電子顯微鏡技術(shù)在實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)中的運(yùn)用

陳 永 龔 安 高運(yùn)樂 余 珊 楊宗保

1.江西中醫(yī)學(xué)院，江西南昌 330004；2.廣州復(fù)大腫瘤醫(yī)院針灸科，廣東廣州 550030；3.江西中醫(yī)學(xué)院南方灸療研究所，江西南昌 330004

電子顯微鏡技術(shù)在實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)中的運(yùn)用

陳 永1，2龔 安1高運(yùn)樂2余 珊2楊宗保3

1.江西中醫(yī)學(xué)院，江西南昌 330004；2.廣州復(fù)大腫瘤醫(yī)院針灸科，廣東廣州 550030；3.江西中醫(yī)學(xué)院南方灸療研究所，江西南昌 330004

電鏡技術(shù)在實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)中的運(yùn)用是揭秘針灸作用機(jī)制的可行方法之一。由于多種原因，目前這一方面研究數(shù)據(jù)較少。本文復(fù)習(xí)了近10年來28篇電鏡在實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)中的運(yùn)用。研究范圍涉及炎癥性腸病、糖尿病眼病、心肌缺血、脊髓損傷、血管性和老年性癡呆等。

電子顯微鏡；潰瘍性結(jié)腸炎；克羅恩病；癡呆；足三里；腎俞

中醫(yī)理論尤其是經(jīng)絡(luò)學(xué)說是針灸學(xué)的理論依據(jù)。隨著科技的飛速發(fā)展，各學(xué)科間的交叉滲透，以及國內(nèi)外專家對針灸治療本質(zhì)的探究，實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)這一年輕的學(xué)科應(yīng)運(yùn)而生。1931年，德國物理學(xué)家Ernst Ruska和電氣工程師Max Knoll制作世界上第一臺電子顯微鏡，當(dāng)時(shí)能把實(shí)物放大400倍。80年來，目前的電子顯微鏡能放大1 000萬倍。電鏡對微觀世界的客觀展示對細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展起推動作用。而今，電鏡技術(shù)在基礎(chǔ)和臨床（主要是腎臟病理）中已經(jīng)得到廣泛的運(yùn)用。電鏡在實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)中的運(yùn)用是揭秘針灸作用機(jī)制的可行方法之一。但由于電子顯微鏡價(jià)格昂貴等原因，限制了這方面的研究，使得這方面的數(shù)據(jù)彌足珍貴。我們在萬方數(shù)據(jù)庫中采用高級檢索，標(biāo)題：針灸，并且全文：電鏡，年份：2001～2011年，檢索得文獻(xiàn)18篇。在維普數(shù)據(jù)庫中用高級檢索，標(biāo)題或關(guān)鍵詞：針灸，并且全文：電鏡，年份：2001～2011年，檢索得文獻(xiàn)33篇。在Pubmed中用高級檢索，title:acupuncture，all fields:electromicroscope，檢索未發(fā)現(xiàn)相關(guān)文獻(xiàn)。對所有文獻(xiàn)逐一復(fù)習(xí)、檢查，遴選28篇在本文進(jìn)行綜述。

1 炎癥性腸病

吳煥淦等[1]采用透射電鏡檢測對潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）大鼠結(jié)腸細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行了觀察，模型組大鼠（即患UC的大鼠）結(jié)腸組織出現(xiàn)大量的凋亡細(xì)胞，表現(xiàn)為細(xì)胞皺縮、變小，胞漿致密，細(xì)胞器相互靠近；核固縮，染色質(zhì)濃縮，沿著核膜排列，形成不同形狀和大小的塊狀；同時(shí)，細(xì)胞器也發(fā)生濃縮，有些形成了凋亡小體。經(jīng)過隔藥灸與電針治療（取穴：氣海、天樞）組大鼠，這些情況發(fā)生顯著的改善。形態(tài)學(xué)上細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化沒有模型組典型，發(fā)生凋亡的細(xì)胞數(shù)目也明顯下降（P＜0.05）。結(jié)果表明，針灸能夠抑制異常增高的結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡，其可能是針灸治療潰瘍性結(jié)腸炎的重要機(jī)制之一。

