精液分析標(biāo)準(zhǔn)化和精液質(zhì)量評估——WHO《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》(第5版)出版

陳振文 谷龍杰

1.國家人口計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究所(北京，100081);2.華中科技大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心

精液分析是評估男子生育力的重要方法，也是男科疾病診斷以及療效觀察的試驗(yàn)依據(jù)。精液常規(guī)分析易受采集方式、射精頻度、溫度、實(shí)驗(yàn)室條件、檢驗(yàn)人員的技術(shù)熟練程度及主觀判斷能力等諸多因素的影響，導(dǎo)致分析結(jié)果發(fā)生偏差，所以精液的采集與分析必須嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化程序進(jìn)行，才能提供受檢者臨床狀況的必要信息。近年來隨著男科學(xué)和生殖醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，不少原有的概念和診療建議需要修訂，為此WHO組織成立了專門的委員會(huì)，通過收集臨床數(shù)據(jù)，修訂出版了新的《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》(第5版)，以期提高精液分析質(zhì)量。

1 精液標(biāo)本的采集和運(yùn)送

精液采集規(guī)范化是做好精液分析的前提條件，因此在精液采集前務(wù)必詳細(xì)告知受檢者有關(guān)精液采集和運(yùn)送的方法及注意事項(xiàng)。

1.1 精液采集次數(shù)

不育夫婦初診時(shí)，男方應(yīng)至少檢測2～3次精液標(biāo)本以獲取基線數(shù)據(jù)，兩次精液采集的時(shí)間應(yīng)間隔7d～3周。如果兩次精液分析的結(jié)果有明顯差異，應(yīng)再采集標(biāo)本進(jìn)行第3次分析。

1.2 精液采集時(shí)間

最好在實(shí)驗(yàn)室附近的私密的房間內(nèi)進(jìn)行，采集前應(yīng)禁欲至少2d，最多7d。如果需要多次采集標(biāo)本，每次的禁欲天數(shù)應(yīng)盡可能一致，以減少精液分析結(jié)果的波動(dòng)。每一份精液分析報(bào)告都應(yīng)寫明:受檢者姓名、禁欲天數(shù)、標(biāo)本采集的日期和時(shí)間、標(biāo)本采集是否完整以及標(biāo)本從采集到分析的時(shí)間間隔等。

1.3 精液采集及保存運(yùn)送

最好采用手淫法采集精液，將精液收集于對精子無毒性的清潔廣口玻璃或塑料容器中。如果要做微生物學(xué)檢查或用于輔助生殖治療，受檢者應(yīng)提前排尿并洗凈雙手和陰莖，用無菌容器收集精液。特殊情況下可采用特制的對精子無毒性的避孕套進(jìn)行精液采集，并于采集后1h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。如果在家里或其他場所采集精液，在運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室期間應(yīng)保持溫度恒定在20～37℃，并予以記錄。精液采集一定要完整，不完整的精液不宜進(jìn)行分析。

1.4 無菌處理

精液標(biāo)本可能含有致病菌和病毒，應(yīng)視為生物危險(xiǎn)品。實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員要注意防護(hù)，使用一次性手套和器皿。用過的器皿要消毒處理。對用于精液培養(yǎng)、生物測定、宮腔內(nèi)人工授精或體外受精的標(biāo)本，在處理過程中必須嚴(yán)格使用無菌材料和無菌操作。

2 精液的肉眼觀察

2.1 精液的液化

精液射出后會(huì)很快呈現(xiàn)半固體凝膠的外觀，通常在數(shù)分鐘內(nèi)開始液化變得稀薄，液化大多在15min內(nèi)完成，如超過60min未能完全液化應(yīng)作記錄。正常液化的精液中可能含有不液化的膠凍狀顆粒，這一現(xiàn)象沒有臨床意義。對液化不良的精液標(biāo)本，可用機(jī)械混勻或酶消化(菠蘿蛋白酶10U/L)的方法進(jìn)行處理，也可以采用在標(biāo)本中加入等體積的培養(yǎng)液并用加樣器反復(fù)吹打的方法。應(yīng)注意的是，所有這些處理方法可能影響精漿的生化、精子活力和精子形態(tài)學(xué)的測定結(jié)果，必須予以記錄。

