MAPK信號通路在新生隱球菌致病機(jī)制中的作用

皇幼明 朱紅梅 溫海

(上海長征醫(yī)院皮膚病與真菌病研究所全軍真菌病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室上海長征醫(yī)院皮膚科，上海 200003)

隱球菌是擔(dān)子菌酵母類真菌，在人類和動物中可引起隱球菌病。大部分人類隱球菌病發(fā)生在免疫受損人群，但也可在免疫正常人群中發(fā)病。隱球菌性腦膜炎由于其高致病性、難治愈性，正引起人們廣泛的關(guān)注。樹、鴿糞、土壤等是適宜隱球菌的自然生態(tài)環(huán)境，這些環(huán)境可刺激交配和孢子生長［1］。新生/格特隱球菌共有四種血清類型:血清A型(新生隱球菌格魯比變種)，血清B和 C型(格特隱球菌)，血清D型 (新生隱球菌新生變種)。不同血清型的隱球菌在生態(tài)分布、毒力方面存在不同程度的差異。公認(rèn)的隱球菌毒力因子主要有四種:莢膜、產(chǎn)生黑素、37℃生長、胞外分泌酶［2-5］。另外，交配型、表型轉(zhuǎn)換、抗菌藥物敏感性以及應(yīng)對外界信號應(yīng)激的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路均對毒力有著不同程度的影響。已有越來越多的研究關(guān)注這些毒力影響因素。因此，闡明毒力相關(guān)的致病機(jī)制對隱球菌病的診治具有重要意義。但目前關(guān)于這一系統(tǒng)的具體機(jī)制還不清楚。本文就促分裂原蛋白激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路如何調(diào)控毒力因子的機(jī)制作一闡述。

1MAPK通路概述

隱球菌是一種全球分布的真菌，主要分布于土壤、桉樹、鳥糞中。隱球菌細(xì)胞外環(huán)境由多種物理和生物因素組合而成，極大地影響著其生存和發(fā)展。隱球菌在感染哺乳動物宿主時(shí)亦暴露于環(huán)境變化中，它必須要感受這些變化、迅速地對胞外信號做出反應(yīng)使自身能夠靈活地應(yīng)對這些外界環(huán)境變化，以利于定植和繁殖。某些胞外信號可能影響毒力的變化。隱球菌感受并傳遞胞外信號調(diào)整自身生理活動需要復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。

在進(jìn)化過程中，真菌類生物已經(jīng)發(fā)展了復(fù)雜而敏感的適應(yīng)機(jī)制，使它們能夠通過適當(dāng)?shù)募?xì)胞內(nèi)信號活動來適應(yīng)外部環(huán)境的變化。促分裂原蛋白激酶(MAPK)級聯(lián)反應(yīng)是細(xì)胞適應(yīng)機(jī)制中的重要部分之一。MAPK通路由三種序列活化激酶組成。促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)激活并活化促分裂原活化蛋白激酶激酶 (MAPKK)，隨后MAPKK激活促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)。在釀酒酵母菌中，已發(fā)現(xiàn)至少五種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑包含MAPK級聯(lián)反應(yīng):細(xì)胞壁完整性通路、孢子壁組裝通路、菌絲生長通路、信息素反應(yīng)通路、高滲透性甘油通路，分別調(diào)節(jié)其生長、形態(tài)改變、繁殖和應(yīng)激反應(yīng)［6］。白念珠菌是最常見的侵襲性真菌，MAPK通路在白念珠菌的致病機(jī)制中的作用可能是介導(dǎo)白念珠菌感染中關(guān)鍵的形態(tài)學(xué)變化:酵母相向菌絲相的轉(zhuǎn)換［7-8］。通過基因?qū)W分析和表型鑒定發(fā)現(xiàn)白念珠菌中存在三種MAPK通路:Mkc1(Mitogen-activated protein kinase)介導(dǎo)的細(xì)胞壁完整性通路、Cek1/2(Candida extracellular regulated protein kinases-like kinase)介導(dǎo)的交配和絲化通路和 Hog1介導(dǎo)的高滲透性甘油通路。

近來，越來越多的證據(jù)表明，隱球菌的MAPK系統(tǒng)與釀酒酵母菌和白念珠菌有高度的相似，然而隱球菌的MAPK通路在毒力調(diào)控方面同時(shí)又具有一些自身獨(dú)特的表現(xiàn)。類似的MAPK通路也在隱球菌與宿主的生存中發(fā)揮重要作用，如莢膜合成、形態(tài)轉(zhuǎn)換等［9］，但已有的隱球菌MAPK通路的研究僅限于新生隱球菌血清A型、D型兩種菌株，且該通路在兩種菌株有血清特異性。

