甜菜褐斑病菌抗藥性分子機(jī)理研究進(jìn)展

林 杰，劉 梅，吳學(xué)宏，韓成貴

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)系，北京100193）

甜菜是世界兩大糖料作物之一，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位[1]。目前我國甜菜種植主要集中在東北、華北和西北三大產(chǎn)區(qū)[2]。由甜菜尾孢菌（Cercospora beticola）引起的甜菜褐斑病是甜菜生產(chǎn)上最重要的葉部真菌病害[3－4]，致使葉片大量壞死及新葉的再生而消耗了甜菜塊根中的營養(yǎng)物質(zhì)，造成產(chǎn)量和含糖的下降[5]，病害嚴(yán)重時甚至亦可危害塊根[6]。一般年份可使甜菜塊根減產(chǎn)10%～20%，含糖率降低1～2度，嚴(yán)重時甚至造成整個田塊絕收[7]。

目前生產(chǎn)主要采用抗病品種、輪作和化學(xué)防治控制甜菜褐斑病[8-9]，但由于生產(chǎn)中不合理地使用農(nóng)藥，導(dǎo)致甜菜尾孢菌對多種殺菌劑的敏感性下降，對部分殺菌劑產(chǎn)生了較高的抗藥性，成為生產(chǎn)上亟待解決的難題[9]。

1 甜菜褐斑病化學(xué)防治的主要藥劑及作用機(jī)制

防治甜菜褐斑病的殺菌劑有保護(hù)類殺菌劑和內(nèi)吸性殺菌劑，其中保護(hù)性殺菌劑主要有二硫代氨基甲酸鹽類、有機(jī)錫類；內(nèi)吸性殺菌劑主要有苯并咪唑類、甾醇脫甲基化酶抑制劑和甲氧基丙烯酸類等[9]。

1.1 二硫代氨基甲酸鹽類殺菌劑

二硫代氨基甲酸鹽類殺菌劑為多作用位點的保護(hù)性殺菌劑，包括代森錳鋅（Mancozeb）和代森鋅（Zineb）等。藥劑在水中降解釋放出活性物質(zhì)Ethylene bisisothiocyanate sulfide（EBIS），該活性物質(zhì)在紫外線作用下可轉(zhuǎn)化為Ethylene bisisothiocyanate（EBI），EBIS和EBI均能破壞部分含巰基的酶的活性，干擾或抑制病原菌細(xì)胞質(zhì)和線粒體中6種不同生物化學(xué)途徑，從而有效地防治病害[10－11]。

1.2 有機(jī)錫類殺菌劑

有機(jī)錫類殺菌劑包括毒菌錫（Fentin-hydroxide）和薯瘟錫（Fentin-caetate）等,為線粒體呼吸抑制劑，干擾線粒體膜上電子氫氧根離子交換，抑制ATP酶活性，破壞病原菌的呼吸作用，影響孢子萌發(fā)或菌絲生長[12]。

1.3 苯并咪唑類殺菌劑

苯并咪唑類殺菌劑為第一大類內(nèi)吸性殺菌劑，包括苯菌靈（Benomyl）、多菌靈（Carbendazim）和甲基托布津（Thiophanate-methyl）等。與植物次生代謝產(chǎn)物秋水仙堿極為相似，活性基團(tuán)苯并咪唑能特異地與病原菌細(xì)胞中紡錘絲的β-微管蛋白結(jié)合，阻礙微管蛋白形成，破壞紡錘絲形成，從而干擾細(xì)胞的有絲分裂，抑制芽管分隔、延長、分生孢子的萌發(fā)和菌絲生長，達(dá)到抑菌效果[13-14]。在我國，此類藥劑用于防治甜菜褐斑病已有較長的歷史，并且有些地區(qū)目前仍然在使用。

1.4 甾醇脫甲基化酶抑制類殺菌劑

甾醇脫甲基化酶抑制類殺菌劑（C14-demethylation inhibitors of sterol biosynthesis，DMI）為甾醇-14α去甲基化酶抑制劑，即，包括氟硅唑（Flutriafol）、苯醚甲環(huán)唑（Difenconazole）、氟醚唑（Tetraconazole）和丙環(huán)唑（Propiconazole）等。甾醇類化合物如麥角甾醇、菜子甾醇等是真菌細(xì)胞膜的主要組成成分，藥劑靶標(biāo)基因為甾醇-14α去甲基化酶基因（C-14α-demethylase gene,CYP51）通過抑制麥角甾醇合成過程中2,4-二氫羊毛甾醇的脫甲基化反應(yīng)，破壞病原菌的甾醇生物合成途徑，引起真菌生長紊亂[15-18]。我國近幾年來開始大面積推廣使用氟硅唑和苯醚甲環(huán)唑等殺菌劑防治甜菜褐斑病。

