冰凍亞型紅細(xì)胞在抗血清試劑選擇中的應(yīng)用

邱玉霞 竇茉莉 李雪英

冰凍亞型紅細(xì)胞在抗血清試劑選擇中的應(yīng)用

邱玉霞①竇茉莉①李雪英①

目的：用冰凍亞型紅細(xì)胞選擇適合本單位使用的單克隆抗血清試劑。方法：將日常工作中確認(rèn)或經(jīng)上級單位協(xié)助確認(rèn)的ABO亞型紅細(xì)胞進(jìn)行冰凍保存，融化洗滌后分別與6個(gè)不同生產(chǎn)廠家(分別以A、B、C、D、E、F表示)的單克隆抗血清試劑反應(yīng)，觀察試劑對弱抗原的識(shí)別敏感性。結(jié)果：6家單克隆抗血清對亞型標(biāo)本的檢出率存在一定差異，充分證明單克隆抗血清試劑可造成亞型漏檢，應(yīng)引起使用單位及生產(chǎn)廠家的注意并采取必要的措施。結(jié)論：本站用冰凍亞型紅細(xì)胞選擇6個(gè)生產(chǎn)廠家的單克隆抗血清，分別用于體采科初檢和檢驗(yàn)科復(fù)檢，在一定程度上提高了亞型檢出率，值得提倡和推廣。同時(shí)，冰凍亞型紅細(xì)胞還可作為弱陽性質(zhì)控品用于檢驗(yàn)科的血型鑒定；作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本用于醫(yī)院供血庫的血型血清學(xué)質(zhì)控考評以及全市或站內(nèi)輸血專業(yè)技能競賽等，對提高亞型檢出率，進(jìn)一步保證臨床輸血安全具有一定的促進(jìn)作用。

亞型紅細(xì)胞； 抗血清； 選擇； 應(yīng)用

ABO血型是人類血型系統(tǒng)中抗原免疫性最強(qiáng)，與輸血安全關(guān)系最為密切的血型系統(tǒng)。張旭等[1]在分析355例輸血相關(guān)的死亡病例時(shí)發(fā)現(xiàn)，51%的死亡是因輸入ABO不相容的血液制品所引起，其中ABO血型鑒定錯(cuò)誤占1/3。因此，準(zhǔn)確鑒定無償獻(xiàn)血者的ABO血型，是各級采供血機(jī)構(gòu)最基本的重要工作之一。在影響血型鑒定的諸多因素中，單克隆抗血清試劑的質(zhì)量是導(dǎo)致ABO血型誤判或漏檢的原因之一，特別是抗原比較弱的ABO亞型[2-7]，給安全輸血帶來極大隱患。因此，筆者所在站嘗試將ABO亞型紅細(xì)胞進(jìn)行冰凍保存，并對6個(gè)生產(chǎn)廠家(分別以A、B、C、D、E、F表示)的單克隆抗血清進(jìn)行檢測和選擇，取得了良好的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 20%葡萄糖注射液(開封制藥集團(tuán)有限公司)；PVC冷凍管、一次性塑料吸管(浙江拱東醫(yī)療科技有限公司)；Eppendorf移液器(上海富眾生物科學(xué)有限公司)；HH W21 600型電熱恒溫水浴箱(北京光明醫(yī)療儀器廠)；YDS-3亞西牌液氮生物容器(四川亞西橡塑機(jī)器有限公司低溫設(shè)備廠)。

1.2 制備冰凍紅細(xì)胞

1.2.1 標(biāo)本選擇 選擇日常工作中確認(rèn)或經(jīng)上級單位協(xié)助確認(rèn)的ABO亞型標(biāo)本 7份，分別為A3、B3、Ax、AxB、Bx、ABx、B(A)紅細(xì)胞各1份， 其中B(A)表型與人源抗-A的凝集強(qiáng)度為“±”，A3、B3與人源抗血清的凝集強(qiáng)度為“2﹢mf”， Ax、AxB、Bx、ABx的弱抗原與人源抗血清的凝集強(qiáng)度均為“1﹢”，且以上標(biāo)本保存期﹤6 d，各種傳染性指標(biāo)檢測均為陰性。

1.2.2 紅細(xì)胞冷凍 在選擇好的紅細(xì)胞標(biāo)本中等量加入20%的葡萄糖注射液，混勻。從液氮罐中移出部分液氮，迅速用一次性滴管直接將血液噴散進(jìn)液氮中，形成的血液小珠分裝于PVC冷凍管，立即置液氮中保存?zhèn)溆肹8]。