2MAPK通路構(gòu)成

隱球菌的MAPK通路包括HOG-MAPK通路、PKC-MAPK通路及Ste12轉(zhuǎn)錄基因通路［10］。這些MAPK途徑既可特異性的調(diào)節(jié)相關(guān)毒力因子，又與其他途徑協(xié)同調(diào)節(jié)細(xì)胞壁的完整性、在37℃生長的能力、莢膜與黑素的生成、交配與絲化、以及對高滲應(yīng)激、氧化應(yīng)激和紫外線的抵抗。

2.1PKC-MAPK 通路

PKC/Mpk1-MAPK通路主要調(diào)節(jié)細(xì)胞壁完整性和高溫下生長，在新生隱球菌抵抗?jié)B透壓、高溫、氧化應(yīng)激和硝酸化等壓力中扮演重要角色，也在莢膜和黑素生成中發(fā)揮作用。此通路的關(guān)鍵成分包括小 GTP結(jié)合蛋白Rho1、Pkc1、Bck1(MAPKKK)、Mkk1(MAPKK)、Mpk1(MAPK)，其中 Mpk1 誘導(dǎo)下游組分影響毒力特征。

在白念珠菌中，Mkc1(Mpk1類似物)參與維持細(xì)胞壁合成和保持細(xì)胞壁穩(wěn)定［8］。在新生隱球菌中也發(fā)現(xiàn)類似途徑協(xié)同參與應(yīng)對高溫反應(yīng)［11］。該途徑的核心成分是Mpk1，參與維持細(xì)胞壁的穩(wěn)定性，是新生隱球菌在37℃下生長的重要影響因子。當(dāng)隱球菌處于氧化應(yīng)激等細(xì)胞壁受損條件下時(shí)，Mpk1被磷酸化激活。激活的Mpk1完全依賴Pkc1發(fā)揮壓力應(yīng)對反應(yīng)。新生隱球菌Mpk1△突變株在小鼠隱球菌病模型中表現(xiàn)出毒力下降［11］和對抗菌藥物敏感性的增加［12］。pkc1 突變株對吡咯類抗真菌藥物的敏感性增加，提示該途徑可能參與新生隱球菌的藥物抵抗。Bahn等還發(fā)現(xiàn) Bck1△、Mkk1△、Mpk1△突變株都表現(xiàn)出對氧化應(yīng)激、高溫、抗菌藥物相似的高敏感性，說明這3種基因處于同一信號傳導(dǎo)通路之中［13］。Gerik等發(fā)現(xiàn)Pkc1△突變株中，幾丁質(zhì)和殼聚糖的錨 定 受 損。Pkc1△突 變 株 和 Bck1△、Mkk1△、Mpk1△突變株的細(xì)胞壁都受到損害，但Pkc1突變株的損害更為嚴(yán)重［14］。另外研究發(fā)現(xiàn)，Pkc1△突變株表現(xiàn)出了莢膜缺陷和黑素的減少，而Bck1△、Mkk1△、Mpk1△缺陷株的上述毒力特征并沒有受到影響。研究表明在Pkc1-MAPK通路外，Pkc1可能通過調(diào)節(jié)多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路或者Pkc1下游存在某種代償途徑來維持細(xì)胞壁的穩(wěn)定。

幾丁質(zhì)是細(xì)胞壁重要組成部分，有研究發(fā)現(xiàn)白念珠菌編碼幾丁質(zhì)合成酶基因的調(diào)節(jié)依賴與三種信號途徑:鈣調(diào)蛋白、PKC和 HOG途徑［15-16］，這些信號途徑并不獨(dú)立發(fā)揮作用，而是構(gòu)成交叉、反饋和補(bǔ)償機(jī)制組成的相互協(xié)調(diào)網(wǎng)絡(luò)。細(xì)胞壁的合成和完整性可以有效應(yīng)對氧化和氮化應(yīng)激反應(yīng)，對真菌的生存至關(guān)重要。Kojima等［17］發(fā)現(xiàn)吡咯類抗真菌藥物引起野生株細(xì)胞腫脹、染色質(zhì)分裂異常，而Hog1突變株無變化，提示Hog基因在激活狀態(tài)下可能會導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)異常。鈣調(diào)蛋白突變株對吡咯類抗真菌藥物敏感，且吡咯類抗真菌藥物和鈣調(diào)蛋白抑制劑FK506可以協(xié)同抑制新生隱球菌生長，提示Mpk1和鈣調(diào)蛋白可能協(xié)同調(diào)節(jié)新生隱球菌細(xì)胞壁完整性從而影響其藥物敏感性。故hog1是否亦參與了Pkc1對這些應(yīng)激的反應(yīng)值得進(jìn)一步研究證明。另外磷脂酶C也可活化PKC/MAPK信號級聯(lián)，磷脂酶C亦介導(dǎo)肌醇-1，4，5-三磷酸鹽的生成，后者作為第二信使在Ca2+途徑中起作用發(fā)揮對細(xì)胞壁完整性的調(diào)節(jié)。而磷脂酶C突變株在調(diào)節(jié)黑素生成、37℃下生長等致病因子方面存在缺陷。