2.2 精液黏稠度

精液液化后，將精液吸入一支廣口徑(直徑1.5mm)的一次性塑料吸液管，使精液借助重力滴下，觀察拉絲的長度，可以評估精液標(biāo)本的黏稠度。正常精液會(huì)形成不連續(xù)的小滴;黏稠度異常時(shí)液滴會(huì)形成超過2cm的拉絲。另一個(gè)檢查方法是將一根玻璃棒插入精液，提起玻璃棒，觀察拉絲長度。拉絲長度超過2cm應(yīng)記錄為異常的黏稠度。過高的精液黏稠度可干擾精子活力、濃度、精子表面抗體和生化標(biāo)志物的檢測。

2.3 精液的外觀

正常的精液質(zhì)地均勻、呈灰白色，禁欲時(shí)間長時(shí)精液可略帶黃色。如果精子濃度非常低或無精子，精液可能顯得透明些。含有紅細(xì)胞的精液可呈紅褐色。如有黃疸或服用某些維生素，精液可呈黃色。

2.4 精液的體積

第5版手冊強(qiáng)調(diào)精確測量精液體積的重要性。推薦采用稱重的方法計(jì)算精液的體積:預(yù)先測定空容器的重量，采集精液后再次稱重，減去原始重量得到的差值即為精液的重量，再除以精液比重就可計(jì)算精液的體積，精液的實(shí)際比重約為1.014g/ml，實(shí)際工作中可用1g/ml替代;此外也可以將精液收集在廣口帶刻度量筒中直接讀取精液體積。不推薦采用將容器中的精液轉(zhuǎn)移到量筒或注射器中測定精液體積的方法，以免低估精液體積。正常男子每次射精量≥1.5ml。在沒有精液丟失的前提下，如果精液體積過少，應(yīng)考慮先天性雙側(cè)輸精管缺如、射精管梗阻、不完全逆行射精以及雄激素缺乏等可能性。

2.5 精液的pH值

精液pH值反映了不同附性腺分泌液pH值之間的平衡，應(yīng)在射精后同一時(shí)間測量，最好是30min后，但不超過1h。將精液標(biāo)本混勻后，在pH試紙上(測試范圍6.0～10.0)均勻地涂上一滴精液，等浸漬區(qū)顏色均勻后(30s內(nèi))立即與標(biāo)準(zhǔn)條帶顏色對比，讀出pH值。

3 精液的顯微鏡檢查

精液顯微鏡檢查包括精子濃度、精子活力、精子存活率、精子凝集、非精子細(xì)胞成分的測定和精子的形態(tài)學(xué)分析。建議使用相差顯微鏡進(jìn)行新鮮精液未染色制片的所有檢查。

3.1 濕片的制備

精液取樣的體積和蓋玻片的尺寸應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，以使精液在20μm左右的厚度下進(jìn)行分析。具體方法是:混勻精液后，立即將10μl的精液滴在干凈載玻片上，蓋上22mm×22mm的蓋玻片。蓋玻片的重量使標(biāo)本散開，注意避免在蓋玻片和載玻片之間產(chǎn)生氣泡。等制片內(nèi)精液不再漂移立即進(jìn)行評估。由于溫度會(huì)影響精子的活力分級，因此實(shí)驗(yàn)室的溫度必須標(biāo)準(zhǔn)化，檢測宜在20～24℃室溫下進(jìn)行。制備好的標(biāo)本應(yīng)先在100倍鏡下觀察是否有黏液絲形成，精子的聚集或凝集，除精子外的其他細(xì)胞以及標(biāo)本在載玻片上展開的是否均勻，然后在200或400倍鏡下評估精子活力，并確定檢測精子濃度所需的精液稀釋倍數(shù)。

3.2 精子凝集與聚集

精子聚集是指不活動(dòng)精子之間，活動(dòng)精子與黏液絲，活動(dòng)精子與非精子細(xì)胞成分或細(xì)胞碎片等粘在一起，應(yīng)如實(shí)記錄。精子凝集是指活動(dòng)精子以頭對頭、尾對尾或混合型相互粘在一起，提示可能存在抗精子抗體。應(yīng)記錄所有活動(dòng)精子的凝集類型，凝集的程度分為1、2、3、4級:每個(gè)凝集少于10個(gè)精子，有很多自由活動(dòng)精子為1級;每個(gè)凝集有10～50個(gè)精子，存在自由活動(dòng)精子為2級;每個(gè)凝集多于50個(gè)精子，仍有一些自由活動(dòng)精子為3級;所有精子凝集，數(shù)個(gè)凝集粘連在一起為4級。根據(jù)粘連部位分為A、B、C、D、E級:A級為頭對頭;B級為尾對尾;C級為尾尖對尾尖;D級為混合型，可以清晰看到頭對頭和尾對尾的凝集;E級為頭和尾的纏結(jié)、無法清晰看到頭部的凝集。

