黃褐毛忍冬化學(xué)成分及先導(dǎo)物的糖基化研究＊

毛午佳，賈憲生，董登祥，劉 彬

(貴陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 貴陽 550081)

忍冬屬植物黃褐毛忍冬Lonicera fulvotoinentosyHsu et S．C．Cheng收載于2011年版《中國藥典(一部)》，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，用于臃腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、溫?zé)岚l(fā)病[1]。黃褐毛忍冬含有多種皂苷類成分[2－4]，皂苷類具有保肝、降血脂、抗炎等生理活性，α－常春藤皂苷是保肝作用的主要成分[5－7]，并以常春藤皂苷為苷元形成多種皂苷。隨著糖化學(xué)的發(fā)展，天然產(chǎn)物的糖基化修飾已成為研發(fā)新糖藥物的有效途徑之一。筆者從黃褐毛忍冬中提取了皂苷元，制備了乙?；锖汪然谆铮b定了從石油醚提取物分離得到的三十烷醇和巖白菜素，其中巖白菜素是首次從該植物中得到。

1 儀器與試藥

1730型傅里葉變換光譜儀;DX－300型質(zhì)譜儀，INOVA－400型超導(dǎo)核磁共振波譜儀。黃褐毛忍冬于2010年5月購于貴陽，經(jīng)鑒定為忍冬屬植物黃褐毛忍冬Lonicera fulvotoinentosyHsu et S．C．Cheng;三十烷醇對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為1509－200001);巖白菜素(中國藥品生物制品檢定所，批號為742－200111);薄層色譜硅膠G和柱層析硅膠H(青島海洋化工廠);乙醇為化學(xué)純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 提取與分離

黃褐毛忍冬干燥花蕾粉碎后取1 kg，用75%乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓回收乙醇，殘留物揮盡乙醇后加水稀釋，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚提取物20 g，乙酸乙酯提取物42 g，正丁醇提取物96．3 g。石油醚提取物經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚、乙酸乙酯梯度洗脫，得到2個(gè)部分，第一部分經(jīng)乙酸乙酯重結(jié)晶后得到化合物Ⅰ，第二部分經(jīng)甲醇重結(jié)晶得化合物Ⅱ。取正丁醇提取物20 g，加適量甲醇溶解，加入丙酮，產(chǎn)生大量沉淀，過濾，得總皂苷6．4 g。

2．2 總皂苷的水解

取總皂苷加5%HCl水溶液，水浴中反應(yīng)4 h，冷卻，過濾，沉淀用水洗至中性，所得皂苷元經(jīng)硅膠H行柱層析，以氯仿－甲醇(9∶1)洗脫，回收溶劑，殘留物用甲醇結(jié)晶，得白色短柱狀結(jié)晶，為化合物Ⅲ。

2．3 鑒定

化合物Ⅰ:化合物Ⅰ為白色蠟狀物，易溶于氯仿，不溶于水。與三十烷醇標(biāo)準(zhǔn)品的薄層色譜Rf值相同(兩種展開劑)，斑點(diǎn)顏色相同。與三十烷醇標(biāo)準(zhǔn)品的IR重疊光譜圖一致，故化合物Ⅰ鑒定為三十烷醇。

化合物Ⅱ:化合物Ⅱ?yàn)榘咨Y(jié)晶，高分辨質(zhì)譜給出分子式為C14H16O9，EI－ MSm/z(%):328(M+，18．28);208(100);180(28．39);152(23．04)。IRvmax(cm－1):3 400 ～ 3 200(OH)，1 700，1 340，1 180(羰基)，1 620，1 540，860(芳環(huán))，1 235，1 130(Ar－O－R)，1 090，960，910?；衔铫蚺c巖白菜素對照品的薄層色譜，Rf值相同(兩種展開劑)，且斑點(diǎn)顏色相同，與巖白菜素的IR重疊光譜圖一致，故化合物Ⅱ鑒定為巖白菜素。

