2種不同試劑檢測血清免疫球蛋白結(jié)果的可比性及偏倚評估

李海煒,李 山,秦 雪△,張紹峰,賴戰(zhàn)峰

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院 530021;2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科 530021)

2種不同試劑檢測血清免疫球蛋白結(jié)果的可比性及偏倚評估

李海煒1,李 山2,秦 雪2△,張紹峰2,賴戰(zhàn)峰2

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院 530021;2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科 530021)

目的進(jìn)行2種不同免疫球蛋白診斷試劑對血清免疫球蛋白測定結(jié)果的可比性及偏倚評估研究,為血清免疫球蛋白測定的標(biāo)準(zhǔn)化和臨床實驗室認(rèn)可提供實驗數(shù)據(jù)?方法 參考美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)的EP9A2文件,分別用執(zhí)誠試劑和優(yōu)利特試劑在HITACHI7600-010全自動生化分析儀上測定免疫球蛋白IgG?IgA和IgM,以執(zhí)誠試劑為對照組,優(yōu)利特試劑為實驗組?用線性回歸統(tǒng)計法分析對照組(Y)和實驗組(X)測定結(jié)果決定水平處的方法間誤差,以美國臨床實驗室修正法規(guī)(CLIA′88)規(guī)定的室間質(zhì)量評價允許誤差范圍的1/2為標(biāo)準(zhǔn),判斷不同試劑的臨床可接受性?結(jié)果兩種試劑對患者血清免疫球蛋白測定結(jié)果顯示,方法內(nèi)重復(fù)性良好,無離群點,除IgA在決定水平處的系統(tǒng)誤差不能被接受外,其余項目測定結(jié)果的偏差臨床可以接受?結(jié)論當(dāng)同一實驗室同一檢驗項目存在2個或以上的試劑時,應(yīng)進(jìn)行方法比對和偏差評估,判斷其臨床可接受性,以保證檢驗結(jié)果的可比性?

免疫球蛋白類;血清;試劑盒,診斷

血清免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)水平測定由于對疾病診療和療效觀察具有重要的臨床意義而愈來愈受到重視,成為臨床實驗室的常規(guī)項目[1-4],其測定結(jié)果的準(zhǔn)確性也受到廣泛重視?中國生物醫(yī)學(xué)經(jīng)過多年的發(fā)展,已有多家試劑廠家生產(chǎn)免疫球蛋白測定的試劑?不同廠家的試劑在測定免疫球蛋白時是否存在差異以及測定結(jié)果的可比性是廣受關(guān)注的問題?本文按照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)指南文件EP9-A[5]的要求對兩種不同試劑檢測免疫球蛋白結(jié)果進(jìn)行比對及偏倚的評估,現(xiàn)報道如下?

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集廣西醫(yī)科大學(xué)門診及住院患者當(dāng)日進(jìn)行免疫球蛋白檢測的血清,要求新鮮?無溶血?無黃疸?

1.2 儀器與試劑 采用日本日立公司生產(chǎn)的HITACHI7600-010全自動生化分析儀?執(zhí)誠免疫球蛋白診斷試劑來自上海執(zhí)誠生物技術(shù)有限公司,均采用免疫比濁法進(jìn)行測定,試劑批號分別為:IgG,JANK021;IgA,MAYK035;IgM,JANK012?優(yōu)利特免疫球蛋白診斷試劑來自桂林優(yōu)利特集團(tuán)有限公司,均采用免疫比濁法測定,IgG?IgA?IgM 試劑批號分別為:20110224?20110224?20110224?

1.3 方法 各選取8個患者血清分別在各濃度范圍內(nèi)不同濃度值的標(biāo)本,首先用2種試劑標(biāo)準(zhǔn)液各自進(jìn)行校準(zhǔn),再使用RANDOX特殊蛋白質(zhì)控品(試劑1?2?3批號分別為196LPC?212LPC?198LPC)進(jìn)行檢測,在控后將每例樣本隨機(jī)與常規(guī)標(biāo)本在同樣條件下測定,具體操作如下:每個樣本分裝成兩份,分別在日立7600自動生化分析儀上使用兩種不同的檢測試劑對IgG?IgA?IgM各測定2次?上海執(zhí)誠試劑長期運用于本科室7600生化分析儀,室內(nèi)質(zhì)控日間CV均小于1/3CLIA′88室間質(zhì)評允許誤差,故以執(zhí)誠試劑作為比較方法(X),優(yōu)利特試劑為實驗方法(Y),進(jìn)行方法間的比對試驗?實驗前對儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)與保養(yǎng),按常規(guī)方法進(jìn)行校準(zhǔn)和質(zhì)控,室內(nèi)質(zhì)控在控時進(jìn)行樣本測定?每個項目的檢測嚴(yán)格按廠商試劑盒的說明書進(jìn)行?2h內(nèi)測定完畢,每份樣本測定2次?其中第2次測定次序與第1次相反,中間間隔不少于2h,雙份測定取均值為比對數(shù)據(jù),連續(xù)測定5d?