3.3 非精子細(xì)胞成分

精液中含有非精子細(xì)胞成分，包括泌尿生殖道的上皮細(xì)胞、生精細(xì)胞和白細(xì)胞等，后兩者統(tǒng)稱為“圓細(xì)胞”。一般而言，一份正常精液中所含圓細(xì)胞濃度應(yīng)＜5×106/ml。白細(xì)胞，主要是中性粒細(xì)胞，存在于大多數(shù)人的精液中。過多的白細(xì)胞(白細(xì)胞精子癥)可能與感染和精液質(zhì)量差有關(guān)，應(yīng)進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)以證實(shí)有無副性腺感染，但如果未發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞也不能完全排除副性腺感染的可能性。白細(xì)胞和生精細(xì)胞可用過氧化物酶技術(shù)和全白細(xì)胞單克隆抗體法鑒別。不同類型的未成熟生精細(xì)胞在精液中出現(xiàn)常提示精子發(fā)生異常。過氧化物酶陽性的白細(xì)胞濃度不應(yīng)超過1×106/ml。非精子細(xì)胞也可采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，方法同精子計(jì)數(shù)。另外，也可以用與精子的相對濃度來表示其它類型生精細(xì)胞和白細(xì)胞的濃度。計(jì)算方法為C=S×(N/400)，C:需計(jì)算的特定類型細(xì)胞濃度(106/ml)，N:計(jì)數(shù)400個(gè)精子時(shí)同視野中的特定類型細(xì)胞數(shù)，S:樣本的精子濃度(106/ml)。

3.4 精子活力

精子的前向運(yùn)動(dòng)情況與受孕有密切的關(guān)聯(lián)。在第5版手冊中，將精子活動(dòng)力分為前向運(yùn)動(dòng)(PR)、非前向運(yùn)動(dòng)(NP)、不活動(dòng)(IM)，而不再沿用以往的將精子活動(dòng)力分為a、b、c、d級的分類方法，這是新版手冊中的一個(gè)重要修訂。

可采用帶有網(wǎng)格的目鏡，以更好地評估精子活動(dòng)力，評估過程中所檢測的區(qū)域應(yīng)距離蓋玻片邊緣至少5mm以上。應(yīng)在室溫或帶有加熱37℃載物臺(tái)的顯微鏡下進(jìn)行精子活動(dòng)力評估，由于精子活動(dòng)力與環(huán)境溫度密切相關(guān)，最好將臺(tái)面溫度保持恒定在37℃。

要準(zhǔn)確地評估精子活動(dòng)力，應(yīng)將精液充分混勻后，重復(fù)取樣2次分別檢測，先仔細(xì)觀察網(wǎng)格區(qū)計(jì)數(shù)前向運(yùn)動(dòng)精子，接下來是在相同的網(wǎng)格內(nèi)的非前向運(yùn)動(dòng)精子，最后是不活動(dòng)精子。每個(gè)樣本至少系統(tǒng)地觀察5個(gè)視野，分析的精子應(yīng)＞200個(gè)。兩次分析結(jié)果之間的差異應(yīng)在95%可信區(qū)間內(nèi)，如果兩個(gè)樣本之間的差異過大，則應(yīng)重新混勻標(biāo)本后重復(fù)取樣檢查。第5版手冊將 PR≥32%、(PR+NP)≥40%作為精子活動(dòng)力的參考值下限，低于此下限時(shí)受孕的機(jī)會(huì)減低。

