的病例中，篩查 ANA譜有422例陽性病例，陽性率達(dá)7.07%，與文獻(xiàn)報(bào)道［4］相比陽性率略低，可能與樣本量多少有關(guān)。Manousaakis等［5］也報(bào)道，這種現(xiàn)象的臨床意義需在大樣本范圍內(nèi)進(jìn)行探討。鄧學(xué)新等［6］報(bào)道，顯示即使抗ENA抗體陽性ANA也存在陰性的現(xiàn)象。在422例ANA譜陽性的病例中，女性占61.8%，以20歲以上年齡段為主，說明自身免疫性疾病在女性中年人群中多發(fā)［7］。

在422例ANA陰性但ANA譜陽性的病例中，以抗Ro-52陽性率最高，為28.9%;抗SSA抗體次之，為20.7%，與文獻(xiàn)報(bào)道［3］一致。在ANA譜陽性病例中，單項(xiàng)抗體陽性病例346例，占82.0%;二聯(lián)抗體陽性病例66，比例為15.64%;三聯(lián)及三聯(lián)以上抗體陽性者10例，比例為2.37%。單項(xiàng)抗體陽性病例中男女陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。說明ANA譜能夠檢測(cè)出很多自身抗體較弱者，尤其是女性疑似自身免疫疾病患者，結(jié)合臨床表現(xiàn)更能使醫(yī)生診斷疾病或者決定定期隨訪提供有益的參考依據(jù)。

對(duì)于ANA檢測(cè)陰性而ANA譜陽性的原因大多不明。陳寶萍等［8］認(rèn)為有可能在疾病初期，ANA含量較少難以被檢出或者因臨床治療有效病情得到緩解，總ANA轉(zhuǎn)陰。也有觀點(diǎn)［9］認(rèn)為在ANA檢測(cè)中采用的二抗均是IgG，而ANA主要有IgG、IgE和IgD 3種類型，對(duì)后兩種抗體的忽略也是ANA漏檢的原因之一。因此其原因還需做進(jìn)一步探討。

綜上所述，對(duì)疑似自身免疫性疾病患者，當(dāng)ANA陰性時(shí)，仍有必要進(jìn)行ANA譜檢測(cè)，特別是對(duì)中年以上的女性患者更有必要進(jìn)行兩者聯(lián)合檢測(cè)以提高對(duì)自身免疫疾病的檢出率，有利于早期治療。

［1］劉蘭，陳娟.抗核抗體在5種自身免疫疾病診斷中的應(yīng)用［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(20):2263-2264.

［2］Hilaro MO，Len CA，Roia SC，et al.Frequency of antinuclear antibodies in healthy children and adolescents［J］.Clin Pediatr(Phila)，2004，43(7):637-642.

［3］鄧安梅，仲人前，施笑梅，等.自身免疫病患者可提取核抗體譜與體液免疫的關(guān)系［J］.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1999，22(5):299-300.

［4］孫家祥，李艷.625例抗核抗體陰性病例的抗核抗體譜的檢測(cè)分析［J］.海南醫(yī)學(xué)，2011，22(7):113-114.

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［6］鄧學(xué)新，曲昌華.818例自身免疫病抗ENA抗體與抗核抗體的對(duì)照分析［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2005，23(4):302-303.

［7］張毅，儲(chǔ)以微.Th17與自身免疫疾?。跩］.復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2008，35(1):145-147.

［8］陳寶萍，任緒義，程新定.抗核抗體陰性標(biāo)本的抗可提取核抗原譜分析［J］.浙江臨床醫(yī)學(xué)，2010，12(1):75-76.

［9］邢艷，唐中.抗核抗體的研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué)科學(xué)分冊(cè)，2006，33(5):218-219.