強(qiáng)心顆粒對(duì)耐常壓缺氧、利尿及抗氧化作用的初步觀察

秦文艷， 李春偉， 董 波， 陳 賀， 孟 莉， 趙金明*

(1.遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧沈陽(yáng)110031;2.遼寧電力中心醫(yī)院，遼寧沈陽(yáng)110015)

慢性心力衰竭 (chronic heart failure，CHF)，簡(jiǎn)稱心衰，是指各種心臟病及其他臟器疾病發(fā)展到嚴(yán)重階段所致心功能不全的一種綜合征，病機(jī)為各種原因?qū)е滦募∈湛s力下降使心排血量不能滿足機(jī)體代謝的需要，器官組織灌注不足，臨床表現(xiàn)為肺循環(huán)和 (或)體循環(huán)瘀血癥狀，如呼吸困難、水腫等。心力衰竭時(shí)通常伴有肺循環(huán)和 (或)體循環(huán)的被動(dòng)性充血故又稱之為充血性心力衰竭［1］。強(qiáng)心顆粒由紅參，制附子，黃芪，葶藶子等中藥組成，具有益氣溫陽(yáng)、強(qiáng)心、活血利水的功效，本實(shí)驗(yàn)主要考察了強(qiáng)心顆粒改善心肌供氧、利尿及抗氧化作用。

1 材料

1.1 試驗(yàn)藥物 強(qiáng)心顆粒由遼寧省中醫(yī)藥研究院藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供，棕褐色顆粒，1 g顆粒含3.67 g生藥，批號(hào):20081015;心寶丸，廣東省藥物研究所制藥廠，批號(hào):20080922;注射用鹽酸多柔比星 (阿霉素)，山西普德藥業(yè)有限公司，批號(hào):20080103;鹽酸普萘洛爾片，東北制藥總廠，批號(hào):20080103;氫氯噻嗪片，天津力生制藥股份有限公司，批號(hào):0806010;馬來酸依那普利片，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)，批號(hào):08100902;SOD酶聯(lián)免疫試劑盒，美國(guó)ADL公司，批號(hào):SM200908;MDA酶聯(lián)免疫試劑盒，美國(guó)ADL公司，批號(hào):SM200908。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR小鼠及Wistar大鼠由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(遼)2007-0009。

1.3 儀器 LD5—2A離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。

2 方法和結(jié)果

2.1 強(qiáng)心顆粒對(duì)小鼠常壓耐缺氧的影響［2］體質(zhì)量18～22 g健康ICR小鼠60只，雌雄各半，按性別體質(zhì)量隨機(jī)分為6組，每組10只。分別為空白對(duì)照組，強(qiáng)心顆粒低劑量組21.5 g/kg、中劑量組43 g/kg、高劑量組86 g/kg，中藥陽(yáng)性對(duì)照藥心寶丸組0.28 g/kg和西藥陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸普萘洛爾片組0.052 g/kg。每天灌胃 (ig)給藥1次，連續(xù)7 d，空白對(duì)照組給予同體積蒸餾水。試驗(yàn)前各組小鼠禁食16 h，末次給藥后45 min，將小鼠放入裝有15 g鈉石灰的250 mL廣口磨口瓶中，用凡士林涂抹瓶口蓋嚴(yán)，使之不漏氣，立即計(jì)時(shí)。以小鼠呼吸停止時(shí)間為指標(biāo)，記錄小鼠因缺氧而死亡的時(shí)間 (存活時(shí)間)，t檢驗(yàn)比較各給藥組與空白對(duì)照組之間差異顯著性，結(jié)果見表1。

表1 強(qiáng)心顆粒對(duì)小鼠常壓耐缺氧的影響 (±s)

表1 強(qiáng)心顆粒對(duì)小鼠常壓耐缺氧的影響 (±s)

注:與空白對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01，＊＊＊P ＜0.001。

/min空白對(duì)照組 —組別 劑量/(g·kg-1)動(dòng)物數(shù)/只 存活時(shí)間10 29.4±2.0強(qiáng)心顆粒低劑量組 21.5 10 30.1±5.5強(qiáng)心顆粒中劑量組 43 10 32.3±3.6*強(qiáng)心顆粒高劑量組 86 10 35.1±4.4＊＊心寶丸組 0.28 10 36.4 ±6.3＊＊鹽酸普萘洛爾組 0.052 10 39.3±4.4＊＊＊