1.5 甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑

甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑為線粒體呼吸抑制劑，包括肟菌酯 （Trifloxystrobin）和吡唑醚菌酯（Pyraclostrobin）等，其研發(fā)源于擔(dān)子菌如 Oudemansiella mucida （Schrad ex Fr）Hoehn和 Strobilurus tenacellus （Pers ex Fr）Singer及細(xì)菌Myxococcus fulvus等中一類天然活性產(chǎn)物β-丙烯酸酯類化合物的發(fā)現(xiàn)。1996年，先正達(dá)（Syngenta）推出了第一個商品化的丙烯酸酯類殺菌劑阿米西達(dá)（Azoxystrobin）?；钚曰鶊F(tuán)甲氧基丙烯酸（酯/酰胺）主要作用于真菌線粒體呼吸過程，與線粒體內(nèi)膜上的細(xì)胞色素復(fù)合體bc1中的細(xì)胞色素b上的Qo位點結(jié)合，阻斷了細(xì)胞色素b和細(xì)胞色素c1間的電子傳遞，破壞能量循環(huán)，抑制真菌孢子萌發(fā)或菌絲生長[19-21]。但此類藥劑在我國尚未登記用于甜菜褐斑病的防治。

2 甜菜尾孢菌抗藥性發(fā)生現(xiàn)狀

2.1 二硫代氨基甲酸鹽類殺菌劑

二硫代氨基甲酸鹽類殺菌劑作用位點多，病原菌對其不易產(chǎn)生抗藥性，是最早用于防治甜菜褐斑病的殺菌劑之一，其與有機(jī)錫殺菌劑混用防治甜菜褐斑病，能顯著地提高產(chǎn)量和含糖率[22]。1995年，Bugbee建立了用于監(jiān)測甜菜尾孢菌對代森錳鋅抗藥性的藥劑濃度5和10 μg/mL[23]。1997年美國明尼蘇達(dá)州和北達(dá)科他州田間調(diào)查沒發(fā)現(xiàn)甜菜尾孢菌對代森錳鋅的耐藥性[24]，而2000年發(fā)現(xiàn)明尼蘇達(dá)州和北達(dá)科他州大部分地區(qū)甜菜尾孢菌對5 μg/mL代森錳鋅產(chǎn)生了耐藥性[25]。隨后，土耳其亦發(fā)現(xiàn)了甜菜尾孢菌對代森錳鋅的耐藥性[26]。而我國目前沒有甜菜尾孢菌對代森錳鋅耐藥性情況的相關(guān)報道，但仍需加強(qiáng)抗性監(jiān)測。

2.2 對苯并咪唑類殺菌劑的抗藥性

苯菌靈是第一個用于甜菜褐斑病防治的內(nèi)吸性殺菌劑[9]，至今已有40多年的歷史。20世紀(jì)70年代，歐洲、北美洲等地就開始施用苯菌靈防治甜菜褐斑病并取得很好的防效，如希臘、美國北達(dá)科他和明尼蘇達(dá)分別始于1969年、1979年[27,9,3]。但由于苯并咪唑類殺菌劑作用位點單一和大面積的施用，C.beticola很快就對其產(chǎn)生了抗藥性，導(dǎo)致防治效果降低甚至完全喪失[27,9]。1973年，希臘首先報道了C.beticola對苯并咪唑類的抗藥性[27]。隨后美國、意大利、日本、印度和中國等甜菜主要種植地區(qū)均有報道[14,28-37]。C.beticola對苯并咪唑類殺菌劑抗藥性可穩(wěn)定遺傳[38,9]，如希臘自抗藥性發(fā)現(xiàn)后就沒有持續(xù)施用苯并咪唑類殺菌劑，但20多年后對多菌靈抗性頻率沒有降低反而極大地增加[9]。當(dāng)然也不能排除在其他C.beticola侵染作物或雜草上應(yīng)用所致?？剐院兔舾芯暝跓o苯菌靈情況下，離體菌絲生長、孢子萌發(fā)和活體毒力及孢子萌發(fā)等生物學(xué)特性上均沒有差異[28]，雖然苯菌靈濃度增加，如1000 μg/mL，能降低田間病害嚴(yán)重度、孢子形成及孢子活力，但大劑量施用形成極大的選擇壓力，增大田間抗性菌株的抗藥水平和抗性頻率，不利于病害的管理[39]。

