子宮內(nèi)膜癌中uPA、P-P38和VEGF的表達及意義

劉向真，商小涓，席 豐*，孫冬霞，李彩紅，楊華英，王 蕾

(1邯鄲市婦幼保健院，河北邯鄲056001;2河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院;3邯鄲市中醫(yī)院)

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，在我國位于女性惡性腫瘤的第2位。本研究擬用免疫組化SP法檢測正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌組織中尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)、磷酸化的P38(P-P38)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白的表達情況，分析這3種蛋白表達與子宮內(nèi)膜癌生物學(xué)行為的關(guān)系，探討它們對子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展及生物學(xué)行為的影響，為臨床治療和預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2008年1月～2011年6月河北邯鄲市婦幼保健院婦科子宮內(nèi)膜癌手術(shù)切除子宮標本60例，平均年齡52.22歲，所有子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前均未行放化療及激素治療。取因子宮肌瘤或子宮脫垂而手術(shù)切除子宮的正常子宮內(nèi)膜標本32例為對照，平均年齡48.25歲。按2000年FIGO標準進行臨床病理分期及組織分級:Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例;G1級36例，G2級13例，G3級11例。病灶局限于黏膜層及浸潤＜1/2肌層44例，浸潤＞1/2肌層16例。

1.2 試劑與方法 常規(guī)免疫組化SP試劑盒、DAB顯色液及uPA、P-P38、VEGF(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。采用SP免疫組化法，方法操作按試劑盒說明書進行，取已知切片作為陽性對照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 uPA和P-P38陽性定位于細胞核，VEGF陽性表達主要定位于細胞質(zhì)，以各種抗體在細胞核或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號。參照Parenti等［1］的標準，每張切片均隨機觀察5個高倍視野(×400)，陽性細胞數(shù) ＜5%為(－)，5% ～25%為(+)，25% ～50%為(++)，＞50%為(+ ++)。以(+)～(+++)視為陽性表達，(－)視為陰性表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗。相互關(guān)系用等級相關(guān)分析，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 uPA、P-P38和VEGF的表達與臨床病理指標的關(guān)系 見表1。

2.2 uPA、P-P38和VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的相關(guān)性分析 在子宮內(nèi)膜癌組織中uPA、P-P38相關(guān)性分析顯示r=0.533，P=0.000;uPA和VEGF相關(guān)性分析顯示r=0.509，P=0.000;P-P38和VEGF相關(guān)性分析顯示r=0.521，P=0.000。

3 討論

uPA是一種絲氨酸蛋白水解酶，位于10號染色體的長臂上，由10個內(nèi)含子和11個外顯子構(gòu)成，成熟的mRNA長度為2.4 kb［2］。uPA能將纖溶酶原激活為纖溶酶，纖溶酶可以降解基質(zhì)和基底膜等成份，在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用［3］。另外uPA還參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進腫瘤細胞發(fā)生、增殖等活動［4］。有報道［5，6］uPA在多種惡性腫瘤中均有過表達。本實驗結(jié)果顯示，uPA蛋白陽性表達主要位于細胞核內(nèi)，在子宮內(nèi)膜癌組織中呈過度表達，在正常子宮內(nèi)膜組織中不表達，差異有顯著性; uPA與病理分期及組織學(xué)分級有關(guān)，提示分化差的惡性腫瘤往往具有高侵襲能力、預(yù)后差，這可能與低分化腫瘤中uPA表達水平更高有關(guān);uPA與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤深度有關(guān)，說明其在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

表1 uPA、P-P38和VEGF的表達與臨床病理指標的關(guān)系(例)

絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)是細胞內(nèi)廣泛存在的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，活化前的MAPK位于胞質(zhì)，一旦活化即進入核內(nèi)，激活靶基因。MAPK通路信號的傳送是通過MAPKKK、MAPKK和MAPK連續(xù)的磷酸化作用實現(xiàn)的［7］。已發(fā)現(xiàn)4條MAPK信號通路:ERK、JNK、BMK及 P38MAPK。P38MAPK［8］作為MAPK家族中重要的成員傳導(dǎo)通路是由360個氨基酸組成的酪氨酸磷酸化蛋白激酶，其分子量為38 kD，屬于應(yīng)激激活的蛋白，在多種生長因子、炎癥因子和應(yīng)激反應(yīng)作用下激活。P38發(fā)生磷酸化進入細胞核后調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子，影響基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成和細胞骨架結(jié)構(gòu)改變，介導(dǎo)細胞增殖、分化、凋亡［9］。本研究采用免疫組織化學(xué)方法分析P-P38在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達情況，結(jié)果顯示P-P38陽性表達主要位于細胞核內(nèi)，在子宮內(nèi)膜癌組織中呈過度表達，而在正常子宮內(nèi)膜組織中不表達，P-P38與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期、浸潤深度及組織學(xué)分級有關(guān)，與腫瘤的病理組織類型無關(guān)，提示P-P38的過度表達與子宮內(nèi)膜癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)。

VEGF是一種具有肝素結(jié)合活性的生長因子，作用于血管內(nèi)皮細胞，對血管內(nèi)皮細胞的促有絲分裂作用十分強烈，被認為是目前已知的最強的直接作用于血管內(nèi)皮細胞的生長因子。本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達明顯高于正常內(nèi)膜組織，VEGF與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期、浸潤深度及組織學(xué)分級有關(guān)，與腫瘤的病理組織類型無關(guān)，提示其過度表達與子宮內(nèi)膜癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)，說明VEGF在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。

有研究顯示，p38MAPK通路通過調(diào)控uPA的表達來誘導(dǎo)VEGF的人臍靜脈內(nèi)皮細胞的遷移［10］。VEGF也可以促進內(nèi)皮細胞分泌和激活uPA來降解基質(zhì)［11］，uPA可以直接激活VEGF，促使VEGF的釋放［12］。通過三者相關(guān)性的分析，我們發(fā)現(xiàn)uPA、P-P38和VEGF在子宮內(nèi)膜癌中呈顯著正相關(guān)，本文通過對三者的研究發(fā)現(xiàn)其相互作用，形成正反饋調(diào)節(jié)環(huán)，為腫瘤新生血管形成創(chuàng)造有利的微環(huán)境，同時也有利于腫瘤細胞脫落進入脈管或向鄰近組織擴散，為腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。

總之，子宮內(nèi)膜癌組織中uPA、P-P38和VEGF處于過表達狀態(tài)，與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，三者聯(lián)合檢測有助于指導(dǎo)臨床治療，為子宮內(nèi)膜癌的防治提供新思路。

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