基質(zhì)金屬蛋白酶－14對(duì)老年骨肉瘤組織中血管新生的影響

殷 鵬 牟文之 苑廣科 (濰坊醫(yī)學(xué)院附屬青州中心醫(yī)院，山東 濰坊 262500)

基質(zhì)金屬蛋白酶－14對(duì)老年骨肉瘤組織中血管新生的影響

殷 鵬 牟文之 苑廣科 (濰坊醫(yī)學(xué)院附屬青州中心醫(yī)院，山東 濰坊 262500)

目的檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)－14、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和CD34在骨肉瘤中表達(dá)，探討MMP－14和VEGF對(duì)骨肉瘤中CD34標(biāo)記陽(yáng)性的血管密度(MVD)的作用。方法79例骨肉瘤患者術(shù)后存檔蠟塊為觀察組，40例良性骨病變組織為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)MMP－14、VEGF和CD34表達(dá)，分析MMP－14、VEGF表達(dá)和MVD在不同臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果觀察組MMP－14、VEGF表達(dá)陽(yáng)性率、MVD顯著高于對(duì)照組;觀察組MMP－14、VEGF和MVD均與骨肉瘤臨床分期、Ki67表達(dá)及腫瘤體積相關(guān)。骨肉瘤MMP－14、VEGF表達(dá)和MVD呈正相關(guān)。結(jié)論骨肉瘤MMP－14、VEGF高表達(dá)，共同促進(jìn)CD34陽(yáng)性的MVD形成，聯(lián)合檢測(cè)MMP－14和VEGF可能對(duì)判斷骨肉瘤預(yù)后有重要意義。

骨肉瘤;基質(zhì)金屬蛋白酶－14;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子;CD34;免疫組織化學(xué)技術(shù)

老年骨肉瘤患者病情發(fā)展快，且腫瘤于數(shù)月內(nèi)通過(guò)血道出現(xiàn)肺部轉(zhuǎn)移，因此惡性程度高，預(yù)后極差〔1〕。老年人手術(shù)過(guò)程中，較難對(duì)腫瘤組織切除干凈，可能與腫瘤中旺盛的血管新生有關(guān)。新近研究表明骨肉瘤生長(zhǎng)過(guò)程常依賴血管生成，基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)是一大類鋅依賴性內(nèi)肽酶家族，在腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中起重要作用〔2〕。MMP－14是MMPs家族重要成員，是一種跨膜蛋白水解酶，可降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分，同時(shí)降解細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子等〔3，4〕。近來(lái)有觀點(diǎn)認(rèn)為MMP－14對(duì)腫瘤血管生成具有一定促進(jìn)作用〔5〕。本文探討MMP－14對(duì)老年人骨肉瘤組織中血管生成的影響。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2005年1月至2010年12月行骨肉瘤手術(shù)切除的蠟塊組織79例。均符合WHO骨肉瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)。年齡60～89(平均66.9)歲，其中男40例，女39例，術(shù)前均未行放化療。同時(shí)選取病理證實(shí)為良性骨腫瘤的老年人標(biāo)本40例為對(duì)照組，骨樣骨瘤30例，骨瘤10例;男女各20例，年齡60～86(平均67.6)歲。兩組性別、年齡等無(wú)明顯差別，具有可比性。

1.2 MMP－14、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和CD34蛋白檢測(cè)MMP－14、VEGF和CD34均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。三種蛋白檢測(cè)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)SP法，操作均由同一病理技師完成，嚴(yán)格按說(shuō)明書操作，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) MMP－14和VEGF均為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，每張切片隨機(jī)觀察20個(gè)具有代表性的視野，取陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥20%陽(yáng)性，以＜20%

為陰性。CD34標(biāo)記的微血管密度(MVD)的評(píng)價(jià)方法:以毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)染色呈棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞，確定棕黃色染色的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢為一個(gè)血管，先在低倍鏡下全面觀察切片以確定腫瘤內(nèi)血管密度最高處，在高倍鏡下記錄5個(gè)視野內(nèi)微血管數(shù)，取其平均數(shù)為MVD值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2和t檢驗(yàn)及相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組 MMP－14、VEGF表達(dá)和 MVD比較 觀察組 MMP－14、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率和MVD明顯高于對(duì)照組(均P＜0.05)。見表1。