β-微管蛋白基因突變是對苯并咪唑類殺菌劑抗藥性產(chǎn)生的主要原因。Davidson通過苯菌靈系列梯度抑菌試驗得到了能有效地區(qū)分抗、感菌株的苯菌靈濃度，該濃度為5 μg/mL。并通過分析C.beticola抗、感菌株的β-微管蛋白基因，發(fā)現(xiàn)β-微管蛋白基因198位密碼子GAG突變?yōu)镚CG，編碼的氨基酸由谷氨酸突變?yōu)楸彼?，?dǎo)致了C.beticola對并本咪唑類殺菌劑的高抗藥性或耐藥性的產(chǎn)生，同時發(fā)現(xiàn)C.beticola對多菌靈和乙霉威存在負(fù)交互抗藥性[40]，我們的初步結(jié)果與此一致[35]。基于抗感菌株序列差異，Obuya等設(shè)計了PCRRFLP分子檢測方法，利用限制性內(nèi)切酶Bsa I可區(qū)分C.beticola抗感菌株[41]，而我們則建立了Allele specific primers-PCR快速檢測區(qū)分C.beticola抗感菌株的方法（未發(fā)表），為檢測田間抗性菌株提供了可靠的工具。

2.3 對有機(jī)錫類殺菌劑的抗藥性

繼C.beticola對苯并咪唑類殺菌劑抗藥性產(chǎn)生后，生產(chǎn)上采用有機(jī)錫類殺菌劑如毒菌錫防治甜菜褐斑病并取得了較好的防治效果[42-43,3]，但隨后不久，希臘田間生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)C.beticola對毒菌錫產(chǎn)生了耐藥性，導(dǎo)致防效下降[44]，同時世界主要甜菜產(chǎn)區(qū)美國、意大利、土耳其等都相繼發(fā)現(xiàn)C.beticola對有機(jī)錫殺菌劑的抗藥性[23,26,42,45-46]。研究發(fā)現(xiàn)，對毒菌錫抗性的C.beticola菌株在離體情況下與野生型菌絲生長速率和菌落特征均沒有差異，但毒力存在差異，抗性菌株生存競爭力較弱，因此合理施用有機(jī)錫殺菌劑可降低抗性菌株的頻率[47]。

2.4 對甾醇脫甲基化酶抑制類殺菌劑的抗藥性

鑒于C.beticola對苯并咪唑類殺菌劑和有機(jī)錫殺菌劑的抗藥性，DMI因其對甜菜褐斑病具有良好的保護(hù)性和治療性而應(yīng)用到甜菜褐斑病的防治中[48]，如希臘于1979年開始利用DMI類殺菌劑防治甜菜褐斑病[9,49]，而美國環(huán)保局（Environmental Protection Agency，EPA）于1999年至2004年間實施了利用非登記的DMI類殺菌劑氟醚唑防治甜菜褐斑病的緊急方案，2005年氟醚唑登記防治甜菜褐斑病。隨后，腈苯唑和丙環(huán)唑于2006年登記，苯醚甲環(huán)唑和丙硫菌唑于2008年登記[3]，但由于DMI殺菌劑作用位點特異性極強(qiáng)，致使病原菌較易對其產(chǎn)生抗藥性[50]，希臘首先發(fā)現(xiàn)田間C.beticola種群對DMI類殺菌劑敏感性下降[48,51]，敏感性水平呈持續(xù)分布狀[52]，隨后在希臘發(fā)現(xiàn)C.beticola對DMI殺菌劑抗藥性菌株[43,51]，Karaoglanidis等根據(jù)菌絲生長抑制率的結(jié)果，建立1 μg/mL氟硅唑和0.05 μg/mL苯醚甲環(huán)唑的單濃度藥劑監(jiān)測田間抗感菌株頻率的方法[53]。

