超臨界二氧化碳流體萃取三葉青藤揮發(fā)油成分分析

黎穎君 宋偉峰

1.廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東廣州 510120；2.中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院藥劑科，廣東廣州 510630

超臨界二氧化碳流體萃取三葉青藤揮發(fā)油成分分析

黎穎君1宋偉峰2

1.廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東廣州 510120；2.中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院藥劑科，廣東廣州 510630

目的 采用GC-MS法分析三葉青藤揮發(fā)油成分，為其質(zhì)量評價提供科學(xué)依據(jù)。方法 采用二氧化碳超臨界萃取法（SFE-CO2）萃取并分離三葉青藤藥材中的揮發(fā)油，所提取得到的揮發(fā)油運(yùn)用GC-MS進(jìn)行分析，用面積歸一化法確定其相對含量。結(jié)果從三葉青藤藥材中提取的揮發(fā)油經(jīng)GC-MS分析，共檢測到84個色譜峰，通過NIST庫檢索一共鑒定出39個化合物的具體結(jié)構(gòu)，占所提取的三葉青藤揮發(fā)油總量的56.47%（g/g），其中棕櫚酸、十三烷酸、芳樟醇等在該藥材揮發(fā)油中占的比例較高。 結(jié)論 該方法提取條件優(yōu)良，初步揭示了該藥材揮發(fā)性成分，對進(jìn)一步研究其化學(xué)成分打下基礎(chǔ)，為藥材的質(zhì)量評價提供科學(xué)參考。

三葉青藤；二氧化碳超臨界萃取法；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

三葉青藤是青藤科（或蓮葉桐科）植物紅花青藤（Illigera rhodantha Hance）的地上部分，具有祛風(fēng)散瘀、消腫止痛的功效，該藥材廣泛應(yīng)用于跌打腫痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、小兒麻痹后遺癥等疾病的治療[1]。然而，臨床上使用三葉青藤藥材時出現(xiàn)了一些在植物形態(tài)上有些相似的混淆品，從外觀上較難區(qū)別，可采用現(xiàn)代的化學(xué)理論方法來鑒別其真?zhèn)巍Ｋ幉闹袚]發(fā)性成分常見的提取方法是采用傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法（steam distillation，SD），該法具有提取效率高、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，然而其提取溫度較高，一些遇熱不穩(wěn)定的化學(xué)成分可能會發(fā)生結(jié)構(gòu)的改變，引起揮發(fā)油的變質(zhì)[2-6]。課題組已經(jīng)采用水蒸汽蒸餾法來提取三葉青藤揮發(fā)油并進(jìn)行GC-MS分析[7]。本文旨在比較三葉青藤藥材經(jīng)過二氧化碳超臨界萃取法（SFE-CO2）及SD法提取后揮發(fā)油成分的區(qū)別，為進(jìn)一步評價三葉青藤的質(zhì)量提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

HA221-50-06型超臨界二氧化碳提取設(shè)備（江蘇南通華安超臨界萃取有限公司）；Agilent6890/5973氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀（NIST 譜庫，2008年版）。

1.2 試藥

三葉青藤（采自廣西南寧市，經(jīng)鑒定為青藤科植物紅花青藤Illigera rhodantha Hance的地上部分），無水乙醚（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），無水硫酸鈉（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），二氧化碳（純度99.99%）。

2 方法與結(jié)果

2.1 二氧化碳超臨界萃取三葉青藤揮發(fā)油

取三葉青藤鮮藥材，置陰涼處晾干，粉碎，過篩，取能過20目篩且不能過40目篩的藥材粗粉100 g，置超臨界流體萃取儀提取（萃取壓力為30 mPa，分離壓力5 mPa，分離溫度45℃，萃取時間為120 min），得到淡黃色油狀的提取物。

2.2 GC-MS測定條件

2.2.1 GC條件 毛細(xì)管色譜柱 （HP-5MS，30 m×0.25 μm×0.25μm）；進(jìn)樣量1.0μL，分流比40∶1，N2為載氣，流速為1.0mL/min；柱初始溫度為70℃，以12℃/min的速率上升至170℃，保持3 min，再以 10℃/min的速率上升至 220℃，保持 3 min，再以12℃/min的速率上升至280℃，保持3 min[7]。