化合物Ⅲ:化合物Ⅲ為白色結(jié)晶，高分辨質(zhì)譜給出分子式為C30H48O4，Liebermann－Burchard 反應(yīng)呈陽性。IRvmax(cm－1):3 451(－ OH)，2 942(－ CH)，1 698(－ COOH)，1 464，1 387，1 303，1 268。1HNMR(C5D5N):δ5．46(1 H，m，H －12);4．20(1 H，m，H －3);4．16，3．70(1 H，d，J=11 Hz，H2 －23);3．28(1 H，m，H － 18);1．25，1．05，1．00，0．98 和 0．94(分別為 3 H，6 H，3 H，3 H，3 H，s，6×CH3)。顯示分子中AB環(huán)上有2個(gè)羥基，DE環(huán)上有C－17位羧基。13CNMR(C5D5N):δ38．98(C －1)，27．85(C －2)，73．63(C －3)，43．05(C －4)，48．89(C －5)，18．86(C －6)，33．20(C －7)，39．95(C －8)， 48．34(C －9)， 37．46(C －10)， 24．02(C －11)，122．57(C －12)，144．76(C －13)，42．20(C －14)，28．58(C －15)，24．02(C －16)，46．82(C －17)，42．20(C －18)，46．64(C －19)，31．20(C －20)，34．48(C －21)，33．20(C －22)，68．16(C －23)，13．39(C －24)，16．24(C －25)，17．76(C －26)，26．40(C －27)，180．02(C －28)，33．45(C － 29)，24．02(C － 30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]中常春藤皂苷元的數(shù)據(jù)一致，故化合物Ⅲ鑒定為常春藤皂苷元。

2．4 常春藤皂苷元衍生物的制備與鑒定

二乙?；?取常春藤皂苷元0．5 g，加入醋酐20 mL，吡啶10 mL，于室溫放置12 h，不時(shí)振搖，傾入冰水中，產(chǎn)生無色塊狀物，過濾，水洗，甲醇結(jié)晶，得白色針狀晶體。IRvmax(cm－1:2 940(－CH)，1 730，1 240(乙?；?。1HNMR(CDCl3):δ5．26(1 H，br，H －12);4．76(1 H，dd，J=6 Hz，8 Hz，H － 3);3．88，3．68(1 H，d，J=12 Hz，H2 －23);2．80(1 H，m，H －18);2．08，2．02(3 H，s，2 × －OAc);1．12，0．99，0．93，0．84 和 0．73(分別為 3 H，3 H，6 H，3 H，3 H，s，6 × CH3)。

羧基甲基化衍生物:稱取150 mg(0．33 mmol)常春藤皂苷元，置于100 mL圓底燒瓶中，加入0．61 mL(9．9 mol)碘甲烷173 mg(0．66 mol)，氟化四丁基銨23 mL，5%碳酸氫鈉和30 mL二氯甲烷，氮?dú)獗Ｗo(hù)，常溫?cái)嚢?4 h，薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)[展開劑為環(huán)己烷 － 乙酸乙酯(1 ∶1．5)，Rf=0．5]。停止反應(yīng)，用二氯甲烷萃取反應(yīng)液，收集有機(jī)相并用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮得粗產(chǎn)物。經(jīng)硅膠柱層析純化粗產(chǎn)物，洗脫劑為環(huán)己烷－乙酸乙酯(1∶1)，獲得產(chǎn)物 138．1 mg。1HNMR(CDCl3):δ5．28(1 H，s，H －12);3．73，3．44(1 H，d，J=10．4 Hz，H2 －23);3．62(3 H，s，H －28);1．12，0．95，0．92，0．89 和 0．72(分別為 3 H，3 H，3 H，6 H，3 H，s，6×CH3)。

羧基甲基化產(chǎn)物的酰化物:稱取138 mg(0．29 mmol)常春藤皂苷元的甲基化產(chǎn)物，置于100 mL圓底燒瓶中，加入2 mL(24．81 mol)吡啶和1 mL(10．61 mol)乙酸酐，氮?dú)獗Ｗo(hù)下常溫?cái)嚢?4 h，薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)停止后加入15 mL 1 mol/L HCl，用二氯甲烷萃取反應(yīng)液，收集有機(jī)相并用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮得粗產(chǎn)物。用硅膠柱層析純化粗產(chǎn)物，洗脫劑為環(huán)己烷 －乙酸乙酯(7 ∶1)，獲得產(chǎn)物 185．2 mg。1HNMR(CDCl3):δ5．31(1 H，br，H －12);4．78(1 H，m，H －3);3．88，3．69(1 H，d，J=11．4 Hz，H2 － 23);3．63(3 H，s，H － 28);2．07，2．02(分別為2 H，s，2 × OAc);1．16，0．96，0．93，0．90，0．83 和 0．72(分別為3 H，3 H，3 H，3 H，3 H，s，6 × CH3)。

3 討論

以天然產(chǎn)物常春藤皂苷元為先導(dǎo)物，進(jìn)行羧基甲基化及酰化可以增加脂溶性，有利于保護(hù)羥基和糖的進(jìn)一步引入。

致謝:貴州省天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室代測核磁共振光譜，貴州師范大學(xué)理化測試中心代測紅外光譜。

[1]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:28．

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