生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，DMI抗性菌株的毒力和產(chǎn)孢量弱于敏感菌株，但菌絲生長速度、孢子萌發(fā)和芽管長度等沒有差異[54-55]。Karaoglanidis等發(fā)現(xiàn)當(dāng)無氟硅唑處理時，DMI抗性和敏感菌株細(xì)胞膜中甾醇組成相同；氟硅唑處理后，C.beticola 脫甲基甾醇（desmethyl sterols）含量降低而齒孔醇（eburicol）、鈍葉醇（obtusifoliol）等含量增加，表明C.beticola抗感菌株的14α-脫甲基化酶活性均受到抑制。而抗性菌株在高濃度的氟硅唑處理時，雖然C-14甲基化甾醇含量增加，但仍能合成C14-甲基化甾醇從而否定了甾醇C-14脫甲基酶缺乏導(dǎo)致抗藥性產(chǎn)生的原因。同時氟硅唑處理C.beticola菌株時，沒有發(fā)現(xiàn)14α-methylfecosterol而排除了14αmethylfecosterol積累導(dǎo)致抗藥性產(chǎn)生的機(jī)制。根據(jù)以上發(fā)現(xiàn)，其推測C.beticola對甾醇脫甲基化酶抑制劑抗性機(jī)制可能是14α-脫甲基化酶過量或細(xì)胞色素P450與藥劑親和性降低[56]。Nikou等首次報道了C.beticola CYP51基因序列，實時熒光定量分析發(fā)現(xiàn)CYP51基因過量表達(dá)導(dǎo)致了C.beticola對DMI類殺菌劑抗藥性的產(chǎn)生，同時發(fā)現(xiàn)高抗菌株的第169位密碼子均發(fā)生了沉默突變，由GAA突變?yōu)镚AC，根據(jù)該沉默突變設(shè)計了PCR-RFLP分子檢測方法，利用限制性內(nèi)切酶BsmAI可區(qū)分C.beticola高抗菌株[57]。

2.5 對甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的抗藥性

甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑如吡唑醚菌酯和肟菌酯具有極佳的保護(hù)和治療活性，能有效地抑制C.beticola孢子萌發(fā)、菌絲生長和孢子產(chǎn)生，離體情況下0.01 μg/mL吡唑醚菌酯和0.1 μg/mL肟菌酯能完全抑制孢子萌發(fā)[58]。研究發(fā)現(xiàn)，甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑防治甜菜褐斑病的效果，肟菌酯>吡唑嘧菌酯>阿米西達(dá)，尤其阿米西達(dá)防治效果僅為中等或較差，但阿米西達(dá)與代森錳鋅、苯醚甲環(huán)唑或氟硅唑等混用效果明顯好于阿米西達(dá)單獨使用，而肟菌酯與代森錳鋅、苯醚甲環(huán)唑或氟硅唑等混用效果與肟菌酯單獨使用沒有明顯差異，但肟菌酯最佳施用期為病害發(fā)生早期[59]。

目前，甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑作為甜菜褐斑病主要防治藥劑之一，在世界各甜菜產(chǎn)國相繼獲得登記，如美國于2002、2003年分別登記批準(zhǔn)肟菌酯和吡唑醚菌酯用于甜菜褐斑病的防治[3]。據(jù)報道，黃瓜白粉菌和霜霉菌［Blumeria(Erysiphe）graminis and Plasmopara viticola］等對甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑產(chǎn)生了抗藥性[60-62]。同時由于C.beticola基因變異大，極易對殺菌劑產(chǎn)生抗藥性，因此必須加強(qiáng)對C.beticola對甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑抗藥性的研究和檢測[63]，通過室內(nèi)紫外線誘導(dǎo)獲得了對吡唑醚菌酯具有抗藥性的甜菜尾孢菌突變菌株，抗性菌株較野生菌株產(chǎn)孢量和致病性下降，但抗藥性可穩(wěn)定遺傳，分析細(xì)胞色素b的cDNA序列發(fā)現(xiàn)，第129位密碼子由TTC突變?yōu)镚TC，編碼的氨基酸由苯丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸，導(dǎo)致C.beticola菌株對吡唑醚菌酯產(chǎn)生中等抗藥性，而第143密碼子由GGT突變?yōu)锳GT，編碼的氨基酸由甘氨酸突變?yōu)榻z氨酸，導(dǎo)致了高抗藥性的產(chǎn)生[63]?；诘?43位密碼子的突變而設(shè)計了allele specific primers-PCR分子檢測抗藥性菌株的方法，為了進(jìn)一步提高檢測靈敏度，建立了實時熒光定量PCR（Real-time PCR）檢測低頻率高抗菌株的方法，但通過對田間樣品的檢測，沒有檢測到高抗性菌株，表明7年前希臘引入甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑防治甜菜褐斑病后，田間至今還沒發(fā)現(xiàn)抗性菌株，說明甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑可持續(xù)用于甜菜褐斑病的防治[64]。但仍需在世界范圍內(nèi)對C.beticola對甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑抗藥性進(jìn)行深入研究和監(jiān)測，避免和有效地延緩抗藥性的產(chǎn)生，同時為治理可能出現(xiàn)的抗藥性建立基礎(chǔ)的理論支持。