馬曉芃等[2]在建立UC大鼠模型以后，以針灸進(jìn)行干預(yù)（取穴：上巨虛）。結(jié)果示經(jīng)隔藥灸、電針上巨虛治療后大鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞絨毛長度多數(shù)正常且排列整齊，胞膜完整，線粒體嵴正常，高爾基體旁有大量的囊泡，杯狀細(xì)胞內(nèi)充滿黏液顆粒。劉慧榮等[3]在建立大鼠克隆?。╟rohn disease，CD）后，采用針?biāo)幗Y(jié)合對大鼠進(jìn)行治療（取穴包括足三里、上巨虛）。檢測結(jié)果示，電針組杯狀細(xì)胞較模型組增多，部分杯狀細(xì)胞富含黏液滴，排列不整齊，仍可見到壞死上皮細(xì)胞。微絨毛斷裂，黏膜下層水腫。

2 心肌缺血

趙宇輝[4]在建立大鼠心肌缺血再灌注模型之前，對治療組采用了針灸預(yù)治療（選穴：內(nèi)關(guān)、膻中）。結(jié)果表明，模型組大鼠的心肌部分細(xì)胞核固縮、細(xì)胞膜迂曲、內(nèi)陷，連續(xù)性中斷，呈鋸齒樣變，部分核膜崩解，核中部分染色質(zhì)凝集并向核膜靠攏；可見線粒體嵴斷裂、溶解，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，糖原顆粒減少，肌原纖維融合。針灸預(yù)處理組與缺血再灌注組比較，病變明顯減輕。

田岳鳳等[5]建立兔心肌缺血再灌注損傷模型，然后電針“內(nèi)關(guān)”進(jìn)行治療。對心肌織超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。結(jié)果顯示，針刺“內(nèi)關(guān)”組心肌組織損傷輕微，肌纖維正常走向，少量線粒體空泡變，肌絲無明顯壞死、溶解。提示電針“內(nèi)關(guān)”可明顯降低缺血再灌注損傷的程度，對心肌呈現(xiàn)良好的保護(hù)作用。

3 內(nèi)分泌（相關(guān)性）疾病

吳明霞等[6]首先建立大鼠骨質(zhì)疏松模型（去卵巢手術(shù)方法），發(fā)現(xiàn)經(jīng)針灸干預(yù)（主穴：大杼、命門；配穴：懸鐘、足三里）后的骨質(zhì)疏松大鼠骨基質(zhì)密度均勻，骨膠纖維排列整齊，少數(shù)區(qū)域骨膠纖維較稀疏，粗細(xì)不一。骨基質(zhì)中較幼稚的骨細(xì)胞明顯增多，其核較大，蛻變的骨細(xì)胞較少，胞漿內(nèi)見較多粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，嗜鋨板層可見，成骨細(xì)胞較類骨質(zhì)少，骨膜下成骨細(xì)胞無明顯增生。蔡春梅等[7]建立大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變模型，針刺（取穴：肝俞、腎俞、脾俞、睛明、太陽、風(fēng)濁、足三里、百會）治療，視網(wǎng)膜電鏡檢查結(jié)果顯示，針刺組內(nèi)皮細(xì)胞增殖不明顯，管腔無縮小，周細(xì)胞無明顯變性，基底膜略有增厚。提示，針刺可以有效地預(yù)防和治療糖尿痛視網(wǎng)膜病變。逄紫千等[8]建立大鼠糖尿病周圍神經(jīng)病變模型。針刺治療組取肺俞、脾俞、腎俞、合谷、足三里、三陰交。用透射電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，造模8周時(shí)，糖尿病模型組大鼠尾神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)模糊松散排列紊亂;造模12周時(shí)，部分有髓神經(jīng)纖維發(fā)生沃勒變性，軸索出現(xiàn)消失現(xiàn)象，髓鞘板層疏松呈不規(guī)則的膜樣團(tuán)塊。針刺治療組與糖尿病模型比較，上述改變均減輕。

