李春來, 李偉東, 蔡寶昌
(南京中醫(yī)藥大學國家教育部中藥炮制規(guī)范化及標準化工程研究中心國家科技部中藥飲片標準化研究平臺國家中醫(yī)藥管理局中藥炮制標準重點實驗室江蘇省中藥炮制重點實驗室江蘇省中藥質量控制工程技術研究中心,江蘇南京210029)
湯劑是中醫(yī)臨床應用的最主要的劑型,其療效確切,適用范圍廣泛,最能反映中醫(yī)整體觀念與辨證論治的特色。而湯劑煎煮作為中藥應用于臨床的最終環(huán)節(jié),其正確與否,直接關乎中藥的療效與用藥安全。明代醫(yī)家李時珍認為:“凡服湯藥,雖品物專精,修治如法,而煎藥者魯莽造次,水火不良,火候失度,則藥亦無功”;清代醫(yī)家徐靈胎亦講:“煎藥之法最宜深講,藥之效與不效,全在乎此”。可見湯劑煎煮自古以來就很受重視。
目前,中藥從種植,藥品的非臨床研究和臨床試驗研究,生產加工再到調配都有著各自一整套完整的質量控制體系進行監(jiān)管,唯有湯劑煎煮環(huán)節(jié)缺少相應完備的標準操作規(guī)程,導致患者用藥和實驗研究都有很大的隨意性。針對湯劑煎煮過程影響因素的多樣性,采用多因素、多水平優(yōu)選工藝參數,確立最優(yōu)化的湯劑煎煮工藝,進行多層次、多指標、綜合性地評價中藥湯劑煎煮質量;針對先煎、后下、另煎等特殊要求的中藥飲片,結合所在方劑,研究制定出各自規(guī)范化操作規(guī)程,最終制定出臨床安全、有效、可控、質量穩(wěn)定且科學合理的標準湯劑。標準湯劑的建立在臨床實踐與研究,中藥復方研究的規(guī)范化和標準化,中藥復方各學科間的相互聯(lián)系,以及中藥新藥評價等方面都將有著重要的地位和作用[1]。
2.1 傳統(tǒng)經驗煎煮法 傳統(tǒng)的煎煮器具以砂鍋,陶器為主,藥材煎煮之前先浸泡半小時左右,夏天稍短冬天稍長,加水量以第一煎加水超過藥面3~5 cm為度,第二煎超過藥面1~2 cm。一般煎煮兩次,滋補藥煎煮三次。煎煮時間沒有精確要求,一般根據所加溶媒量和煎取量來控制時間,多數湯劑煎至原體積的1/3~1/2,部分藥物還根據方中藥物的煎煮程度來控制時間,如白虎湯,竹葉石膏湯以“煮米熟”為度[2]。需要特殊煎煮的藥材,骨貝石類等質地堅硬和有毒中藥要先煎,芳香和清解類藥后下,貴重藥材另煎兌服或沖服,質地輕浮或黏性強或帶有刺激咽喉的毛絨的中藥要包煎。
2.2 醫(yī)療機構煎煮方法 衛(wèi)生部、國家中醫(yī)藥管理局下發(fā)的關于醫(yī)療機構中藥煎藥室管理規(guī)范中對煎藥的操作方法做了較為詳細的規(guī)定。浸泡時間一般不少于30 min。煎煮開始時的用水高度一般以浸過藥面2~5 cm為宜,花、草類藥物或煎煮時間較長的應當酌量加水。每劑藥一般煎煮兩次,將兩煎藥汁混合后再分裝。煎煮時間應當根據方劑的功能主治和藥物的功效確定。一般藥物煮沸后再煎煮20~30 min;解表類、清熱類、芳香類藥物不宜久煎,煮沸后再煎煮15~20 min;滋補藥物先用武火煮沸后,改用文火慢煎約40~60 min。藥劑第二煎的煎煮時間應當比第一煎的時間略縮短。煎藥過程中要攪拌藥料2~3次。攪拌藥料的用具應當以陶瓷、不銹鋼、銅等材料制作的棍棒為宜,攪拌完一藥料后應當清洗再攪拌下一藥料。凡注明有先煎、后下、另煎、烊化、包煎、煎湯代水等特殊要求的中藥飲片,應當按照要求或醫(yī)囑操作。