3 抗藥性治理

延緩和避免植物病原菌對殺菌劑產(chǎn)生抗藥性是生產(chǎn)中亟待解決的問題，合理有效地施藥及結(jié)合其他病害防治方法，建立科學(xué)的病害管理方案，有利于延緩和避免抗藥性產(chǎn)生，提高病害防治效率，從而保障甜菜生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益。作用機(jī)制不同的殺菌劑混用或交替使用，限制作用機(jī)制類似或相同的殺菌劑在同一個生長季節(jié)的施藥次數(shù)，按藥劑推薦使用濃度，適時施藥和減少用藥次數(shù)可有效地治理病原菌的抗藥性。甜菜褐斑病是一種多循環(huán)病害，C.beticola在一個生長季可發(fā)生多次侵染，田間條件下，孢子形成周期為12d[4]，因此甜菜褐斑病的防治最佳時期為病害發(fā)生初期，當(dāng)田間初現(xiàn)癥狀，病害日侵染率≥7%和相對濕度≥87%或90%時為最佳施藥防治時期[65]，利用甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑如肟菌酯和吡唑醚菌酯能有效地治理C.beticola對苯并咪唑類殺菌劑的抗藥性，降低抗性菌株的頻率[9]，同時結(jié)合抗病品種、輪作和農(nóng)業(yè)措施等措施能減少初侵染源和初侵染，降低殺菌劑使用次數(shù)，可有效地延緩和避免抗藥性的產(chǎn)生。研究發(fā)現(xiàn)，Bacillus subtilis菌株BacB[66]和甜菜褐斑病菌內(nèi)生細(xì)菌多粘芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa）、彎曲芽孢桿菌（Bacillus flexus）、寡養(yǎng)單孢菌（Stenotrophomonas sp.）[67]對甜菜尾孢菌具有一定的防治效果，因此加大生物防治的研究，獲得較好的生防菌株對治理甜菜尾孢菌對殺菌劑的抗藥性具有重要的作用。

4 問題與展望

國內(nèi)關(guān)于C.beticola對殺菌劑抗藥性的研究極少，僅有早期關(guān)于甜菜褐斑病菌對苯并咪唑類殺菌劑的抗藥性頻率、抗性水平、交互抗性和抗性遺傳等報道[32]，對當(dāng)前生產(chǎn)上主要使用新型殺菌劑如DMI類和甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的抗藥性情況的研究處于起步階段。而國外早在2000年就發(fā)現(xiàn)了甜菜褐斑病菌對DMI類殺菌劑的抗藥性[51]，及室內(nèi)得到了對甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑具有抗藥性的菌株[63-64]，因此盡快評估我國不同地區(qū)甜菜褐斑病菌對新型殺菌劑的抗性風(fēng)險，建立其對新型殺菌劑的敏感基線，監(jiān)測抗藥性，探索甜菜褐斑病菌對新型殺菌劑的抗性機(jī)理，并制定合理延緩和避免抗藥性產(chǎn)生的病害管理方案，延長殺菌劑使用壽命，為甜菜生產(chǎn)提供技術(shù)保障。

[1]Cooke D A,Scott R.The sugar beet crop:science into practice[M].London:Chapman and Hall,1993：14-19.

[2]張木清，王華忠，白晨.糖料作物改良與高效育種[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：30.

[3]Secor G A,Rivera V V,Khan M.Monitoring fungicide sensitivity of Cercospora beticola of sugar beet for disease management decisions[J].Plant Disease,2010,94(11)：1272-1282.

[4]Weiland J,Koch G.Sugarbeet leaf spot disease(Cercospora beticola Sacc.)[J].Molecular Plant Pathology,2004,5：157-166.

[5]Shane W,Teng P.Impact of Cercospora leaf spot on root weight,sugar yield,and purity of Beta vulgaris[J].Plant Disease,1992,76：812-820.

[6]Giannopolitis C.Lesions on sugarbeet roots caused by Cercospora beticola[J].Plant Disease Reporter,1978,62：424-427.

