趕黃草不同溶劑提取物抑菌活性的初步探討

雷 嬌，肖 茂，朱 銳，夏靜若，楊宗琪

（1.川北醫(yī)學(xué)院 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)系，四川 南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院 臨床醫(yī)學(xué)系，四川 南充 637000；3.川北醫(yī)學(xué)院 病原中心，四川 南充 637000）

趕黃草，學(xué)名扯根菜，別名水澤蘭、水楊柳等，主要分布在華北、華東、中南及陜西、四川和貴州等地［1，2］。

趕黃草含有沒食子（GaLie acid）、槲皮素（Guercatin）、2，6－二羥基苯乙酮－4－0－β－D－吡喃葡萄糖苷（2，6－dihydroxyacetophenone－4－0－β－D－gLucside）、兩個(gè)結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步確證的化合物及豐富的黃酮類物質(zhì)［3，4］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，趕黃草性溫味甘，具有祛黃疸、利尿、活血、保肝、清熱等功效，以其為原料提取而成的肝素顆粒廣泛應(yīng)用于臨床。近幾年來，國內(nèi)外對(duì)趕黃草的化學(xué)成分及其對(duì)肝病的治療作用研究較多，但對(duì)該植物抑菌方面的作用，少有報(bào)道。本文分別采用趕黃草的水提取物及乙醇提取物對(duì)多種菌進(jìn)行體外抑菌實(shí)驗(yàn)，擬觀察趕黃草的體外抑菌活性，為臨床提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

趕黃草，采于四川古藺桂花鄉(xiāng)。供試菌種：金黃色葡萄球菌（StaphyLococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia co－Li）、枯草芽孢桿菌（BaciLLus stubtiLis）、綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa）、表皮葡萄球菌（StaphyLococcus epidermidis）、新生隱球菌（Cryptococcus neoformans）、白色念珠菌（MoniLia aLbican），皆由我校微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 方法

1.2.1 趕黃草水提取法［5］

取趕黃草10g，加適量蒸餾水浸泡30min后加熱煮沸，再用文火加熱30min，過濾得第1次水提取物，將濾渣用同樣方法得到第2次、第3次水提取物，合并3次濾液，再濃縮至10mL，得到趕黃草水提取物（即每毫升藥液含1g干藥）。

1.2.2 趕黃草乙醇提取法［6］

取趕黃草10g，共4份，分別置于500mL圓底燒瓶中，然后加適量30%、50%、70%和90%乙醇浸泡30min后，100℃加熱30min后過濾。藥渣再加適量同濃度乙醇溶液，100℃加熱30min后過濾。將兩次濾液合并，用文火濃縮至10mL，得到趕黃草相應(yīng)濃度乙醇提取物（即每毫升藥液含1g干藥）。

1.2.3 比濁管的配制［7］

取0.5mL濃度為0.048moL／L的BacL2加到99.5mL濃度為0.18moL／L的H2SO4中配制成0.5個(gè)麥?zhǔn)蠞岫鹊谋葷峁埽ㄏ喈?dāng)于細(xì)菌數(shù)為1.5×108個(gè)／mL），密封備用。

1.2.4 菌懸液的制備［7］

將供試菌接種至固體培養(yǎng)基上，細(xì)菌37℃培養(yǎng)24h，真菌28℃培養(yǎng)48h后，用適量生理鹽水將菌落洗下。用比濁調(diào)管對(duì)比稀釋至0.5麥?zhǔn)蠞岫龋?.5×108個(gè)／mL），4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5 藥敏紙片制備

取優(yōu)質(zhì)濾紙，用打孔器制備成直徑6mm的濾紙片，置于潔凈干燥的培養(yǎng)皿中，121℃高壓蒸汽滅菌20min。無菌操作下將其分別浸在趕黃草的各種提取液及相應(yīng)提取劑中，備用。

