胃實(shí)熱證大鼠模型舌象診斷的建立及評價*

官宗華 宋捷民 張世亮 丁曉越

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053）

胃實(shí)熱證是中醫(yī)臨床常見證型，臨床表現(xiàn)為胃脘灼痛，拒按，渴喜冷飲，或消谷善饑，或見口臭，或牙齦腫痛潰爛，牙齒出血，大便秘結(jié)，小便短黃，舌紅苔黃，脈滑數(shù)。此證多因過食辛辣溫燥之品，以致胃火過旺而成。本研究應(yīng)用病證結(jié)合理論，將胃實(shí)熱證的病與代表性病因嗜食辛辣相結(jié)合進(jìn)行模型的實(shí)驗(yàn)研究，依據(jù)舌象在胃實(shí)熱證診斷中占有十分重要的地位這一特點(diǎn)，參照相關(guān)研究進(jìn)展［1-4］設(shè)定相關(guān)檢測指標(biāo)，建立和評價胃實(shí)熱證大鼠病理模型及舌象診斷。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級wistar大鼠，20只，體質(zhì)量220～240 g，雌性，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物合格證號SYXK（浙）2008-0115。

1.2 藥物與試劑 吲哚美辛，石藥集團(tuán)，批號：20120328；水合氯醛，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號：20101218；干辣椒粉；白酒（體積分?jǐn)?shù) 50%）；白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-8（IL-8）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）、內(nèi)皮素－1（ET-1）、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、前列腺素 E2（PGE2）酶聯(lián)免疫試劑盒均購于杭州弘健生物科技有限公司，批號：201203。

1.3 儀器 HC-3018型高速離心機(jī)，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；MK3型酶標(biāo)儀，塞默爾飛世爾儀器有限公司。

1.4 造模方法 將大鼠隨機(jī)分為空白組、胃實(shí)熱組，每組10只。胃實(shí)熱組大鼠腹腔注射吲哚美辛（溶于5%NaHCO3液中），10 mg/kg；給予辣椒、白酒混合液10 mL/kg（干辣椒粉0.1 g/mL，白酒0.1 mL/mL）灌胃，每日2次?？瞻捉M灌胃等量的生理鹽水。連續(xù)1周。

1.5 標(biāo)本采集與檢測

1.5.1 舌象取材方法 在足夠光照強(qiáng)度的固定光源下，固定拍攝環(huán)境、光照強(qiáng)度，固定焦距，盡量減少人為因素對照片色差的干擾。按50 mg/kg腹腔注射10%水合氯醛，待大鼠麻醉后，用鑷子輕輕夾住大鼠舌尖從左輕輕拉出，露出舌根部，使整個舌體與大鼠軀干成直線或小于15°的夾角。用photoshop圖片處理軟件，將大鼠舌象照片裁剪成980×490 px大小圖片，分別設(shè)置10條水平與垂直參考線，隨機(jī)選取6個x與y坐標(biāo)交點(diǎn)記錄該點(diǎn)紅色、綠色、藍(lán)色成分?jǐn)?shù)值。

1.5.2 酶聯(lián)免疫法檢測血清中 IL-6、IL-8、IL-10、ET-1、cAMP、PGE2含量 麻醉大鼠后，腹主動脈取血，分離血清待測。參照試劑盒說明，利用雙抗體夾心法，往抗體包被微孔板中加入待測樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，與HRP標(biāo)記的羊抗鼠抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中各個含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)通過SPSS17.0軟件包用單因素方差分析LSD或S-N-K法進(jìn)行比較檢驗(yàn)，用（±s）表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般狀態(tài) 見表1。胃實(shí)熱證大鼠與空白組大鼠比較口唇、耳朵、尾巴逐漸變紅，呼吸逐漸變快，毛色不榮、背毛無光澤，分散，反應(yīng)先過敏后遲鈍，活動先活躍后靜臥不動，活動量減少，體質(zhì)量逐漸減輕，消瘦明顯，口鼻干燥，分泌物減少，食量減少，便質(zhì)黑干硬。

表1 胃實(shí)熱證大鼠體質(zhì)量變化（g，±s）

表1 胃實(shí)熱證大鼠體質(zhì)量變化（g，±s）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。 下同。

第5日 第7日胃實(shí)熱組 209.83±12.30* 208.83±16.70*第1日 第3日227.70±17.63 215.44±13.51*空白組 10 229.13±11.05 229.00±11.36 228.63±11.66 229.00±11.81組 別n 10

2.2 舌象變化 見表2。與空白組相比，胃實(shí)熱證大鼠舌色呈紅色至絳紅色，部分大鼠舌體干燥，稍缺彈性，部分大鼠舌表面無苔。在舌象分析圖片中，胃實(shí)熱證組大鼠與空白組相比舌質(zhì)多紅，暗。通過圖片分析軟件對其色差進(jìn)行統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，胃實(shí)熱證大鼠的舌象與空白組大鼠的舌象在紅色、綠色、藍(lán)色成分上有明顯差異（P＜0.05），特別是紅色成分差別更加顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