[7]Rossi V,Asher M,Holtschulte B,et al.Cercospora leaf spot infection and resistance in sugarbeet[A].Cercospora beticola Sacc biology,agronomic influence and control measures in sugar beet[C],2000：17-48.

[8]Smith G.Differential response of sugarbeet cultivars to Cercospora leaf spot disease[J].Crop Science,1978,18：39-42.

[9]Karaoglanidis G,Bardas G.Control of benzimidazole-and DMI-resistant strains of Cercospora beticola with strobilurin fungicides[J].Plant Disease,2006,90：419-424.

[10]Ludwig R,Thorn G.Chemistry and mode of action of dithiocarbamate fungicides[J].Adv Pest Control Res,1960,3：219.

[11]Gullino M L,Tinivella F,Garibaldi A,et al.Mancozeb： Past,Present,and Future[J].Plant Disease,2010,94：1076-1087.

[12]Stockdale M,Dawson A P,Selwyn M J.Effects of Trialkyltin and Triphenyltin Copounds on Mitochondrial Respiration[J].European Journal of Biochemistry,1970,15(2)：342-351.

[13]Davidse L.Benzimidazole fungicides：mechanism of action and biological impact[J].Annual review of phytopathology,1986,24：43-65.

[14]Davidse L.Benzimidazole fungicides:Mechanism of action and resistance[A].In C.J.Delp(ed.),Fungicide resistance in North America[C].APS Press,St.Paul,Minn，1988：25-27.

[15]BUCHENHAUER H.Mode of action and selectivity of fungicides which interfere with ergosterol biosynthesis[A].Proceedings of the 1977 British Crop Protection Conference-Pests and Diseases[C].British Crop Protection Council,London,1977：699-711

[16]Siegel M.Sterol-inhibiting fungicides:Effects on sterol biosynthesis and sites of action[J].Plant Disease,1981,65：986-989.

[17]Schwinn F J.Ergosterol biosynthesis inhibitors.An overview of their history and contribution to medicine and agriculture[J].Pesticide science,1984,15(1)：40-47.

[18]Koller,W.Antifungal agents with target sites in sterol functions and biosynthesis.In Target Sites of Fungicide Action(Koller,W.,Ed.),CRC Press,Boca Raton,FL，1992：119–206.

[19]Anke T.The antifungal strobilurins and their possible ecological role[J].Canadian journal of botany,1995,73：940-945.

[20]Bartlett D W,Clough J M,Godwin J R,et al.The strobilurin fungicides[J].Pest Management Science,2002,58：649-662.

[21]思彬彬，楊卓.甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑作用機(jī)理研究進(jìn)展[J].世界農(nóng)藥，2007，29（6）：5-9.

[22]Percich J,Nickelson L,Huot C.Field evaluation of various fungicides to control cercospora leaf spot of sugarbeet,caused by benomyl-resistant strains of Cercospora beticola[J].Journal of the American Society of Sugar Beet Technologists,1987,24(1)：32-40.

[23]Bugbee W.Cercospora beticola tolerant to triphenyltin hydroxide[J].Journal of sugar beet research,1995,32：167-174.

[24]Weiland J J,Smith G.A Survey for the prevalence and distribution of Cercospora beticola tolerant to triphenyltin hydroxide and mancozeb and resistant to thiophanate methyl in 1997[R].Sugarbeet Research and Extension Reports,1997.

[25]Weiland J J.A survey for the prevalence and distribution of Cercospora beticola tolerant to triphenyltin hydroxide and mancozeb and resistant to thiophanate methyl in 2000[J].Sugarbeet Research and Extension Reports,2000,31:266-271.

[26]Tumbek A,Ozeren P,Kaya R,et al.Sensitivity of Cercospora beticola populations in Turkey to utriafol,mancozeb,and fentin acetate[J].Turk J Agric For,2011,35：65-71.

[27]Georgopoulos S,Dovas C.Occurrence of Cercospora beticola strains resistant to benzimidazole fungicides in northern Greece[J].Plant Dis Rep,1973,57：321-324.

[28]Ruppel E,Scott P.Strains of Cercospora beticola resistant to benomyl in the USA[J].Plant Dis Rep,1974,58：434-436.

[29]D'Ambra V,Mutto S,Carula G.Sensibilita e toleranza di isolati di Cercospora beticola sensibili e toleranti al benomyl[J].Ind Sacc Ital,1974,1：11-13.