2.3 日本標準湯劑 日本標準湯劑的煎煮方法,根據日本藥審2第120號通知:有關醫(yī)療用漢方制劑的管理,原則上是要以各處方單位為基礎進行設定,概括為取處方1日量的生藥材,加20倍藥材質量的水,加熱煎煮30 min以上,過濾,所得濾液為加水質量的一半,以此方法煎煮得到標準湯劑。馬躍平和Chiang H M等均采用了此種煎煮方法[3-4]。
三種方法相互比較,我們可以看出:傳統(tǒng)經驗和醫(yī)療機構煎煮方法相似,醫(yī)療機構煎煮方法是在傳統(tǒng)經驗基礎上對部分工藝進行了規(guī)范化,操作方法相對來講比較詳細,但其工藝不夠穩(wěn)定,工藝參數只有一個范圍,各項工藝沒有說明必要性及相對重要性,沒有質量控制的項目。而日本標準湯劑的煎煮方法比較程式化,所有復方都按照同樣的煎煮工藝,不符合中醫(yī)用藥整體觀和辨證論治的特點,最終將影響復方療效,優(yōu)點是工藝參數穩(wěn)定精確,加水質量大可保證有效成分煎出,最后將藥液定容到一定體積便于進行質量控制。因此我們提出建立一種標準湯劑,該標準湯劑既要體現(xiàn)中醫(yī)用藥的特點,又可以對各項煎煮工藝進行精確控制,并能通過相應的指標進行質量評價。
3.1 處方考證和規(guī)范化 首先,應進行古文獻研究,對古方中藥材的品種和炮制規(guī)格進行考證,確定道地藥材和炮制規(guī)格并規(guī)范化。對于古方中藥材的用量,應根據最新的考證,將古方用量換算成現(xiàn)代用量,如《傷寒論》中方藥劑量的折算,關于度、量制單位折算考證的結果基本一致,即每升約合200 mL,1尺約合23 cm,丘光明等根據考證將東漢時期一斤暫定為222 g,一兩合13.75g[5]。仝小林等對《傷寒論》方劑中非計量單位的藥物質量進行現(xiàn)代實測研究,發(fā)現(xiàn)經方用藥劑量都很大[6]。古代煎煮的判斷標準很多都是根據經驗而來,如對于煎煮時間的判定,有以步行的速度與路程來估計時間的,如“如人行五、六里”,有以“一食頃”、“一炊久”等,應對這些原始,模糊的判斷標準進行規(guī)范化。對于煎煮用水,能保證所用水的流動,新鮮和潔凈要求即可,而古方中對有些煎煮用水的要求不盡合理,如仲景所載甘瀾水做法為:“取水二斗,置大盆內,以杓揚之,水上有珠子五六千顆相逐,取用之”。條件苛刻,操作繁瑣難以實現(xiàn)。
3.2 煎煮工藝的優(yōu)選
3.2.1 煎煮器具 歷代醫(yī)家對煎煮器具的選用均很重視,如陶弘景說“溫湯忌用鐵器”,李時珍講“煎藥并忌用銅鐵器,宜銀器,瓦罐”。現(xiàn)代也認為煎煮器具首選砂鍋,其次可用搪瓷鍋、不銹鋼鍋,不能用鐵鍋、鋁鍋和銅鍋。砂鍋類器具多由白泥(或黃泥)等硅酸鹽類物質經塑形后,高溫燒制而成,主要含二氧化硅,性質穩(wěn)定且導熱均勻,能較好滿足中藥湯劑的煎煮要求。若選用搪瓷鍋或不銹鋼鍋,孔偉認為其含有的金屬元素,在長時間煎煮過程中可能與藥物中的某些成分發(fā)生化學反應,降低有效成分的含量甚至產生有毒成分,從而降低藥效并產生毒副作用[7]。關于釉層或不銹鋼表層會不會與湯劑發(fā)生反應,以及若發(fā)生反應什么成分參與的反應,應通過實驗研究進行說明。銅鐵鋁鍋,因其材料金屬活性較強,會與中藥中的成分發(fā)生化學反應并引起色澤和氣味的改變,輕則降低藥物效能,重則產生有害人體的新物質。蔣忠妙等通過對常用中藥100種進行實驗發(fā)現(xiàn),100種中藥煎劑能與FeCl3試液產生沉淀的有69種,占69%。含大量鞣質的中藥煎劑產生的沉淀多為黑色,且色澤混濁;含生物堿、苷類、揮發(fā)油、有機酸為主的藥材也會不同性狀的沉淀。礦物藥、動物藥因其成分相對單一,幾乎不見與FeCl3試液反應[8]。
