高效液相色譜法測(cè)定婦科消炎顆粒中芍藥苷的含量

馬涵濤 謝秀娟

婦科消炎顆粒是我院開(kāi)發(fā)的中藥新制劑，由赤芍、三棱等組成，具有活血化瘀，消炎止痛的功效，主要適用于婦科各類(lèi)炎癥等。赤芍為方中主藥，赤芍有效成分為芍藥苷。本文采用高效液相色譜法測(cè)定婦科消炎顆粒中芍藥苷的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供了快捷準(zhǔn)確的方法，獲得滿(mǎn)意的效果。

1 儀器與材料

日本島津LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測(cè)器，C-R6A處理機(jī)。芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110736-200732，供含量測(cè)定用)，婦科消炎顆粒(本院制劑室提供，批號(hào) 20110305，20110316，20110323);甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Shim-pack CLC-ODS(150 mm×6 mm)，流動(dòng)相:乙腈-水(16∶65)，檢測(cè)波長(zhǎng) 230 nm［1］，柱溫:室溫;流速:1 ml/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 芍藥苷對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成0.5 g/L溶液作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取婦科消炎顆粒5 g，研成細(xì)粉，置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱(chēng)定重量，放置過(guò)夜，超聲處理40 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 仿照供試品溶液的制備方法制得缺赤芍的陰性對(duì)照溶液。

2.3 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺赤芍的陰性對(duì)照溶液各5 μl，按以上色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，赤芍苷對(duì)照品保留時(shí)間約為9 min，陰性對(duì)照溶液在該時(shí)間無(wú)吸取峰，供試品溶液在該時(shí)間有吸取峰。

2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液2，4，6，8，10，12 ml分別置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各進(jìn)樣5 μl測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣量C為橫坐標(biāo)，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果芍藥苷在進(jìn)樣量0.2～1.2 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為A=819.05C+43.51，r=0.9999。

2.5 精密度試驗(yàn) 芍藥苷峰面積的RSD為1.3%(n=5)

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液5 μl，分別在0，1，2，4，6 h進(jìn)樣后測(cè)定，結(jié)果芍藥苷峰面積基本不變，RSD為0.97%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)20110305)5份，分別按樣品測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果平均含量為2.245 mg/g，RSD為1.2%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知芍藥苷含量的婦科消炎顆粒6份，每份1 g，分別精密加入芍藥苷對(duì)照品適量，按2.2.2項(xiàng)供試品溶液的制備方法處理，從“置100 ml錐形瓶中……”起操作，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為100.4%，RSD為1.6%。

2.9 樣品含量測(cè)定 取3個(gè)批號(hào)樣品，分別精密吸取對(duì)照品溶液與樣品溶液各5 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算含量，即得。每批樣品平均測(cè)定3次，結(jié)果含量為2.19 mg/g，RSD 為0.76%。

3 討論

經(jīng)比較甲醇-水、乙腈-磷酸二氫鉀［2］、乙腈-水［3］、甲醇-0.5 mol/L磷酸二氫鉀溶液［4］等流動(dòng)相的分離效果，結(jié)果表明本文采用的乙腈-水的分離效果較好，保留時(shí)間適當(dāng)。

分別對(duì)樣品進(jìn)行了甲醇索氏回流提取、甲醇超聲處理等探索，結(jié)果以甲醇超聲處理方法為最佳。

經(jīng)多批樣品中芍藥苷的含量測(cè)定表明，該方法快速簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，靈敏度高，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

［1］ 中國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.2005年版.一部

［2］ 于開(kāi)紅.高效液相色譜法測(cè)定偏癱康復(fù)丸中芍藥苷含量.中國(guó)藥師，2010，13(2):297.

［3］ 王曉飛，等.高效液相色譜法測(cè)定開(kāi)元顆粒中芍藥苷含量.中國(guó)藥師，2008，11(4):431.

［4］ 李水清.HPLC法測(cè)定十二太保丸中芍藥苷的量.中國(guó)藥師，2008，11(9):1078.