2.2HOG-MAPK 通路

HOG-MAPK通路是酵母菌在高滲壓力環(huán)境中生存所必須的。真菌生長環(huán)境的滲透壓變化形式多樣，在高濃度糖條件下成熟繁殖為其特征。由于酵母菌是非運(yùn)動性的，不能逃離有害的環(huán)境，它們必須要通過不斷調(diào)節(jié)胞內(nèi)的活動來適應(yīng)外部滲透壓力的升高變化，其中涉及多種途徑來提高內(nèi)部滲透壓，如合成和保留兼容的等滲物質(zhì)比如甘油等［18］，調(diào)節(jié)水分的外流，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的變化。

白念珠菌HOG-MAPK通路至少涉及三種相對獨(dú)立的過程:對外界壓力的反應(yīng)和適應(yīng)、形態(tài)轉(zhuǎn)化、細(xì)胞壁合成，該通路涉及多種組氨酸激酶，但具體作用機(jī)制不明。釀酒酵母的壓力應(yīng)激反應(yīng)由高滲透性甘油促分裂原蛋白激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的促有絲分裂原蛋白激酶Hog1調(diào)節(jié)［19］，Hog1p是其中關(guān)鍵因子。在高滲透性條件下，信號通過兩條途徑匯合，激活MAPKK(Pbs2)，后者轉(zhuǎn)而激活特異性Hog1。激活的Hog1進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)控脅迫應(yīng)答相關(guān)基因的表達(dá) (如甘油合成基因)來應(yīng)對高滲壓力，并介導(dǎo)該時(shí)期細(xì)胞周期的阻滯，從而增強(qiáng)細(xì)胞對外界不利環(huán)境的適應(yīng)能力。

新生隱球菌HOG通路保留其他真菌的這些特征，同時(shí)有具備自身的特點(diǎn)。新生隱球菌D型菌株的HOG通路與其他真菌類似，在正常條件下，Hog1基因處于去磷酸化狀態(tài)。而大部分新生隱球菌株中，Hog1基因在正常條件下處于磷酸化狀態(tài)，當(dāng)出現(xiàn)高滲壓力時(shí)，Hog1基因迅速去磷酸化。有趣的是，磷酸化與壓力抵抗性和毒力相關(guān)，Hog1磷酸化越多，壓力抵抗性越高［12-13，20-21］。且有研究發(fā)現(xiàn)新生隱球菌血清A型菌株H99對滲透反應(yīng)的抵抗力高于血清 D 型菌株 JEC21［22］。Bahn 等［21］發(fā)現(xiàn)Pbs2在Hog1的磷酸化中發(fā)揮重要作用。Hog1的磷酸化高度依賴于Pbs2，因?yàn)镻bs2△缺陷株和Hog1△缺陷株表現(xiàn)出了高度相似性的表型。另外還發(fā)現(xiàn)正常條件下磷酸化的Hog1基因可能參與負(fù)性調(diào)解毒力因子如莢膜和黑素的生成、性分化，這可能是通過與cAMP信號通路和信息素轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的交叉作用來調(diào)解的，例如與野生菌株相比，hog1突變株和pbs2突變株的毒力降低。由于兩種突變菌株的莢膜合成和黑素產(chǎn)生升高，但是卻表現(xiàn)出毒力的減弱，推測在毒力升高的作用上，菌株對壓力應(yīng)激能力及敏感性的增高能夠抵消一些莢膜、黑素合成增加所造成的毒力變化。但是正常條件下去磷酸化Hog1基因的新生隱球菌菌株如JEC21卻沒有這種表現(xiàn)。

雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)模式已經(jīng)引起了醫(yī)學(xué)真菌界的重視［23］，此模式構(gòu)成釀酒酵母HOG信號級聯(lián)的上游途徑。雖然關(guān)于新生隱球菌HOG信號途徑上游部分的具體結(jié)構(gòu)還不明確，其中可能包括七種感受因子激酶，Tco1-Tco7(two-components-like proteins)，Ypd1 和反應(yīng)調(diào)節(jié)因子 Ssk1 和 Skn7［13］。Ssk1是主要的的上游信號調(diào)節(jié)因子。Skn7主要參與高鹽和氧化應(yīng)激反應(yīng)、黑素生成和毒力的調(diào)節(jié)［24］。在血清型D菌株的研究中，Skn7可能通過抵抗溶酶體殺傷而協(xié)助菌體在溶酶體內(nèi)生存［25］。在上述七種Tco蛋白中，Tco1和Tco2在磷酸化傳遞系統(tǒng)中扮演最重要作用，兩者在對抗真菌藥物吡咯類的敏感性方面有同樣作用［13］。并且還發(fā)現(xiàn)，Tco1參與黑素合成及毒力如性分化的調(diào)節(jié)，而Tco2在保護(hù)細(xì)胞壁免遭受氧化應(yīng)激中發(fā)揮部分作用。因此推測雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)模式調(diào)節(jié)壓力反應(yīng)、藥物敏感性、有性繁殖和毒力變化。

2.3 Ste12轉(zhuǎn)錄因子通路

Ste12主要參與調(diào)節(jié)酵母菌信息素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在釀酒酵母和白念珠菌中調(diào)節(jié)其交配、絲化和毒力。Ste12基因編碼Ste12蛋白，后者在釀酒酵母菌MAPK通路參與調(diào)節(jié)交配過程。在白念珠菌中，該蛋白通路涉及形態(tài)轉(zhuǎn)換和絲化過程，在白念珠菌侵襲性擴(kuò)散中發(fā)揮重要作用。類似Ste12基因同樣存在在隱球菌中，調(diào)控MAPK交配通路。Ste12基因存在于交配基因位點(diǎn)內(nèi)，包括Ste12α和Ste12a兩型，分別特異存在于α細(xì)胞和a細(xì)胞中。Ste12基因參與交配和菌絲生長過程，但并不發(fā)揮關(guān)鍵作用［26-27］，可控制已知相關(guān)毒力基因如莢膜和黑素相關(guān)基因的表達(dá)［26，28-29］，而Ste12α株一般比 Ste12a株毒力更強(qiáng)［30］。Davidson及其他一些學(xué)者發(fā)現(xiàn)新生隱球菌MAPK交配通路的上游成分并不調(diào)控毒力變化，Ste12α或者Ste12a 的缺失可導(dǎo)致交配頻率降低［26，29］。另有研究發(fā)現(xiàn)，在血清A型菌株中Ste12的缺失未表現(xiàn)出毒力的變化，而在血清D型中卻表現(xiàn)為毒力的減弱［29，31］。但是在格特隱球菌中，敲除同樣的基因卻可導(dǎo)致嚴(yán)重的毒力下降［32］?？芍琒te12參與菌株毒力的調(diào)控，但卻不是交配通路調(diào)節(jié)中所必須的，而且存在菌株間差異。

Davidson等［27］發(fā)現(xiàn)，通過交換彼此相反交配型菌株的基因，Ste12α和Ste12a可以互補(bǔ)彼此功能。但是，在菌絲的形成中，Ste12a在Ste12α突變菌株中的表達(dá)比Ste12α在Ste12a突變菌株中的表達(dá)更有效，表明Ste12基因在單倍子實(shí)體的作用可能受到其他基因等因素影響。在同一研究中發(fā)現(xiàn)，Ste12α和Ste12a調(diào)控感染老鼠腦脊液涂片中酵母細(xì)胞壁莢膜生長的大小，并且兩者影響一些毒力相關(guān)基因的表達(dá)。但目前還無法明確α基因在a交配型菌株中的表達(dá)是否會增強(qiáng)其毒力，或a基因在α交配型菌株中的表達(dá)是否會減損其毒力，兩者之間互補(bǔ)彼此功能的機(jī)制仍有待證實(shí)。

3 小 結(jié)