3.2.2 藥材浸泡 大多數中藥飲片為干品,有一定的體積和厚度,在煎煮前需放置容器內進行冷水浸泡,以使藥物的表面濕潤、變軟、植物細胞膨脹,使藥物有效成分部分溶出,在組織內產生滲透壓而擴散到組織細胞外部水中,同時可避免在加熱煎煮時藥材組織內所含蛋白質固化、淀粉糊化而影響藥物有效成分的煎出,從而對臨床效果產生影響[9]。汪鳴鳳等以藥液顏色,滋味和浸膏得率為指標,對瀉白散的不同浸泡時間進行研究,發(fā)現(xiàn)未浸泡而直接加冷水煎煮的瀉白散煎出率為9.4684%;經過不同時間浸泡處理的瀉白散煎出率均比未浸泡的高,最大的煎出率為13.5516%[10]。表明浸泡對提高湯劑的煎煮效果有很大影響。對于浸泡時間未見詳細表述,5~10 min至1 h均有論述。因此應以中藥飲片的質地和性味功效為參考,對浸泡時間進行實驗研究,給出一個明確的表述。
3.2.3 加水體積 加水體積的多少,對湯劑的質量有著舉足輕重的影響。加水體積過少會造成藥物的有效成分溶出不完全,無法起到治療效果,甚至有效成分可因局部高熱而被破壞;加水體積過多,雖可增加有效成分的溶出體積,但湯液過多不宜病人服用[11]。目前關于湯劑加水體積的說法,王竹蘭總結有以下幾種方法[12]:(1)傳統(tǒng)經驗加水法,第一煎加水高度以高出藥面3~5 cm為度,第二煎加水高度可超過藥渣表面1~2 cm。(2)以每克中藥加水約10 mL計算,總水體積的70%加到第一煎中,30%加到第二煎中。(3)量器加水法,解表劑、一般藥劑、滋補劑第一煎的加水體積分別為400~600、500~700、700~900 mL;第二煎加水體積分別為280 ~300、300 ~350、400 ~500 mL[13]。(4)按公式計算加水法,根據藥材的吸水性、煎煮時間、每分鐘的蒸發(fā)質量及預煎取質量計算加水質量,根據實驗結果擬定的加水質量公式為:第一煎加水質量=藥材質質量×吸水系數+煎煮時間×每分鐘蒸發(fā)質量+藥液得質量;第二煎加水質量=煎煮時間×蒸發(fā)質量 +得質量[14]。王竹蘭等[15]又對《傷寒論》中采用標準度量衡單位的藥物劑量進行折算,對非標準度量衡單位用量的藥物則結合相關實物測量值確定其用量,初步探討了《傷寒論》中88首湯劑的加水體積與劑量的關系,結果顯示,有63首方加水體積(mL)/劑量(g)的比值在 5 ~10,約占 71.6%;結合現(xiàn)代煎藥特點,認為《傷寒論》中煎藥方法在現(xiàn)今條件下具有實際可操作性。筆者認為,在標準制定時,可以參考公式法和王竹蘭的研究成果進行實驗研究,確定最佳加水體積。