3.5 精子存活率

精子存活率指存活精子在所檢測精子總數(shù)中的百分比。當(dāng)活動(dòng)精子百分?jǐn)?shù)低于40%時(shí)，應(yīng)檢測精子存活率。不動(dòng)的精子并不都是死亡精子，如果存活但不動(dòng)的精子占很大比例則提示精子鞭毛可能存在結(jié)構(gòu)缺陷。推薦采用伊紅－苯胺黑染色排除法，單用伊紅染色試驗(yàn)或低滲膨脹試驗(yàn)進(jìn)行檢測。伊紅－苯胺黑染色以及單用伊紅染色試驗(yàn)的原理是，存活精子的細(xì)胞膜可阻止精子被染料伊紅所染色，而死亡精子則因細(xì)胞膜通透性改變而易被伊紅染為紅色，用光學(xué)顯微鏡或相差顯微鏡檢測可以區(qū)分活精子(未著色)和死精子(著色)，而加用苯胺黑有利于更好地觀察。而低滲腫脹試驗(yàn)的基本原理則利用存活精子的細(xì)胞膜能夠形成滲透梯度的特性，當(dāng)被置于低滲透壓液體中時(shí)存活精子可因細(xì)胞外水分進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而造成細(xì)胞的腫脹，死亡精子則缺乏這種現(xiàn)象，從而可以判斷精子是否存活，可用于輔助生殖技術(shù)。

3.6 精子濃度的初檢

第5版手冊中不再使用原來的“精子密度”這一名詞，而是改為“精子濃度”，以更準(zhǔn)確地表示一定體積精液中的精子數(shù)量這一概念。在精確計(jì)數(shù)精子濃度前要進(jìn)行精子濃度的初檢，以估計(jì)精確計(jì)數(shù)所需要的精液稀釋倍數(shù)。對于厚度為20μm的精液標(biāo)本來說，200倍高倍鏡下每個(gè)視野下的容積約為16nl，400倍高倍鏡下每個(gè)視野下的容積約為4nl。因此，計(jì)數(shù)每個(gè)視野的精子個(gè)數(shù)，就可粗略估算精子濃度。再據(jù)此決定精液所需的稀釋倍數(shù):每400倍視野≤15個(gè)精子或200倍視野≤60個(gè)精子，采用1∶2稀釋;400倍視野16～100個(gè)精子或200倍視野64～400個(gè)精子，采用1∶5稀釋;400倍視野超過101個(gè)精子或200倍視野超過404個(gè)精子，采用1∶20稀釋。如果每個(gè)視野中的精子數(shù)目差異較大，提示標(biāo)本不均勻，應(yīng)重新混勻標(biāo)本再取樣檢測。

當(dāng)精子數(shù)目過少時(shí)，應(yīng)根據(jù)檢測目的和要求的不同決定下一步的處理方式。如果不需要得到精確的精子濃度，那么當(dāng)每個(gè)400倍視野中精子數(shù)目＜4個(gè)或者每個(gè)200倍視野中＜16個(gè)時(shí)，可以報(bào)告為“精子濃度＜2×106/ml”，同時(shí)應(yīng)報(bào)告是否發(fā)現(xiàn)前向運(yùn)動(dòng)精子;如果需要獲得精確的精子濃度，可減少精液稀釋的倍數(shù)、增加檢測精液的總體積。

當(dāng)任一濕片中都沒有觀察到精子時(shí)，應(yīng)離心精液以確定在更大標(biāo)本量中能否發(fā)現(xiàn)精子。取1ml精液用3 000g離心15min，棄去大部分上清液，將全部沉淀懸浮于約50μl精漿中，再分別取兩份10μl沉淀物仔細(xì)檢查，如果仍無法找到精子，才能做出“無精子癥”的判斷。如果在任一樣本中觀察到精子，則提示隱匿精子癥。

3.7 精子濃度和精子總數(shù)

第5版手冊特別強(qiáng)調(diào)每次射精中精子總數(shù)的重要性，認(rèn)為精子總數(shù)能更準(zhǔn)確地反映睪丸生精功能和輸精管道的通暢程度。精子總數(shù)是精子濃度與精液體積的乘積，因此準(zhǔn)確測定精子濃度十分重要。推薦采用改良Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)板測定精子濃度，檢測前必須充分混勻精液標(biāo)本，分別兩次取樣、兩次稀釋、兩次檢測。首先按事先估計(jì)的稀釋倍數(shù)將精液稀釋。標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的配制方法是:將50g NaHCO3和10ml 35%(v/v)甲醛溶液加入1 000ml純水中，如果需要可添加0.25g臺(tái)酚藍(lán)或5ml飽和甲紫溶液(＞4mg/ml)加深背景顯示出精子頭部，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