表2 胃實(shí)熱證大鼠舌象變化（±s）

表2 胃實(shí)熱證大鼠舌象變化（±s）

組 別 綠色 藍(lán)色胃實(shí)熱組 83.23±1.57* 89.24±19.56*空白組 89.82±3.95 99.95±3.84紅色10 105.59±8.32**10 115.06±3.02 n

2.3 血清生化指標(biāo)的改變 見表3～表4。胃實(shí)熱證大鼠血清IL-6、IL-8、IL-10 與空白組相比含量明顯增加，cAMP、PGE2的含量減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或0.01）。

表 3 胃實(shí)熱證大鼠血清 IL-6、IL-8、IL-10、ET-1 含量變化（ng/L，±s）

表 3 胃實(shí)熱證大鼠血清 IL-6、IL-8、IL-10、ET-1 含量變化（ng/L，±s）

IL-10 ET-1胃實(shí)熱組 16.33±1.17** 51.30±3.18**IL-6 IL-8 77.29±3.43* 368.15±33.33*空白組 10 72.98±1.94 280.65±39.13 14.64±0.41 46.31±0.95組 別n 10

表4 胃實(shí)熱證大鼠血清cAMP、PGE2含量變化（±s）

表4 胃實(shí)熱證大鼠血清cAMP、PGE2含量變化（±s）

PGE2（ng/L）胃實(shí)熱組 62.50±10.63**空白組 103.19±28.57組 別cAMP（nmol/L）10 3.74±0.18**10 4.10±0.16 n

3 討 論

中醫(yī)動物模型必須符合中醫(yī)特色。中醫(yī)通過望、聞、問、切四診分析疾病，一般認(rèn)為動物與小兒一樣，同為啞科，以觀為主，所以在建立模型時參考并移用中獸醫(yī)的診斷技術(shù)，盡可能對大鼠的呼吸、聞叫、體溫、大小便、皮毛、舌象進(jìn)行觀察。舌診是觀察患者舌質(zhì)和舌苔的變化以診察疾病的方法，是望診的重要內(nèi)容。臨床實(shí)踐證明，在疾病的發(fā)展過程中，舌的變化迅速而又鮮明，凡臟腑的虛實(shí)、氣血的盛衰、津液的盈虧、病情的淺深、預(yù)后的好壞，都能較為客觀地從舌象上反映出來［5］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)胃實(shí)熱證大鼠的舌象與空白組大鼠的舌象比較在紅色、綠色、藍(lán)色成分有明顯差異，而紅色成分差異更加顯著。胃實(shí)熱證大鼠舌象較正常紅，符合中醫(yī)診斷學(xué)中紅舌主實(shí)熱的臨床意義，病機(jī)是由于血得熱循行加速，舌體脈絡(luò)充盈；或因陰液虧乏，虛火上炎，故舌色鮮紅。而綠色、藍(lán)色成分出現(xiàn)明顯差異，使舌象略微呈現(xiàn)暗紅色，成絳舌，絳舌多由紅舌進(jìn)一步發(fā)展而成。絳舌主里熱亢盛，陰虛火旺。本實(shí)驗(yàn)則因久食辛辣之物，使胃有實(shí)熱及傷其陰血而致，所以除絳舌外，舌頭稍缺彈性，部分舌體表面無苔。

由此可見本實(shí)驗(yàn)舌象診斷是符合《中醫(yī)診斷學(xué)》［5］舌象特征與臨床意義。大鼠其他相應(yīng)的體征變化，如口渴、口鼻干燥，分泌物減少，便質(zhì)黑干硬?？诖?、耳朵、尾巴逐漸變紅，呼吸逐漸變快，毛發(fā)稀疏凌亂、喜歡仰臥，個體分散，躁動、興奮等也較符合熱證的診斷依據(jù)。

本研究應(yīng)用“病證結(jié)合”理論，采用腹腔注射吲哚美辛與灌胃辣椒白酒相結(jié)合建立胃實(shí)熱證大鼠模型。吲哚美辛和白酒均可抑制胃黏膜環(huán)氧化酶，使前列腺素合成減少，致胃黏膜細(xì)胞屏障機(jī)能減弱，胃酸增高而誘發(fā)潰瘍［6-7］。辣椒和白酒都屬辛熱之品，且胃實(shí)熱證的產(chǎn)生也與長期食用二者關(guān)系密切，《癥因脈治·胃脘痛》云“飲食不節(jié)，傷其胃口……血分素?zé)?，又喜辛辣之物，以傷其陰血，則停積于中，而成死血之痛”；有學(xué)者［8］認(rèn)為食用花椒、辣椒、生蔥、生蒜、芥末等香料及調(diào)味品，刺激胃黏膜，形成急性或慢性損傷。炎性相關(guān)生化指標(biāo)IL-6、IL-8、IL-10及血管內(nèi)皮損傷因子ET-1含量明顯增加，神經(jīng)內(nèi)分泌激素cAMP及前列腺物質(zhì)PGE2含量減少，符合胃實(shí)熱證胃黏膜主要以黏膜充血、潰瘍形成、炎性損傷的特征。因此本實(shí)驗(yàn)采用熱因素結(jié)合腹腔注射吲哚美辛成功建立大鼠胃實(shí)熱證病理模型。

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