[30]Ruppel E,Burtch L,Jenkins A.Benomyl-Tolerant Strains of Cercospora beticola from Arizona[J].The Journal of the American Society of Sugar Beet Technologists,1976，19（2）：106-107.

[31]Yamaguchi T,Sugimoto T,Aota T,et al.Occurrence and spread of strains of Cercospora beticola Sacc.resistant to thiophanate methyl in Hokkaido,Japan，1975，17：71-79.

[32]黃大昉，王俠，周淑芝.甜菜褐斑病菌對苯并咪唑類殺菌劑抗藥性的研究[J].植物保護(hù)學(xué)報,1982，9（2）：131-136.

[33]Pal V,Mukhopadhyay A.Occurrence of strains of Cercospora beticola resistance to carbendazim(MBC)in India[J].Indian Journal of Mycology and Plant Pathology,1983,13：333-334.

[34]Weiland J J,Halloin J M.Benzimidazole resistance in Cercospora beticola sampled from sugarbeet fields in Michigan,USA[J].Canadian Journal of Plant Pathology,2001,23（1）：78-82.

[35]林杰，劉梅，吳學(xué)宏，等.我國抗感多菌靈甜菜褐斑病菌菌株β-微管蛋白基因的序列分析[A].2011年中國植物病理學(xué)會年會論文集[C].湖北：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2011：622-623.

[36]D'Ambra V,Mutto S,Carula G.Frequency of benomyl-tolerant isolates of Cercospora beticola as a result of field treatments and response of the isolates to triphenyltin acetate[J].Phytopathologische Zeitschrift,1980,97（3）：234-241.

[37]劉勇，葉鐘音，劉經(jīng)芬，等.甜菜褐斑病菌對苯并咪唑類等殺菌劑抗藥性的研究[J].中國糖料，1992（1）：27-33.

[38]Ruppel E,Jenkins A,Burtch L.Persistence of benomyl-tolerant strains of Cercospora beticola in the absence of benomyl[J].Phytopathology,1980,70（1）：25-26.

[39]Ruppel E,Petersen S.Effect of benomyl on In vitro and In vivo biology of benomyl-tolerant strains of Cercospora beticola[J].AMERICAN SOCIETY OF SUGAR BEET,1977,19（3）：233.

[40]Davidson R,Hanson L,Franc G,et al.Analysis of β-tubulin Gene Fragments from Benzimidazole-sensitive and-tolerant Cercospora beticola[J].Journal of Phytopathology,2006,154：321-328.

[41]Obuya J,Hanson L,Stump W,et al.A rapid diagnostic tool for detecting benzhnidazole resistance in Cercospora beticola,the causal agent of Cercospora leaf spot in sugarbeet[R].Phytopathology,2008,98：S115.

[42]Campbell L,Smith G,Lamey H,et al.Cercospora beticola tolerant to triphenyltin hydroxide and resistant to thiophanate methyl in North Dakota and Minnesota[J].Journal of sugar beet research,1998,35（1-2）：29-41.

[43]Karaoglanidis G,Karadimos D,Ioannidis P,et al.Sensitivity of Cercospora beticola populations to fentin-acetate,benomyl and flutriafol in Greece[J].Crop protection,2003,22（5）：735-740.

[44]Giannopolitis C.Occurrence of strains of Cercospora beticola resistant to triphenyltin fungicides in Greece[Sugarbeets][R].Plant Disease Reporter(USA),1978.

[45]CeratoC,Grassi.Toleranceoforgano-tincompoundsamongCercosporabeticolaisolates[J].InformatoreFitopatologico,1983,33：67-69.

[46]Bugbee W.Cercospora beticola strains from sugar beet tolerant to triphenyltin hydroxide and resistant to thiophanate methyl[J].Plant Disease,1996,80：103.

[47]Giannopolitis C,Chrysayi-Tokousbalides M.Biology of triphenyltin-resistant strains of Cercospora beticola from sugar beet[J].Plant Disease,1980,64（10）：940-942.

[48]Karaoglanidis G,Ioannidis P,Thanassoulopoulos C.Changes in sensitivity of Cercospora beticola populations to steroldemethylation-inhibiting fungicides during a 4-year period in northern Greece[J].Plant pathology,2002,51（1）：55-62.

[49]Ioannidis P.Fungicides chemicals and techniques for controlling Cercospora beticola Sacc.In Greece.[C].Proceeding of Mediterranean Committee Meeting of I.I.R.B.Tbessaloniki,Greece,1994：139-151.