病原真菌的MAPK途徑對于其在宿主內(nèi)的生存和繁殖具有重要作用。這些MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以一系列磷酸化級聯(lián)反應(yīng)為特征，調(diào)節(jié)真菌的致病性、細(xì)胞壁合成和完整性、細(xì)胞生長、絲化、交配及應(yīng)對外界應(yīng)激的反應(yīng)。由于這些途徑內(nèi)部存在高度的特異化，如交配型特異性和血清型特異性，因此導(dǎo)致菌株間毒力的不同。參考其他真菌如釀酒酵母和白念珠菌中這些級聯(lián)反應(yīng)的類似組分的已知作用，有助于我們?nèi)ヌ綄に鼈冊陔[球菌致病機(jī)制中的功能。隱球菌胞內(nèi)存在多種MAPK信號通路，在不同的條件下由不同的外界應(yīng)激所激活，不同的MAPK通路調(diào)節(jié)不同毒力因子的變化，發(fā)揮不同功能，如ste12、HOG、PKC三條通路分別在繁殖和侵襲性生長、高滲透壓力、細(xì)胞壁完整性中發(fā)揮關(guān)鍵作用，而HOG和PKC均在氧化應(yīng)激和氮化應(yīng)激條件發(fā)揮重要作用。同時(shí)，三種途徑都調(diào)控莢膜合成和黑素的產(chǎn)生。在MAPK途徑之間及與其他途徑之間，也存在著交叉，反饋及補(bǔ)償機(jī)制，這些在動物感染模型中通過去除菌株中這些級聯(lián)反應(yīng)的某些基因成分而導(dǎo)致致病性減弱的實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)出來，但是，關(guān)于這種相關(guān)性在不同宿主體內(nèi)是否相同，需要更多研究去證實(shí)。

［1］Lin X，Heitman J.The biology of theCryptococcus neoformansspecies complex［J］.Annu Rev Microbiol，2006，60:69-105.

［2］Torres-Rodriguez JM，Alvarado-Ramirez E，Gutierrez-Gallego R.［Urease activity inCryptococcusneoformansandCryptococcus gattii［J］.Rev Iberoam Micol，2008，25(1):27-31.

［3］Salas SD，Bennett JE，Kwon-Chung KJ，et al.Effect of the laccase gene CNLAC1，on virulence ofCryptococcus neoformans［J］.J Exp Med，1996，184(2):377-386.

［4］Kronstad J，Jung WH，and Hu G.Beyond the big three:systematic analysis of virulence factors inCryptococcus neoformans［J］.Cell Host Microbe，2008，4(4):308-310.

［5］Chang YC，Kwon-Chung KJ.Complementation of a capsule-deficient mutation ofCryptococcus neoformansrestores its virulence［J］.Mol Cell Biol，1994，14(7):4912-4919.

［6］Posas F，Takekawa M，and Saito H.Signal transduction by MAP kinase cascades in budding yeast［J］.Curr Opin Microbiol，1998，1(2):175-182.

［7］Arana DM，Nombela C，Alonso-Monge R，et al.The Pbs2 MAP kinase kinase is essential for the oxidative-stress response in the fungal pathogenCandida albicans［J］.Microbiology，2005，151(Pt 4):1033-1049.

［8］Navarro-Garcia F，Alonso-Monge R，Rico H，et al.A role for the MAP kinase gene MKC1 in cell wall construction and morphological transitions inCandida albicans［J］.Microbiology，1998，144(Pt 2):411-424.

［9］Roman E，Arana DM，Nombela C，et al.MAP kinase pathways as regulators of fungal virulence［J］.Trends Microbiol，2007，15(4):181-190.

［10］Kozubowski L，Lee SC，Heitman J.Signalling pathways in the pathogenesis of Cryptococcus［J］.Cell Microbiol，2009，11(3):370-380.

［11］Kraus PR， Fox DS， Cox GM， et al. TheCryptococcus neoformansMAP kinase Mpk1 regulates cell integrity in re-sponse to antifungal drugs and loss of calcineurin function［J］.Mol Microbiol，2003，48(5):1377-1387.

［12］Kojima K，Bahn YS，Heitman J.Calcineurin，Mpk1 and Hog1 MAPK pathways independently control fludioxonil antifungal sensitivity inCryptococcus neoformans［J］. Microbiology，2006，152(Pt 3):591-604.

［13］Bahn YS，Kojima K，Cox GM，et al.A unique fungal two-component system regulates stress responses，drug sensitivity，sexual development，and virulence ofCryptococcus neoformans［J］.Mol Biol Cell，2006，17(7):3122-3135.