1.3 對6家單克隆抗血清的選擇

1.3.1 融化紅細(xì)胞 試驗(yàn)前從液氮中取出冰凍紅細(xì)胞小珠，直接放入38 ℃預(yù)熱的溫鹽水中融化，洗滌3次備用[8]。

1.3.2 操作步驟 于每一種抗-A、抗-B中，分別等量加入2%～5%的A3、B3、Ax、AxB、Bx、ABx及 B(A)紅細(xì)胞懸液，于22 ℃反應(yīng)15 min和1 h，以3400 r/min離心15 s，肉眼觀察凝集情況。

2 結(jié)果

6家單克隆抗血清與亞型紅細(xì)胞的反應(yīng)結(jié)果，見表1。

表1 6家單克隆抗血清與亞型紅細(xì)胞的反應(yīng)結(jié)果

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6家單克隆抗血清對亞型標(biāo)本的檢出率存在一定差異。其中最出乎意料的是C廠家試劑，因其效價(jià)高、親和力強(qiáng)而被許多血站長期使用，但該試劑對7份亞型標(biāo)本的檢出率卻為0，充分證明單克隆抗體試劑確實(shí)可導(dǎo)致亞型漏檢，應(yīng)引起使用單位及生產(chǎn)廠家的足夠重視并采取相應(yīng)措施。筆者所在站根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，選擇F試劑用于體采科初檢，而檢驗(yàn)科復(fù)檢則選擇試劑D。這樣匹配試劑，可使檢驗(yàn)科更多發(fā)現(xiàn)可疑的亞型標(biāo)本，除了正反定型不符(包括凝集明顯減弱的標(biāo)本)的標(biāo)本外，還較易發(fā)現(xiàn)與體采科初檢結(jié)果不符的標(biāo)本，從而有效防止亞型漏檢。筆者所在站自2010年1月采取此項(xiàng)措施后，檢驗(yàn)科共發(fā)現(xiàn)5例初復(fù)檢結(jié)果不符標(biāo)本，經(jīng)血型室確認(rèn)后均為亞型，其中有2例罕見的B(A)表型。由此可見，選用兩家單克隆試劑用于獻(xiàn)血者血型的初復(fù)檢，可在一定程度上提高亞型檢出率，值得提倡和推廣。

另外，筆者還利用甘油作為冷凍劑對亞型紅細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行冰凍保存，無需特殊的液氮設(shè)備，成本低廉，簡單易行，且制備的冰凍紅細(xì)胞質(zhì)量穩(wěn)定，用MAP保存液于2～6 ℃冰箱儲(chǔ)存可使用30 d。目前，已累積比較典型的ABO亞型標(biāo)本23例(含家系調(diào)查)，在工作實(shí)踐中進(jìn)行了應(yīng)用并取得良好效果。比如用A2、A2B細(xì)胞鑒定抗A1，從而使某些亞型得到確認(rèn)；對本站每批購進(jìn)的單克隆抗A、抗B試劑進(jìn)行進(jìn)貨驗(yàn)證；作為弱陽性質(zhì)控品用于檢驗(yàn)科的血型鑒定；作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本用于醫(yī)院供血庫的血型血清學(xué)質(zhì)控考評以及全市或站內(nèi)輸血專業(yè)技能競賽等(筆者在另一篇文章中詳述)。從實(shí)際使用中筆者體會(huì)到，冰凍亞型紅細(xì)胞在以上日常工作中的適當(dāng)應(yīng)用，對提高本地區(qū)ABO亞型檢測的整體水平起到了一定的促進(jìn)作用，不失為一種既經(jīng)濟(jì)又有效的辦法。

[1] 張旭，李劍平.455例ABO正反定型不符原因分析[J].中國輸血雜志，2010，23(8):623-624.

[2] 劉麗.Am亞型1例[J].中國輸血雜志，2006，19(1):66-67.

[3] 龔裕春，黃晨佳，邱穎婕，等.2組洗滌溶液制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的效果比較[J].中國輸血雜志，2010，23(9):692-693.

[4] 方建華，劉玉振，溫濤.國產(chǎn)單克隆抗體試劑漏檢AX1例[J].中國輸血雜志，2004，17(2):119.

[5] 徐洪衛(wèi).街頭無償獻(xiàn)血漏檢AXB亞型1例[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2006，8(1):57.

[6] 王宏法，劉玉振.國產(chǎn)血型定型試劑導(dǎo)致BX亞型漏檢1例原因分析[J].中國誤診學(xué)雜志，2008，8(25):6152.

[7] 宿蘭，楊世英，廉維，等.罕見的B(A)表型血清學(xué)及基因檢測[J].中國輸血雜志，2010，23(3):200-202.

[8] 李勇，楊貴貞.人類紅細(xì)胞血型學(xué)實(shí)用理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社，1999:224-233.

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.19.042

①河南省焦作市中心血站 河南 焦作 454000

邱玉霞

2012-04-23) (本文編輯：連勝利)