表1 2種試劑檢測結(jié)果各統(tǒng)計量的計算

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 2種診斷試劑對免疫球蛋白測定結(jié)果的統(tǒng)計分析按照CLSI EP9-A2指南要求進(jìn)行分析,不采用已明確有人為誤差的結(jié)果?主要內(nèi)容包括(1)兩種試劑均值結(jié)果;(2)方法內(nèi)重復(fù)性檢查;(3)離群點檢查;(4)計算線性回歸;(5)標(biāo)準(zhǔn)誤差的計算;(6)計算系統(tǒng)誤差的估計值及評價不同試劑間的偏倚?數(shù)據(jù)錄入和統(tǒng)計分析均采用Excel 2003和SPSS13.0進(jìn)行?

2 結(jié) 果

2.1 2種試劑均值結(jié)果 采用上海執(zhí)誠免疫球蛋白診斷試劑對IgG?IgA?IgM 3個免疫球蛋白進(jìn)行測定,結(jié)果的均值分別為12.649?2.512?1.592g/L?采用桂林優(yōu)利特免疫球蛋白試劑對上述3個免疫球蛋白進(jìn)行測定,結(jié)果的均值分別為13.154?2.801?1.481g/L,見表1?2.2 方法內(nèi)重復(fù)性檢查 計算方法X和Y各2次測定值之差;Y2次測定值之差與X2次測定值之差的平均值;Y2次測定值之差的平均值;X2次測定值的標(biāo)準(zhǔn)化值;Y2次測定值的標(biāo)準(zhǔn)化值?算出X2次測定值的標(biāo)準(zhǔn)化值的均值,=,同時算出Y2次測定值的標(biāo)準(zhǔn)化值的均值,=,所得值詳見表1?以4和4作為控制限,方法X和Y測定值的標(biāo)準(zhǔn)化值均在控制限內(nèi),說明兩方法均重復(fù)性好,符合相關(guān)性實驗要求?

2.3 離群值檢查 計算X和Y之間的絕對偏差?相對偏差,

2.4 線性回歸及散點圖分析 通過將數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS13.0進(jìn)行線性回歸與散點圖分析,結(jié)果見圖1～3?由散點圖可知兩試劑免疫球蛋白測定值線性關(guān)系良好?通過線性回歸得到直線回歸方程和相關(guān)系數(shù),IgG:Y=0.21+1.024X,r=0.992;IgA:Y=0.19+1.039X,r=0.986;IgM:Y= -0.018+0.941X,r=0.981?

圖2 2種試劑IgA測定結(jié)果散點圖

圖3 2種試劑IgM測定結(jié)果散點圖

2.5 標(biāo)準(zhǔn)誤差的計算和可接受性能的評價?兩種試劑間測定結(jié)果的相關(guān)系數(shù)大于0.975,回歸統(tǒng)計的斜率和截距均可靠,可用回歸統(tǒng)計的方法計算系統(tǒng)誤差及進(jìn)行臨床可接受性偏倚分析?根據(jù)IgG?IgA和IgM的直線回歸方程,計算兩種試劑在決定水平Xc處測定結(jié)果的相對偏差[6],評估試劑的臨床可按受性能?結(jié)果見表2?

表2 2種試劑免疫球蛋白測定結(jié)果的臨床可接受性偏倚分析

3 討 論

檢驗醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展加速了生物試劑產(chǎn)業(yè)的發(fā)展?不同診斷試劑對同一項目檢測結(jié)果的可比性檢驗和偏倚評估是申請臨床醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可必不可少的內(nèi)容,檢測結(jié)果的可比性為不同種試劑間檢測結(jié)果的互認(rèn)提供了保障[7,8]?檢驗技術(shù)的不斷分支,檢測項目的不斷增多,檢驗質(zhì)量的控制變得越來越重要,IS015189文件指出:"當(dāng)同樣的檢驗應(yīng)用不同程序或設(shè)備,或在不同地點進(jìn)行,或以上各項均不同時,應(yīng)有確切機(jī)制以驗證在整個臨床適用區(qū)間內(nèi)檢驗結(jié)果的可比性?"[9]由于中國檢驗試劑的生產(chǎn)和臨床實驗室參考系統(tǒng)并不十分完善,多數(shù)實驗室按照自己的意愿和實際情況,選擇需要的儀器?試劑?質(zhì)控和操作程序等隨意組合而成的檢測系統(tǒng)?怎樣尋找這些檢測結(jié)果溯源性和可比性,是一個極大的現(xiàn)實問題[10-12]?方法學(xué)比對實驗通過自建實驗方法(試劑)與具有溯源性的比較方法(試劑)進(jìn)行方法學(xué)比對,找出兩種檢測結(jié)果間的總偏差是否可以被接受,間接保證了自建方法(試劑)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確