2.2 骨肉瘤MMP－14、VEGF表達(dá)和MVD與不同臨床病理特征的關(guān)系 觀察組MMP－14和VEGF陽(yáng)性表達(dá)率、MVD值與骨肉瘤腫瘤直徑、Ki67表達(dá)量及Ennecking分期有關(guān)。見表2。

表1 兩組MMP-14、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率和MVD比較〔n(%)〕

表2 MM P-14、VEGF表達(dá)和MVD與骨肉瘤臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

2.3 觀察組MMP－14、VEGF陽(yáng)性表達(dá)和MVD相關(guān)性分析線性相關(guān)分析結(jié)果顯示MMP－14和VEGF呈正相關(guān)(r=0.41，P=0.032 9)，MMP－14 和 MVD 呈正相關(guān) (r=0.48，P=0.012 6)，VEGF和 MVD 呈正相關(guān)(r=0.51，P=0.008 6)。

3 討論

老年人由于機(jī)體退行性變化表現(xiàn)出腫瘤惡變過(guò)程中的差異，老年人骨肉瘤中存在豐富血管新生，且生物學(xué)行為復(fù)雜，影響因素更多〔6〕。MMPs是一組結(jié)構(gòu)上具有很大同源性，并能有效降解ECM蛋白質(zhì)，因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)中含有金屬離子(主要是鋅和鈣)而進(jìn)行命名〔7〕。MMP－14發(fā)揮作用時(shí)能在細(xì)胞表面對(duì)MMP－2等 MMPs家族成員進(jìn)行有效活化，同時(shí)又反作用于MMP－14，使MMP－14表達(dá)明顯增高，形成環(huán)式循環(huán)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤離開原發(fā)部位發(fā)生轉(zhuǎn)移〔8，9〕。也有研究顯示 MMP－14可誘導(dǎo)腫瘤間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生MMP－14原酶，該酶激活后被腫瘤細(xì)胞攝取到細(xì)胞膜表面，起到降解ECM的作用;且激活的MMP－14不僅可激活 MMP－2 降解周圍基質(zhì)，也可發(fā)揮降解 ECM 功能〔10，11〕。VEGF是目前研究最多的促血管生成因子，對(duì)腫瘤基質(zhì)血管形成及腫瘤生物學(xué)行為均有重要影響〔12〕。而血管新生的標(biāo)記物是研究腫瘤血管新生的基礎(chǔ)。CD34是直接反映腫瘤血管新生的指標(biāo)，其標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性和敏感性均很強(qiáng)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示MMP－14、VEGF和CD34在腫瘤形成和進(jìn)展中有重要作用。MMP－14可通過(guò)調(diào)節(jié)ECM合成與降解代謝而影響細(xì)胞間、細(xì)胞與基質(zhì)間信息傳遞，調(diào)節(jié)細(xì)胞分化及遷移，進(jìn)而可能影響腫瘤生物學(xué)行為。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示MMP－14、VEGF對(duì)腫瘤中MVD有重要促進(jìn)作用，即MMP－14、VEGF共同促進(jìn)骨肉瘤中血管形成。此結(jié)果也提示MMP－14可能作為上游蛋白，調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)，使骨肉瘤中新生血管增加，加速腫瘤形成〔13〕。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MMP－14、VEGF和MVD均與腫瘤體積、Ki67表達(dá)陽(yáng)性率及Ennecking臨床分期密切相關(guān)，由于Ki67表達(dá)及 Ennecking分期均與骨肉瘤預(yù)后相關(guān)，因此，聯(lián)合檢測(cè)MMP－14、VEGF和MVD可能對(duì)判斷老年人骨肉瘤預(yù)后有一定價(jià)值，即MMP－14、VEGF和MVD高表達(dá)老年患者預(yù)后差。

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R738

A

1005-9202(2012)16-3408-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.16.022

殷 鵬(1965－)，男，副主任醫(yī)師，副教授，主要從事骨外科疾病研究。

〔2011－10－17 收稿 2012－01－19 修回〕

(編輯 袁左鳴/張 慧)