結(jié)果表明，強(qiáng)心顆粒中、高劑量組，中藥對(duì)照藥心寶丸組和西藥對(duì)照藥鹽酸普萘洛爾組均顯著延長(zhǎng)小鼠在常壓缺氧條件下的存活時(shí)間，與空白對(duì)照組比較差異顯著 (P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001)。提示強(qiáng)心顆粒具有增強(qiáng)小鼠耐常壓缺氧能力的功效。

2.2 強(qiáng)心顆粒對(duì)代謝籠法小鼠利尿作用的影響［3］體質(zhì)量18～22 g健康ICR小鼠60只，雌雄各半，按性別體質(zhì)量隨機(jī)分為6組，每組10只。分別為空白對(duì)照組，強(qiáng)心顆粒低劑量組21.5 g/kg、中劑量組43 g/kg、高劑量組86 g/kg，中藥陽(yáng)性對(duì)照藥心寶丸組0.28 g/kg和西藥陽(yáng)性對(duì)照藥氫氯噻嗪片組0.026 g/kg。每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7 d，空白對(duì)照組給予同體積的蒸餾水。試驗(yàn)前將各小鼠放入代謝籠中適應(yīng)兩天，試驗(yàn)前小鼠禁食16 h，末次給藥后各小鼠同時(shí)灌胃給予蒸餾水1 mL/只進(jìn)行水負(fù)荷，然后觀察并記錄水負(fù)荷后1 h、2 h、3 h、4 h、5 h時(shí)各小鼠的尿量，t檢驗(yàn)比較各給藥組與空白對(duì)照組之間各時(shí)間點(diǎn)尿量差異顯著性，結(jié)果見表2。

表2 強(qiáng)心顆粒對(duì)小鼠利尿作用的影響 (±s)

表2 強(qiáng)心顆粒對(duì)小鼠利尿作用的影響 (±s)

注:與空白對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01，＊＊＊P ＜0.001。

組別 劑量/(g·kg-1) 動(dòng)物數(shù)/只 尿量/mL 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h空白對(duì)照組 — 10 0.15±0.14 0.19±0.13 0.16±0.11 0.08±0.06 0.18±0.16強(qiáng)心顆粒低劑量組 21.5 10 0.18±0.10 0.34±0.30 0.46±0.48 0.83±0.68＊＊ 0.46±0.50強(qiáng)心顆粒中劑量組 43 10 0.16±0.08 0.23±0.16 0.21±0.13 0.35±0.18＊＊ 0.23±0.17強(qiáng)心顆粒高劑量組 86 10 0.09±0.02 0.27±0.18 0.22±0.15 0.22±0.12＊＊ 0.22±0.14心寶丸組 0.28 10 0.14±0.08 0.15±0.11 0.20±0.08 0.08±0.04 0.09±0.06氫氯噻嗪組 0.026 10 0.28±0.17 0.43±0.12＊＊＊ 0.34±0.17* 0.29±0.24*0.27±0.29

結(jié)果表明，強(qiáng)心顆粒低、中、高劑量組，氫氯噻嗪片組給藥后均能增加小鼠水負(fù)荷后4 h的尿量，與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異 (P＜0.01)。提示強(qiáng)心顆粒給藥后4 h具有利尿作用。

2.3 強(qiáng)心顆粒對(duì)心衰大鼠血清SOD和MDA的影響［4-5］體質(zhì)量200～250 g健康Wistar大鼠120只，雌雄各半。飼養(yǎng)1周后，除10只大鼠作為空白對(duì)照組外，其它大鼠腹腔注射3 mg/kg注射用鹽酸多柔比星，每周1次，連續(xù)腹腔注射4周，空白組腹腔注射同體積生理鹽水。末次注射1周后，造模大鼠較空白組大鼠進(jìn)食量減少，毛色欠華，體質(zhì)量減輕，活動(dòng)量減少，注射時(shí)掙扎力明顯減弱。心臟彩超顯示，左室射血分?jǐn)?shù) (LVEF＜50%)則心衰造模成功。挑選造模成功的大鼠60只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為6組，即模型組，強(qiáng)心顆粒低劑量組15 g/kg、中劑量組30 g/kg、高劑量組60 g/kg，中藥陽(yáng)性對(duì)照藥心寶丸組0.2 g/kg和西藥陽(yáng)性對(duì)照藥馬來酸依那普利片組0.001 8 g/kg。每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥30 d，空白對(duì)照組和模型組給予同體積的蒸餾水。末次給藥后，10%水合氯醛 (3.5 mL/kg)腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血5 mL，分離血清 (3 000 r/min，離心15 min)，酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定血清中SOD活性和MDA水平。t檢驗(yàn)比較各給藥組與模型組之間差異顯著性，結(jié)果見表3。