性[13-15]?

本研究通過用CLSI的標(biāo)準(zhǔn)化文件 EP9A2[1]對IgG?IgA和IgM 2種試劑進(jìn)行方法比對和偏倚評估?由于CLIA′88中對IgG的可接受偏倚為25%,而對IgA和IgM的可接受偏倚標(biāo)準(zhǔn)為3S,并未給出確切數(shù)值,故分別采用兩種試劑對RANDOX特殊蛋白質(zhì)控品進(jìn)行檢測累計40d所得的標(biāo)準(zhǔn)差SD均值作為判斷標(biāo)準(zhǔn)S,其中IgA的SD為0.034,IgM的SD為0.051,1/2CLIA′88即為0.051和0.076,換算成百分比,為5.1%和7.6%?筆者發(fā)現(xiàn)除IgA外,其余項目測定結(jié)果的偏差均在可接受的范圍,即2種試劑的檢測結(jié)果基本一致?IgG在兩個不同的決定水平時兩試劑的相關(guān)性均較好?

免疫比濁測定法(immunoturbidimetry)因同時具備生化檢測的快速性和免疫反應(yīng)的特異性,可進(jìn)行血清Ig的快速?準(zhǔn)確定量,臨床實驗中應(yīng)用較廣泛[16-17]?雖然本文研究的2種試劑均使用免疫比濁法對免疫球蛋白進(jìn)行測定,但由于制作工藝?適用儀器等方面的細(xì)微差別,檢測結(jié)果不可能完全一致?同時隨著生物制劑產(chǎn)業(yè)的高速發(fā)展,實驗室可選用的生化診斷試劑也越來越多?本研究根據(jù)CLSI EP9-A相關(guān)文件,并結(jié)合臨床實際工作情況選擇新鮮病人血清樣品,使用執(zhí)誠免疫球蛋白診斷試劑和優(yōu)利特免疫球蛋白診斷試劑,對3個免疫球蛋白的檢測結(jié)果進(jìn)行比對及偏倚評估研究的結(jié)果,為不同免疫球蛋白診斷試劑的臨床應(yīng)用及可靠性提供了科學(xué)依據(jù)?

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Comparability and bias evaluation of serum immunoglobulin levels determined by two different regents

,, ,,
(1.530021,;2.,530021,)

ObjectiveTo evaluate the comparability and the bias of serum immunoglobulinResultsdetermined by two different diagnostic regents,whether the outcome of the immunoglobulin comparable to the standardization of serum immunoglobulins and clinical laboratory authorized to provide the experimental data.MethodsAccording to the NCCLS EP9-A2document,the immunoglobulin concentrations determination were carried out by HITACHI7600-010automatic biochemical analyzer with zhicheng regent and youlite regent respectively,the control group was zhicheng reagent,the experimental group was youlite reagent.By linear regression analysis method(Y)and comparison(X)determined the relative mean Office deviation or medicine department decided to approach the level of inter-error in order to amend legislation in the U.S.clinical laboratory(CLIA′88)provides quality assessment of the permissible error range of 1/2as the standard,a different detection regent to determine the clinical acceptability.Results

Two types of immunoglobulin diagnostic regents showed that,there were not existence outlier.Detection regents in addition to the IgAResultsand comparison between the error or the mean relative deviation of the department can not be accepted,the remaining items of the deviation of clinical measurements is acceptable.ConclusionWhen the same laboratory the same tests over the existence of two detection regents,should be carried out and bias than on assessment,to determine its clinical acceptability,in order to ensure comparability of testResults.

immunoglobulins;serum;reagent kits,diagnostic

10.3969/j.issn.1671-8348.2012.18.014

A

1671-8348(2012)18-1827-03

△通訊作者,Tel:13977163919;E-mail:qinxue919@163.com?

2011-12-09

2012-02-22)

?論 著?