2.2.2 MS條件 電離方式EI，電子能量70 eV，離子源溫度230℃，掃描質(zhì)量范圍 40～550 amu[7]。

2.3揮發(fā)油成分分析結(jié)果

取三葉青藤揮發(fā)油，照“2.2”項下注入GC-MS色譜儀，記錄色譜圖及質(zhì)譜圖，并通過NIST譜庫（2008年版）檢索、對照和解析。結(jié)果經(jīng)GC分離得到84個離子峰，并鑒定了39個化合物的結(jié)構(gòu)，已確定具體結(jié)構(gòu)的化合物總量占揮發(fā)油總量的 56.47%（g/g）。 見表 1、圖 1。

表1 SFE-CO2提取三葉青藤揮發(fā)油的GC-MS分析結(jié)果

3 討論

3.1 GC-MS能有效分析鑒定揮發(fā)油成分

從三葉青藤藥材中用SFE－CO2提取的揮發(fā)油經(jīng)GC-MS分析，共檢測到84個色譜峰，通過NIST庫檢索一共鑒定出39個化合物的具體結(jié)構(gòu)，占所提取的三葉青藤揮發(fā)油總量的56.47%（g/g），其中棕櫚酸、十三烷酸、芳樟醇等在該藥材揮發(fā)油中占的比例較高。

3.2 SFE-CO2與SD法提取的效果有顯著差別

和SD提取三葉青藤藥材中揮發(fā)油[7]相比，兩種樣品中主要成分和水蒸氣蒸餾法提取相似，比如說棕櫚酸、芳樟醇等，但含量高低有差別；SFE-CO2提取出的揮發(fā)油成分比較多，可能是二氧化碳流體對揮發(fā)油有比較好的溶解能力；SFECO2提取的揮發(fā)性成分多為萜類的含氧衍生物、烷烴類以及一些極性較小的有機(jī)酸類等，萜類的含氧衍生物往往具有比較廣泛的藥理作用，這些化學(xué)成分將為以后研究該藥材的物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

本文采用SFE-CO2法提取三葉青藤藥材中的揮發(fā)油，該法提取條件比較溫和，臨界溫度接近室溫，一些遇熱不穩(wěn)定的成分不會被破壞，更為真實(shí)地反映了該植物的揮發(fā)性成分。

[1]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)（1990年版）[M].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，1992：101.

[2]符繼紅，張麗靜.新疆維吾爾醫(yī)用藥材神香草揮發(fā)油的GC-MS分析[J].中成藥，2008，30（3）：413-414.

[3]付先龍，林穎，莊平，等.美容杜鵑葉揮發(fā)油化學(xué)成分的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（4）：931-933.

[4]鄭良，朱華勇，沈慧，等.GC-MS分析山東野花椒果皮中揮發(fā)油的化學(xué)成分[J].華西藥學(xué)雜志，2009，24（4）：386-388.

[5]王建，趙應(yīng)學(xué).廣西莪術(shù)種內(nèi)變異類型中不同顏色揮發(fā)油化學(xué)成分分析[J].中草藥，2009，40（11）：1726-1727.

[6]林朝展，柴玲，祝晨蔯，等.枇杷葉紫珠葉揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，21（9）：2275-2277.

[7]劉蘭軍，宋偉峰.三葉青藤揮發(fā)油成分的GC-MS分析[J].臨床醫(yī)學(xué)工程，2011，18（12）：1857-1858.

GC-MS analysis of the essential oils extracted by SFE-CO2from Illigera rhodantha Hance

LI Yingjun1SONG Weifeng2
1.Department of Pharmacy,Guangdong Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Province,Guangzhou 510120,China;2.Department of Pharmacy,the Affiliated Third Hospital of Sun Yat-sen University,Guangdong Province,Guangzhou 510630,China

ObjectiveTo analyze the constituents of the essential oils from Illigera rhodantha Hance by GC-MS,and provide the scientific basis for quality control.MethodsThe essential oils were extracted by SFE-CO2,analyzed and identified by GC-MS.The components were calculated with normalization method.Results84 peaks were extracted and detected,among which 39 compounds had been identified,which made up 56.47% (g/g)of the total essential oils.The main chemical composition were n-Hexadecanoic acid,Tridecanoic acid,Linalool and so on.ConclusionThe extraction method is excellent,the first time to reveal the essential oils from Illigera rhodantha Hance,for further research its chemical composition to lay the foundation,and provide the scientific basis for quality control.

Illigera rhodantha Hance;SFE-CO2;Essential oil;GC-MS

R284.2

A

1673-7210（2012）08（a）-0026-02

黎穎君（1983.8-），女，本科，中藥師；研究方向：醫(yī)院藥學(xué)（中藥鑒定研究）。

宋偉峰（1972.4-），男，本科；研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。

2012-03-06 本文編輯：衛(wèi) 軻）