3.2.4 煎煮時間 各類復方煎煮時間應有所不同,以保證煎出適量的有效成分和保留有效成分。李時珍《本草綱目》講:“若發(fā)汗藥,必用緊火,溫服。攻下藥,亦用緊火煎熟,下硝黃再煎,溫服。補中藥,宜慢火,溫服,陰寒急病,亦宜緊火急煎服之”。現(xiàn)代研究也認為,芳香化濕、行氣、解表類藥多含揮發(fā)油,宜用武火快煎,使揮發(fā)性成分溶出;滋補類藥,多含蛋白質,多肽,黏液質類大分子成分,不易溶出,升溫過快又容易產生“糊化”現(xiàn)象,不利于有效成分溶出,應文火慢煎。有學者認為:滋補類藥,第一煎為40~50 min,二煎、三煎均可用時30~40 min;芳香化濕、行氣、解表類藥第一煎10~15 min,二煎5~10 min;一般藥物,第一煎應為15~20 min,第二煎10~15 min[7]。煎煮時間不同,復方中有效成分的提取率及功效也會有所差別。劉亞嫻等通過考察銀翹散在不同煎煮時間下對致熱大鼠體溫及下丘腦cAMP含量的影響,發(fā)現(xiàn)銀翹散的解熱效果以煮沸后3、6 min為優(yōu);且可降低發(fā)熱大鼠下丘腦組織中cAMP 的含量,效果也以煮沸后3、6 min 為優(yōu)[16];王穎等以揮發(fā)油、浸出物和黃芩苷為指標,考察九味羌活湯在一煎、二煎中的煎煮時間,發(fā)現(xiàn)一煎中,煎煮20~30 min時,含揮發(fā)油量相對較高,浸出物和黃芩苷的含有量隨著煎煮時間的延長呈上升趨勢。在二煎中,30 min時含揮發(fā)油量最高,同時浸出物和黃芩苷的含有量相對較高[17]。
3.2.5 特殊煎煮 先煎:礦石、貝殼、角甲類、有毒藥均需先煎,以增加藥物有效成分的溶出或降低藥物的毒性,增加安全性和有效性。一般礦石、貝殼、角甲類要打碎成顆粒或粗粉先煎至少30 min,有毒藥材必須先煎1~2 h;但是藥物有溶于水與不溶于水之分,對于不溶于水的藥物應先碾成碎末。有研究表明,附子先煎可以降低復方中的烏頭堿的含量[18];但對于礦物藥是否需要先煎,有學者認為礦物藥不需要先煎[19-20],對于礦物藥是否需要先煎以及先煎時間還需要通過實驗進行研究。
后下:氣味芳香含揮發(fā)性成分的藥物或久煎易破壞有效成分的中藥飲片需后下。在頭煎煎好前5~10 min內加入煎煮。如大黃中瀉下的蒽醌類成分對熱不穩(wěn)定,久煎生成鞣質類成分,所以宜于湯劑煎好前10 min后下[18]。因此,對于藥物是否需要后下及后下時間點也需要考察。
包煎:花粉類、細小種子類、中藥粉散劑等質地輕浮而易漂浮于水面,需包煎;含淀粉、黏液質較多的種子類藥物,易使鍋底糊化亦要包煎;附生絨毛的藥劑,為避免絨毛脫落混入藥液刺激咽喉也要包煎。耿花娥等對中藥湯劑中需要包煎的藥物,以煎出物干質量為指標,采用不同裝量的方法進行系統(tǒng)實驗,發(fā)現(xiàn)裝量不同,煎出效果也不同,并對包煎的必要性提出了新的看法[21]。
烊化和沖服:烊化是指某些膠類藥物及黏性大而易溶的藥物,為避免入煎粘鍋或黏附其他藥物影響煎煮,將飲片置鍋內加水適量,加熱融化或隔水燉化后,再兌入群藥煎液中同服。某些貴重藥,用量較輕,為防止散失,可研成細粉,用溫開水或復方煎液沖服。王祥領提出了對沖服、烊化類中藥的炮制改進建議,以充分保證湯劑的質量[22]。
另煎兌服:為了防止羚羊角、人參等一些藥物的有效成分煎出不完全,需將飲片單獨煎煮30~40 min后,藥渣入群藥同煎,藥液兌入群藥液中同服,減少不必要的損失。
3.3 標準湯劑質量標準的建立 湯劑所含成分多而復雜,無機物和有機物,高分子化合物和低分子化合物,強極性、弱極性和非極性物質等構成一個復雜的系統(tǒng)。因此其質量標準的建立應依托先進技術,采用多種指標和手段對湯劑進行質量控制。