表3 強(qiáng)心顆粒對(duì)心衰大鼠SOD和MDA的影響(±s)

表3 強(qiáng)心顆粒對(duì)心衰大鼠SOD和MDA的影響(±s)

注:與模型組比較，*P＜0.05;與空白對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別 劑量/(g·kg-1) 動(dòng)物數(shù)/只 SOD/(U·L-1) MDA/(mmol·L-1)空白對(duì)照組-10 19.87±8.18 0.78±0.10模型組 - 10 12.26±6.50# 1.12±0.27##強(qiáng)心顆粒低劑量組 15 10 19.00±8.34 0.89±0.20*強(qiáng)心顆粒中劑量組 30 10 20.36±8.96* 0.88±0.13*強(qiáng)心顆粒高劑量組 60 10 23.07±11.02* 0.85±0.16*心寶丸組 0.20 10 20.14±7.92* 0.86±0.20*馬來酸依那普利片組 0.018 10 19.40±6.77* 0.86±0.14*

結(jié)果表明，模型組SOD和MDA與空白對(duì)照組比較差異顯著 (P＜0.05，P＜0.01)。強(qiáng)心顆粒低、中、高劑量組、心寶丸組和馬來酸依那普利片組均能提高心衰大鼠血清中SOD活力，并降低MDA水平，與模型組比較差異顯著 (P＜0.05)。表明強(qiáng)心顆?？赏ㄟ^抗氧化作用發(fā)揮其改善心功能的作用。

3 討論

心肌缺血缺氧會(huì)引起心肌細(xì)胞代謝過程紊亂，尤其是能量物質(zhì)的生成銳減，正常心功能難以維持，進(jìn)而發(fā)生心衰。又因血流中斷，有害的產(chǎn)物難以清除。因此，可以通過改善血供，降低氧耗，清除或?qū)褂泻ξ镔|(zhì)對(duì)心肌的不良影響以保護(hù)心肌［6］。近年來發(fā)現(xiàn)氧自由基 (oxygen free radicals，OFR)及其脂質(zhì)過氧化物 (Lipidperoxide，LPO)可能參與了心衰形成、發(fā)展的病理過程。生理情況下，體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生和清除保持動(dòng)態(tài)平衡，心衰時(shí)由于心肌缺血缺氧，使氧自由基產(chǎn)生增加，同時(shí)清除氧自由基的防御系統(tǒng)活性下降，從而使氧自由基進(jìn)一步增多，而氧自由基的增多又可損害心肌導(dǎo)致或加重心衰。膜的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是氧自由基損傷的主要途徑，MDA是脂質(zhì)過氧化損傷的主要代謝終產(chǎn)物，而SOD則是機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)中的重要金屬酶，是體內(nèi)唯一直接淬滅自由基的酶，其活性直接影響體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的平衡。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，強(qiáng)心顆粒中、高劑量組均顯著延長(zhǎng)小鼠在常壓缺氧條件下的存活時(shí)間;提高心衰大鼠血清中SOD活性，并降低MDA水平。提示強(qiáng)心顆粒具有增強(qiáng)小鼠耐常壓缺氧能力的功效，同時(shí)可通過清除氧自由基和脂質(zhì)過氧化物發(fā)揮其改善心功能的作用。利尿劑是治療心力衰竭的關(guān)鍵藥物之一，它能較快的緩解心力衰竭的癥狀，比其他藥物作用迅速;也是唯一可以適當(dāng)控制心力衰竭患者體內(nèi)水鈉潴留的藥物。強(qiáng)心顆粒低、中、高劑量組均能增加小鼠水負(fù)荷后4 h的尿量，提示其可能通過利尿作用減輕心衰患者的水鈉潴留，降低前負(fù)荷，從而改善心衰。綜上可見，強(qiáng)心顆粒可能通過增加心肌供氧，抗氧化作用及利尿作用而發(fā)揮其抗心力衰竭的作用。

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