[50]Koller W.Fungicide resistance in plant pathogens[Z].CRC handbook of pest management in agriculture,1991,2：679-720.

[51]Karaoglanidis G,Ioannidis P,Thanassoulopoulos C.Reduced sensitivity of Cercospora beticola isolates to sterol-demethylationinhibiting fungicides[J].Plant pathology,2000,49：567-572.

[52]Wolfe M.Dynamics of the pathogen population in relation to fungicide resistance[A].Fungicide Resistance in Crop Protection[C].J Dekker and SG Georgopoulos,eds Centre for Agricultural Publishing and Documentation,Wageningen,the Netherlands,1982：139-148.

[53]Karaoglanidis G,Karadimos D,Ioannidis P.Detection of resistance to sterol demethylation-inhibiting(DMI)fungicides in Cercospora beticola and efficacy of control of resistant and sensitive strains with flutriafol[J].Phytoparasitica,2003,31(4)：373-380.

[54]Henry M J,Trivellas A E.Laboratory-induced fungicide resistance to benzimidazole and azole fungicides in Cercospora beticola[J].Pesticide biochemistry and physiology,1989,35：89-96.

[55]Karaoglanidis G,Thanassoulopoulos C,Ioannidis P.Fitness of Cercospora beticola field isolates¨Cresistant and¨Csensitive to demethylation inhibitor fungicides[J].European journal of plant pathology,2001,107：337-347.

[56]Karaoglanidis G,Menkissoglu-Spiroudi U.Thanassoulopoulos C.Sterol Composition of DMI-Resistant and-Sensitive Field Isolates of Cercospora beticola[J].Journal of Phytopathology,2003,151：431-435.

[57]Nikou D,Malandrakis A,Konstantakaki M,et al.Molecular characterization and detection of overexpressed C-14 alpha demethylase-basedDMIresistanceinCercosporabeticolafieldisolates[J].Pesticidebiochemistryandphysiology,2009,95(1)：18-27.

[58]Karadimos D.,Karaoglanidis G.,Tzavella-Klonari K.Biological activity and physical modes of action of the Qo inhibitor fungicides trifloxystrobin and pyraclostrobin against Cercospora beticola[J].Crop protection,2005,24(1)：23-29.

[59]Anesiadis T,Karaoglanidis G,Tzavella-Klonari K.Protective,curative and eradicant activity of the strobilurin fungicide azoxystrobin against Cercospora beticola and Erysiphe betae[J].Journal of Phytopathology,2003,151(11/12)：647-651.

[60]Ishii H,Fraaije B,Sugiyama T,et al.Occurrence and molecular characterization of strobilurin resistance in cucumber powdery mildew and downy mildew[J].Phytopathology,2001,91(12)：1166-1171.

[61]Sierotzki H,Parisi S,Steinfeld U,et al.Mode of resistance to respiration inhibitors at the cytochrome bc1 enzyme complex of Mycosphaerella fijiensis field isolates[J].Pest Management Science,2000,56(10)：833-841.

[62]Sierotzki H,Wullschleger J,Gisi U.Point mutation in cytochrome b gene conferringresistance to strobilurin fungicides in Erysiphe graminis f.sp.tritici field isolates[J].Pesticide biochemistry and physiology,2000,68(2)：107-112.

[63]Malandrakis A A,Markoglou A N,Nikou D C,et al.Biological and molecular characterization of laboratory mutants of Cercospora beticola resistant to Qo inhibitors[J].European journal of plant pathology,2006,116(2)：155-166.

[64]Malandrakis A A,Markoglou A N,Nikou D C,et al.Molecular diagnostic for detecting the cytochrome b G143S-QoI resistance mutation in Cercospora beticola[J].Pesticide biochemistry and physiology,2011,100(1)：87-92.

[65]Khan J,Del Rio L E,Nelson R,et al.Improving the Cercospora leaf spot management model for sugar beet in Minnesota and North Dakota[J].Plant Disease,2007,91（9）：1105-1108.

[66]Collins D P,Jacobsen B J.Optimizing a Bacillus subtilis isolate for biological control of sugar beet cercospora leaf spot[J].Biological control,2003,26（2）：153-161.

[67]史應(yīng)武，婁愷，李春，等.甜菜褐斑病內(nèi)生拮抗菌的篩選、鑒定及其防效測定[J].植物病理學(xué)報，2009，39（2）：221-224.