向計(jì)數(shù)板吹氣使其輕微濕潤，再將蓋玻片緊壓向計(jì)數(shù)池的支柱，確保蓋玻片緊貼計(jì)數(shù)池。用移液器吸取10μl剛剛稀釋好的精液，將移液器吸頭小心地接觸一個(gè)計(jì)數(shù)池V形槽的下緣，利用毛細(xì)作用使精液標(biāo)本充滿計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池不應(yīng)過滿或不滿，也不應(yīng)移動(dòng)蓋玻片。同樣將10μl標(biāo)本加入到另一個(gè)計(jì)數(shù)池中。將血計(jì)數(shù)板水平放在濕盒內(nèi)至少4min后開始計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)應(yīng)使用200或400倍的相差顯微鏡，每份樣本檢測200個(gè)以上的精子以減低誤差。應(yīng)計(jì)數(shù)有完整結(jié)構(gòu)的精子(有頭和尾)，有缺陷的精子(大頭針狀頭或和無尾的精子頭)應(yīng)分開計(jì)數(shù)并記錄。

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板每個(gè)計(jì)數(shù)池共有9個(gè)網(wǎng)格，其中中央網(wǎng)格有5排，每排5個(gè)大方格。計(jì)數(shù)時(shí)，先評估一個(gè)計(jì)數(shù)池的中央網(wǎng)格，逐排計(jì)數(shù)，直到至少數(shù)到200個(gè)精子，并數(shù)完完整的一排。如果中央網(wǎng)格的5排中計(jì)數(shù)未滿200個(gè)精子，那么還需計(jì)數(shù)與中央網(wǎng)格相鄰的網(wǎng)格，直到數(shù)完至少200個(gè)精子。對于位于相鄰兩格分界線上的精子，只計(jì)數(shù)位于方格上界和左界的精子，而不計(jì)數(shù)位于下界和右界的精子。然后計(jì)數(shù)另一個(gè)計(jì)數(shù)池中相同體積的標(biāo)本，計(jì)算兩個(gè)計(jì)數(shù)池計(jì)數(shù)結(jié)果的總數(shù)和差異。兩次計(jì)數(shù)之間的差異應(yīng)在95%可信區(qū)間內(nèi)，如變異過大應(yīng)重新混勻標(biāo)本再重復(fù)取樣計(jì)數(shù)。計(jì)算兩次計(jì)數(shù)的平均數(shù)作為最終的檢查結(jié)果。根據(jù)精液稀釋倍數(shù)計(jì)算原始精液中的精子濃度。

臨床上也可用Makler或Microcell計(jì)數(shù)池來測定精子濃度，這些計(jì)數(shù)池使用方便、不必稀釋樣本，但應(yīng)與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的檢測結(jié)果進(jìn)行比較和校正以保證其結(jié)果的可靠性。

3.8 精子形態(tài)學(xué)評估

人類精子形態(tài)的多樣性造成精子形態(tài)評估非常困難，觀察女性生殖道(尤其是性交后宮頸黏液中)的精子或從透明帶表面回收的精子有助于定義具備潛在受精能力精子的外觀。精子形態(tài)分析的關(guān)鍵是評估正常形態(tài)的精子，計(jì)算其百分比，因?yàn)橹挥姓Ｐ螒B(tài)的精子才有臨床意義。對各類畸形精子也應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)分析，有特殊情況還應(yīng)作記錄。

3.8.1 涂片的制備 載玻片用不掉屑的紙巾用力擦干凈備用，充分混勻標(biāo)本后，根據(jù)精子濃度取5～10μl精液滴于載玻片一端，立即用另一張載玻片沿第一張載玻片表面在精液滴前方拖拉精液滴。精子濃度低時(shí)可離心濃縮標(biāo)本，以獲得盡可能高的濃度(但不應(yīng)超過50×106/ml)然后按照正常標(biāo)本的方法涂片。過于黏稠的標(biāo)本、碎片過多的標(biāo)本以及用于計(jì)算機(jī)輔助評估精子形態(tài)學(xué)的標(biāo)本，可取0.2～0.5ml精液加入10ml生理鹽水中稀釋，離心棄去大部分上清液，將沉淀懸浮于20～40μl液體中，再取5～10μl精子混懸液涂片。涂片行空氣干燥并固定，固定程序取決于染色方法。