4 神經(jīng)精神系統(tǒng)疾病

4.1 脊髓損傷

劉潔等[9]采用透射電鏡對不完全性截癱兔損傷脊髓神經(jīng)元內(nèi)線粒體的影響進(jìn)行了研究。模型（不完全性截癱兔損傷）形成7 d后，電鏡下見針灸組線粒體大小均勻，僅有少量腫脹；而模型組線粒體有嚴(yán)重腫脹，空泡化，數(shù)量減少。吳耀持等[10]建立神經(jīng)根壓迫癥大鼠模型，并對大鼠進(jìn)行針灸治療。選穴為環(huán)跳、陽陵泉與受壓神經(jīng)根相應(yīng)節(jié)段右側(cè)的夾脊穴。結(jié)果示，電針組較模型組神經(jīng)纖維周圍充血、水腫及神經(jīng)根纖維脫髓鞘變較輕，施旺細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常，并緩解神經(jīng)內(nèi)水腫。結(jié)果表明，電針可緩解受損腰神經(jīng)根周圍炎癥反應(yīng)，改善腰神經(jīng)根超微結(jié)構(gòu)。朱政等[11]采用針灸效應(yīng)學(xué)體外實(shí)驗(yàn)方法對離體培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞用透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果顯示，電針治療組的星形膠質(zhì)細(xì)胞其溶酶體較造模組少，而高爾基復(fù)合體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、微管、微絲較造模組明顯增多。提示，電針可減輕損傷對星形膠質(zhì)細(xì)胞中溶酶體的刺激，增強(qiáng)細(xì)胞器的蛋白合成和分泌功能。

4.2 腦血管疾病

關(guān)建軍等[12]對大鼠進(jìn)行血管性癡呆（VD）造模，針灸選穴：百會、膈俞、氣海、三陰交、膻中組成益氣活血方治療；觀察海馬CA1區(qū)的突觸數(shù)密度（Nv）、突觸活性區(qū)的面積密度（Sv）。 結(jié)果顯示，VD 模型組較對照組 Nv、Sv明顯減少（P<0.01），VD模型組較針灸治療組Nv減少、Sv明顯減少 （P<0.05）。實(shí)驗(yàn)說明，針灸可以顯著提高VD大鼠大腦皮質(zhì)CA區(qū)的Nv和突觸活性區(qū)的Sv，是針灸促進(jìn)大腦可塑性，保護(hù)腦損傷的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制。符文彬等[13]在建立新西南兔腦出血模型，并對腦出血兔行針灸治療，取穴：百會、水溝、雙側(cè)合谷與太沖穴。然后電鏡觀察兔腦細(xì)胞損傷情況。結(jié)果顯示，針灸治療后，鏡下神經(jīng)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞胞核形態(tài)無明顯異常，細(xì)胞器腫脹或輕微擴(kuò)張，脂褐素稍增多，微血管管腔無狹窄，內(nèi)皮細(xì)胞受損輕，基膜形態(tài)基本正常，無明顯管周水腫病變。

王鵬琴等[14]采用眼針療法對血管性癡呆大鼠進(jìn)行治療。電鏡檢測顯示，與模型組比較，海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化明顯輕于模型組。唐偉等[15]在建立腦缺血大鼠模型之前，對大鼠進(jìn)行針灸預(yù)處理（取穴為雙側(cè)足三里）。發(fā)現(xiàn)針刺預(yù)處理組血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫較輕，緊密連接、基底膜結(jié)構(gòu)尚完整，管周星形膠質(zhì)細(xì)胞足突水腫亦較輕。王黎等[16]建立VD模型，然后電針大椎、百會穴治療。電鏡檢測發(fā)現(xiàn)，針刺組核膜完整，染色質(zhì)均勻，胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富；偶見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，有少量線粒體空泡樣變化尚未恢復(fù)正常，脂褐素較多。杜亦旭等[17]在建立大鼠腦缺血模型后，采用電針百會、大椎穴對腦缺血大鼠進(jìn)行治療。觀察缺血區(qū)大腦皮質(zhì)突觸的結(jié)構(gòu)、Nv、Sv的變化規(guī)律以及電針對其影響。結(jié)果表明，電針組Nv、Sv于1 d后較缺血模型組顯著性升高（P<0.01），3 d、1周后進(jìn)一步升高（P<0.001），與假手術(shù)組相仿。提示電針從早期即可抑制腦缺血后的Nv、Sv，并在恢復(fù)過程中促進(jìn)其盡快地修復(fù)。電鏡檢查為電針在不同時(shí)間段促進(jìn)突觸重建和腦缺血恢復(fù)提供了形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。