1.2.6 藥敏試驗(yàn)［9］

無菌操作下吸取0.2mL菌懸液于瓊脂平板上（細(xì)菌用MH瓊脂平板，真菌用沙氏瓊脂平板），均勻涂布，取含藥濾紙片緊貼于平板上，每個(gè)平板貼4片，每個(gè)菌種做三組平行，另外每個(gè)菌種用含提取劑濾紙片做一份陰性對(duì)照，10min后倒置于恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)24h，真菌培養(yǎng)48h。使用十字交叉法測量抑菌圈直徑，并記錄數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

趕黃草水提取物及不同濃度乙醇提取物的體外抑菌效果見表1。

表1 趕黃草提取液的抑菌效果比較（抑菌圈直徑mm）

3 討論

現(xiàn)代藥理研究表明趕黃草有治療黃疸、水腫、經(jīng)閉、血甭、帶下、跌打損傷以及各型肝炎、膽囊炎、脂肪肝等作用［10］，對(duì)細(xì)菌與真菌的抑菌作用研究甚少。本實(shí)驗(yàn)用趕黃草的30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇提取物與水提取物，分別對(duì)白色念珠菌、新生隱球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌及表皮葡萄球菌在體外進(jìn)行抑菌效果觀察。結(jié)果如表1所示，趕黃草水提物及醇提物對(duì)綠膿桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌均有不同程度的抑制作用，對(duì)供試真菌無抑菌效果。

表1提示水與乙醇不同溶劑趕黃草提取物的抑菌活性無明顯差別；乙醇濃度與抑菌效果之間呈不均一的線性關(guān)系，隨著乙醇濃度的增高，趕黃草乙醇提取物對(duì)綠膿桿菌的抑菌活性降低，對(duì)枯草芽孢桿菌和表皮葡萄球菌的抑菌活性增強(qiáng)：30%乙醇提取物對(duì)綠膿桿菌抑菌效果最好，90%乙醇提取物對(duì)枯草芽孢桿菌和表皮葡萄球菌體外抑菌效果較好。

隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，致使多重耐藥菌株的出現(xiàn)，細(xì)菌耐藥性的問題已日益突出。中草藥以其價(jià)格低廉，毒副作用小，且很少產(chǎn)生耐藥性等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)越來越受到外界重視，中草藥的抑菌作用已受到重視。目前，對(duì)趕黃草的抑菌作用研究較少，進(jìn)一步對(duì)其抑菌機(jī)制、抑菌成分及其對(duì)更多其他菌種的抑菌活性進(jìn)行研究將具有更大的價(jià)值。

［1］中國科學(xué)院植物研究所.中國高等植物屬檢索表［M］.北京：科學(xué)出版社，1979：205.

［2］中國植物志編委會(huì).中國植物志（第二分冊(cè)）［M］.北京：科學(xué)出版社，1992：2.

［3］張旭，楊明.趕黃草有效成分的研究［J］.成都中醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，25（4）：46－47.

［4］汪洪武，任啟生，馮長根，等.趕黃草中黃酮提取方法的研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2002，37（7）：551.

［5］陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.上海：上?？萍汲霭嫔?，1996：67.

［6］鐘有添，陳玉帥，毛曉潔，等.玉米須抗菌活性的初步研究［J］.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，28（4）：477－478.

［7］高尚進(jìn)，毛艷，周漢東，等.11種中草藥對(duì)8種常見細(xì)菌的體外抑菌試驗(yàn)［J］.川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，23（5）：466－468.

［8］范家佑，郁建平，羅莉斯，等.馬尾松葉提取物的抑菌活性研究［J］.山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2010，29（3）：279－282.

［9］向秋玲.帖覓菜不同溶劑提取物抑菌作用的研究［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，15（4）：360－362.

［10］宋麗，臧志和，廖洪利，等.趕黃草的研究進(jìn)展［J］.西南軍醫(yī)，2007，9（2）：87－88.