［14］Gerik KJ，Bhimireddy SR，Ryerse JS，et al.PKC1 is essential for protection against both oxidative and nitrosative stresses，cell integrity，and normal manifestation of virulence factors in the pathogenic fungusCryptococcus neoformans［J］.Eukaryot Cell，2008，7(10):1685-1698.

［15］Munro CA，Selvaggini S，De Bruijn I，et al.The PKC，HOG and Ca2+signalling pathways co-ordinately regulate chitin synthesis inCandida albicans［J］.Mol Microbiol，2007，63(5):1399-1413.

［16］Monge RA，Roman E，Nombela C，et al.The MAP kinase signal transduction network inCandida albicans［J］.Microbiology，2006，152(Pt 4):905-912.

［17］Chayakulkeeree M，Sorrell TC，Siafakas AR，et al.Role and mechanism of phosphatidylinositol-specific phospholipase C in survival and virulence ofCryptococcus neoformans［J］.Mol Microbiol，2008，69(4):809-826.

［18］Albertyn J，Hohmann S，Thevelein JM，et al.GPD1，which encodes glycerol-3-phosphate dehydrogenase，is essential for growth under osmotic stress in Saccharomyces cerevisiae，and its expression is regulated by the high-osmolarity glycerol response pathway［J］.Mol Cell Biol，1994，14(6):4135-4144.

［19］Hohmann S，Krantz M，Nordlander B.Yeast osmoregulation［J］.Methods Enzymol，2007，428:29-45.

［20］Bahn YS，Geunes-Boyer S，Heitman J.Ssk2 mitogen-activated protein kinase kinase kinase governs divergent patterns of the stress-activated Hog1 signaling pathway inCryptococcus neoformans［J］.Eukaryot Cell，2007，6(12):2278-2289.

［21］Bahn YS，Kojima K，Cox GM，et al.Specialization of the HOG pathway and its impact on differentiation and virulence ofCryptococcus neoformans［J］.Mol Biol Cell，2005，16(5):2285-2300.

［22］Cruz MC，Sia RA，Olson M，et al.Comparison of the roles of calcineurin in physiology and virulence in serotype D and serotype A strains ofCryptococcus neoformans［J］.Infect Immun，2000，68(2):982-985.

［23］Kruppa M and Calderone R.Two-component signal transduction in human fungal pathogens［J］.FEMS Yeast Res，2006，6(2):149-159.

［24］Wormley FL，Jr.，Heinrich G，Miller JL，et al.Identification and characterization of an SKN7 homologue inCryptococcus neoformans［J］.Infect Immun，2005，73(8):5022-5030.

［25］Coenjaerts FE，Hoepelman AI，Scharringa J，et al.The Skn7 response regulator ofCryptococcus neoformansis involved in oxidative stress signalling and augments intracellular survival in endothelium［J］.FEMS Yeast Res，2006，6(4):652-661.

［26］Davidson RC，Nichols CB，Cox GM，et al.A MAP kinase cascade composed of cell type specific and non-specific elements controls mating and differentiation of the fungal pathogenCryptococcus neoformans［J］.Mol Microbiol，2003，49(2):469-485.

［27］Chang YC，Penoyer LA，Kwon-Chung KJ.The second STE12 homologue ofCryptococcus neoformansis MATa-specific and plays an important role in virulence［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2001，98(6):3258-3263.

［28］WickesBL， Edman U， Edman JC. TheCryptococcus neoformansSTE12alpha gene:a putative Saccharomyces cerevisiae STE12 homologue that is mating type specific［J］.Mol Microbiol，1997，26(5):951-960.

［29］Chang YC， Wickes BL， Miller GF， et al.Cryptococcus neoformansSTE12alpha regulates virulence but is not essential for mating［J］.J Exp Med，2000，191(5):871-882.

［30］Barchiesi F，Cogliati M，Esposto MC，et al.Comparative analysis of pathogenicity ofCryptococcus neoformansserotypes A，D and AD in murine cryptococcosis［J］.J Infect，2005，51(1):10-16.

［31］Yue C，Cavallo LM，Alspaugh JA，et al.The STE12alpha homolog is required for haploid filamentation but largely dispensable for mating and virulence inCryptococcus neoformans［J］.Genetics，1999，153(4):1601-1615.

［32］Ren P，Springer DJ，Behr MJ，et al.Transcription factor STE12alpha has distinct roles in morphogenesis，virulence，and ecological fitness of the primary pathogenic yeastCryptococcus gattii［J］.Eukaryot Cell，2006，5(7):1065-1080.