4.3 老年性癡呆（Alzheimer's disease，AD）

周華[18]、杜艷軍等[19]在建立大鼠老年性癡呆之前，用針灸取大鼠百會穴和腎俞穴進(jìn)行預(yù)處理。結(jié)果顯示，針灸組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞損傷程度比模型組明顯減輕，細(xì)胞核染色質(zhì)分部基本正常。提示預(yù)電針和預(yù)艾灸對于AD模型大鼠的神經(jīng)功能具有明顯的保護(hù)作用，減少神經(jīng)元的損傷，以預(yù)電針和預(yù)艾灸聯(lián)合運(yùn)用療效最佳。羅松等[20]選用老年大鼠，建立阿爾茨海默病模型，對大鼠進(jìn)行電針治療。選穴：百會、涌泉、太溪、血海，治療結(jié)束后，采用透射電鏡觀察大鼠海馬CA3區(qū)超微結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示，電針后Nv較模型組明顯增大，而Sv較小，與正常結(jié)構(gòu)相似。大鼠海馬CA3區(qū)突觸Nv、Sv電針組明顯高于模型組（P<0.01）。海馬CA3區(qū)突觸連接帶平均面積:電針組明顯小于模型組（P<0.01）。結(jié)果顯示：電針能有效地使阿爾茨海默病大鼠海馬神經(jīng)元突觸形態(tài)得到一定程度的修復(fù)，阻止海馬神經(jīng)元突觸的退變。

4.4 海洛因成癮

張榮軍等[21]建立海洛因復(fù)吸大鼠模型，與模型組和藥物組相比，針灸組（針刺百會穴，艾灸腎俞穴），大鼠腦前額皮質(zhì)（PFC）線粒體、核糖體數(shù)目略有增多，線粒體嵴比較清楚，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量相對增多，但有輕度擴(kuò)張，核膜間隙正常。

4.5 抑郁癥

符文彬等[22]在建立大鼠抑郁癥模型基礎(chǔ)上，針刺組大鼠造模后針刺合谷穴、太沖穴。取大鼠海馬組織進(jìn)行電鏡觀察。結(jié)果顯示，針刺組大鼠海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化相對較輕，神經(jīng)元受損程度明顯輕于模型組。認(rèn)為針刺可以逆轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激所造成的抑郁大鼠海馬神經(jīng)元的損傷，這可能是針刺抗抑郁的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制之一。

4.6 癲癇

唐偉等[23]在建立癲癇持續(xù)狀態(tài)（status epilepticus，SE）大鼠模型之前，采用針灸預(yù)處理大鼠，取穴主要包括足三里、曲池、百會。電鏡結(jié)果顯示：預(yù)先針刺組的損傷明顯減輕，線粒體結(jié)構(gòu)大體完整。可見預(yù)先針刺對SE后神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用。

4.7 聽力損害

付平等[24]建立聽力損害豚鼠模型，然后將針灸治療組按照取穴的不同分為翳風(fēng)組、耳門組、中渚組進(jìn)行治療。結(jié)果表明，在豚鼠耳蝸基底膜外毛細(xì)胞缺失數(shù)上，翳風(fēng)組、耳門組、正常組明顯少于模型組（P＜0.05），中渚組與模型組相近。在超微結(jié)構(gòu)方面，正常組耳蝸毛細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常；模型組毛細(xì)胞結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯病理改變；針刺組病理變化較模型組輕。翳風(fēng)組外毛細(xì)胞病理變化較輕，耳門組毛細(xì)胞結(jié)構(gòu)略有改變，中渚組病理變化較嚴(yán)重，但略輕于模型組。結(jié)果提示，以針刺翳風(fēng)穴效果最好，針刺耳門穴次之，針刺中渚穴效果最差。