3.8.2 染色方法 涂片空氣干燥后應(yīng)立即固定染色，推薦采用巴氏染色法、Shorr染色法或Diff－Quik染色法。在光學(xué)顯微鏡下觀察，精子頭部頂體區(qū)呈淡藍(lán)色，頂體后區(qū)染成深藍(lán)色，中段可染為略呈紅色，尾部染成藍(lán)色或淡紅色，胞漿小滴常位于頭部下部或圍繞中段，染成粉紅色、紅色或橘色?？焖偃旧椒ㄓ捎谕科夹g(shù)會(huì)導(dǎo)致精子分布不均勻，無法觀察到形態(tài)學(xué)分類所需的細(xì)節(jié)，不建議使用。

3.8.3 正常精子形態(tài)學(xué) 精子包括頭、頸、中段、主段和末段。光學(xué)顯微鏡下難以觀察精子末段，因此可以認(rèn)為精子由頭(頭和頸)和尾(中段和主段)組成。只有頭和尾都正常的精子才認(rèn)為是正常的，所有處于臨界狀態(tài)的精子均應(yīng)認(rèn)為異常。精子頭外形應(yīng)為光滑、輪廓規(guī)則的橢圓形，頂體區(qū)清晰，占頭部的40% ～70%，頂體區(qū)沒有大空泡，小空泡不超過2個(gè)，空泡大小不超過頭部的20%，頂體后區(qū)不含任何空泡。中段細(xì)長、規(guī)則，長度與頭部大約相等，主軸與頭部長軸在同一直線上，殘留胞漿不超過頭部大小的1/3。主段均一，比中段細(xì)，長約45μm，相當(dāng)于頭部長度的10倍左右，沒有銳利的折角。

3.8.4 異常精子形態(tài)學(xué)分類 畸形精子百分率升高常與精子異常發(fā)生或附睪病變有關(guān)，畸形精子一般受精潛力較低。主要的精子缺陷類型有:①頭部缺陷:大頭、小頭、錐形頭、梨形頭、圓頭、無定形頭、有空泡的頭(未著色的空泡區(qū)域占頭部20%以上或超過2個(gè)空泡)、頂體后區(qū)存在空泡、頂體過大(＞頭部70%)或過小(＜頭部40%)、雙頭以及上述缺陷的任何組合。②頸部和中段的缺陷:中段非對稱地接在頭部、過粗或不規(guī)則、銳角彎曲、異常細(xì)的中段和上述缺陷的任何組合。③主段缺陷:短尾、多尾、斷尾、發(fā)卡形平滑彎曲、銳角彎曲、寬度不規(guī)則、卷曲或上述缺陷的任何組合。④過量殘留胞漿:胞漿的大小超過精子頭部的1/3。第5版手冊提供了一系列精子正常和異常形態(tài)的精美圖片，可供實(shí)驗(yàn)人員參考。

3.8.5 精子形態(tài)學(xué)涂片的評估 染色后使用1 000倍油鏡在亮視野下觀察，應(yīng)系統(tǒng)地選擇涂片上多個(gè)區(qū)域進(jìn)行評估，應(yīng)評估每個(gè)視野中的所有精子，每張涂片至少評估200個(gè)精子以減低誤差。兩個(gè)重復(fù)取樣的檢查結(jié)果之間的差異應(yīng)在95%可信區(qū)間內(nèi)，計(jì)算其平均數(shù)作為標(biāo)本的正常形態(tài)百分率。檢測時(shí)僅評估具有頭部和尾部的完整精子，不計(jì)數(shù)未成熟的生殖細(xì)胞。重疊的精子和頭部枕在其他顆粒邊緣的精子也不應(yīng)評估。正常形態(tài)精子的參考值下限為4%。

對所有異常形態(tài)精子進(jìn)行分類，可能有助于臨床和研究工作?？勺⒚骶尤毕莸念愋筒⒂?jì)算不同缺陷精子的百分比。游離的精子頭部或尾部不作為精子計(jì)數(shù)，也不作為異常精子進(jìn)行計(jì)數(shù)。如果所有精子都呈現(xiàn)一種特定的結(jié)構(gòu)缺陷，比如小圓頭精子、無尾精子頭或大頭針狀精子，應(yīng)予以正確的報(bào)告。

4 常規(guī)精液分析參考值(WHO手冊，第5版)

精液量≥1.5ml;pH值≥7.2;精子濃度≥15×106/ml;精子總數(shù)≥39×106/1次射精;精子前向運(yùn)動(dòng)百分率≥32%;正常形態(tài)率≥4%;精子存活率≥58%;白細(xì)胞 ＜1 ×106/ml。