3.3.1 多種有效成分或指標成分同時測定 湯劑成分復雜,采用其中的某一有效成分或指標成分,進行質量控制難以保證復方煎煮的質量,應建立多種有效成分或指標成分的同時測定方法,提高對湯劑質量的控制水平。有效成分或指標成分選擇時,要符合中藥復方用藥特點,重點選擇君藥和臣藥的成分;復方中含有的有毒成分則必須列入定量測定的范圍之內,保證用藥的安全性;結合湯劑煎煮以水為溶媒的特點,適當選擇水溶性成分為指標。通過建立多種成分定量測定的方法,構建多指標測定體系,實現(xiàn)對湯劑煎煮的質量控制。多種成分同時測定在中藥飲片和復方制劑方面已應用成熟[23-24],可借鑒。
3.3.2 指紋圖譜 中藥色譜指紋圖譜是一種綜合的,可量化的色譜鑒定手段。借以鑒別真?zhèn)危u價原料藥材,半成品和成品質量均一性和穩(wěn)定性。其基本屬性是“整體性”和“模糊性”[25]。中藥指紋圖譜應用于中藥物質群的質量控制已成共識,日本漢方藥主要生產企業(yè)在20世紀80年代就已經在企業(yè)內部采用高效液相色譜控制質量。他們把傳統(tǒng)方劑采用地道藥材,按飲片配方煎煮得到的煎汁作為標準指紋圖譜[26],國家藥品監(jiān)督管理局也已對中藥注射液提出了建立指紋圖譜的要求,已在一些產品上面得到應用[27-28]。因此,采用指紋圖譜技術也可以對湯劑煎煮很好的進行質量控制。
3.3.3 浸膏得率 浸膏得率可以反映湯劑在煎煮過程中成分的煎出量,可參照2010版藥典浸出物測定法項下的熱浸法進行操作[29]附錄62,通過實驗制定一個合理的浸出物參考范圍,用以對湯劑煎煮進行質量控制。
3.3.4 相對密度 湯劑在煎煮過程中,在滲透壓的作用下,藥材中的成分不斷從細胞中轉移到水液中,不同的煎煮工藝,水煎液中的成分含量和種類會有差異,會在水煎液的相對密度上間接表現(xiàn)出來,所以水煎液的相對密度可以反映湯劑煎煮的質量。其操作方法可參照2010版藥典中的相對密度測定法[30]附錄41。
3.3.5 色澤和氣味 色澤和氣味作為最直接的感官感受,可以通過對藥液的顏色,香氣和滋味進行性狀描述,判斷煎液的質量優(yōu)劣。比如,用鐵器煎煮,鐵和藥材中的鞣質生成鞣酸鐵,使湯液色澤加深,與黃酮類生成難溶性絡合物,與有機酸生成鹽類均可影響湯劑療效,長時間煎煮會給藥液帶來鐵銹味[30]。
3.3.6 主要藥效學 根據復方功效尋找臨床對應的主要疾病,通過建立動物模型,以藥效學指標對湯劑煎煮質量進行評價。
4.1 在具體研究中要保證藥材來源的道地性,保證飲片的粒度和炮制工藝穩(wěn)定,在研究中應該一次性將所需藥材備齊,保證實驗的穩(wěn)定性和可重復性。
4.2 在醫(yī)療機構中應將所需的煎煮工藝和參數附在處方或者藥袋上,并向患者說明。
4.3 質量標準的建立時,不同處方相同的成分應采用相同的檢測條件,樣品處理方法也應應保持一致。
4.4 要注意新技術和新方法的應用,比如紅外光譜在優(yōu)選中藥復方煎煮時間方面的應用,ICP-AES在煎煮前后和過程中元素的測定在質量控制方面的應用,LC-MS在中藥有效成分同時定量測定方面的應用。
4.5 湯液過濾時,應使藥渣內藥液殘留質量減至最少,一般采用醫(yī)用紗布四層過濾。但是過濾之前紗布的干濕程度及紗布的大小也會對水體積有影響,過濾前將紗布用清水沾濕。抽濾和離心都會破壞溶液的混懸狀態(tài),尤其是含有礦物藥的復方,謹慎使用。
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