5 其他

蘆源[25]選用自然老化大鼠，進(jìn)行圍刺治療以后，通過透射電鏡觀察皮膚成纖維細(xì)胞的形態(tài)以及膠原纖維的排列，電鏡可見，老齡大鼠真皮成纖維細(xì)胞的細(xì)胞器減少，細(xì)胞結(jié)構(gòu)退化，同時(shí)膠原纖維之間空隙加寬，老化性架橋增多，圍刺治療后其成纖維細(xì)胞活性增強(qiáng)。結(jié)果提示，圍刺法可能是通過增強(qiáng)皮膚中成纖維細(xì)胞的活性進(jìn)而增加其可溶性膠原含量來改變皮膚的老化狀態(tài)。傅杰英等[26]采用透射電鏡觀察超重大鼠針灸治療后脂肪細(xì)胞的細(xì)胞器形態(tài)。結(jié)果顯示，線粒體數(shù)量明顯增多，嵴排列致密。提示針刺胃經(jīng)穴位對超重大鼠具有一定的干預(yù)作用，可能與改變其褐色脂肪細(xì)胞的形態(tài)、提 高產(chǎn)熱效能和能量代謝有關(guān)。李彤[27]建立大鼠踝關(guān)節(jié)痛風(fēng)模型，并對痛風(fēng)大鼠行針灸治療，取穴：豐?。p側(cè)）、小腸俞（雙側(cè)）。電鏡結(jié)果顯示：針灸治療組，鏡下可見成纖維細(xì)胞，胞核呈梭長形，核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻，胞漿內(nèi)有豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，線粒體、核糖體等細(xì)胞器清晰可見，整個(gè)細(xì)胞呈梭長形，細(xì)胞周圍有較為豐富的且排列緊密的膠原纖維。朱梅菊等[28]用對大鼠的運(yùn)動進(jìn)行研究，大負(fù)荷訓(xùn)練4周導(dǎo)致運(yùn)動性貧血。電鏡下，大鼠畸形紅細(xì)胞明顯增高，以棘形紅細(xì)胞為主，畸形紅細(xì)胞百分率顯著高于訓(xùn)練前（P＜0.01），提示長時(shí)間大負(fù)荷訓(xùn)練能導(dǎo)致紅細(xì)胞的損傷。針灸對停訓(xùn)后大鼠紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響顯示，針灸組大鼠停訓(xùn)后7 d紅細(xì)胞形態(tài)基本恢復(fù)正常（對照組需要15 d），畸形紅細(xì)胞百分率與訓(xùn)練前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。提示針灸足三里穴可明顯促進(jìn)運(yùn)動性貧血的改善。

6 小結(jié)

由于電鏡技術(shù)稍難掌握，設(shè)備昂貴等原因限制了其在實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)中的運(yùn)用。通過復(fù)習(xí)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，雖然目前以電子顯微鏡技術(shù)來研究針灸的文獻(xiàn)不多，且尚未檢索到外文文獻(xiàn)。但文獻(xiàn)質(zhì)量較高，且絕大多少綜合運(yùn)用包括電鏡在內(nèi)的其他檢測指標(biāo)，且大多數(shù)設(shè)立了隨機(jī)、對照研究。

分子生物學(xué)是醫(yī)學(xué)的中心學(xué)科，其研究方法亦廣泛運(yùn)用于包括實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)在內(nèi)的各學(xué)科。但電鏡作為細(xì)胞生物學(xué)研究的技術(shù)之一，由于其對細(xì)胞觀察的直觀性，亦廣受基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)工作者的喜愛。其在腎臟病理等檢查中的診斷地位亦是舉足輕重。電鏡作為一種很好的技術(shù)手段、檢測指標(biāo)，我們將繼續(xù)創(chuàng)造條件將其運(yùn)用到針灸實(shí)驗(yàn)中來，觀察更多的病種，例如哮喘、各種惡性腫瘤等。這樣對針灸學(xué)的發(fā)展必有裨益。

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Application of electron microscope in experimental acupuncture

CHEN Yong1,2GONG An1GAO Yunle2YU Shan2YANG Zongbao3
1.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Province,Nanchang 330004,China;2.Acupuncture Department,Fuda Cancer Hospital of Guangzhou City,Guangdong Province,Guangzhou 550030,China;3.South Moxibustion Research Center,Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Province,Nanchang 330004,China

The application of electromicroscope technical for experimental acupuncture is a feasible method.Unfortunately,the current researches in this area is very rare.This manuscript reviews 28 articles in the last 10 years on this theme.The scope of applying electromicroscope technical in experimental acupuncture including inflammatory bowel diseases,oculopathy due to diabetics,myocardia ischemia,spinal cord injury,vascular or aging dementia etc.

Electromicroscope;Ulcerative colitis;Crohn's disease;Dementia;Zusanli(ST-36);Shenshu(BL-23)

R642

A

1673-7210（2012）08（a）-0031-03

國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No:30960484)。

陳永(1986.3-),男，碩士，住院醫(yī)師；研究方向：中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)。

高運(yùn)樂（1974.10-），男，主治醫(yī)師；研究方向：中醫(yī)針灸。

2012-03-30 本文編輯：谷俊英）