脂肪干細(xì)胞在皮膚組織創(chuàng)面修復(fù)中的研究進(jìn)展

劉寧華 楊欣榮 顧建英

（復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院整形外科，＊肝外科，上海 200032）

嚴(yán)重機(jī)械壓榨傷、大面積燒傷后常出現(xiàn)大面積的皮膚組織創(chuàng)面，由于皮膚軟組織大量缺損，深部組織過多暴露，傷口污染嚴(yán)重，導(dǎo)致創(chuàng)面難以愈合。皮瓣或皮片移植術(shù)作為臨床上較為常用的治療手段，雖然其成功率高、費用較低，但由于存在供皮區(qū)組織缺損、瘢痕形成以及疼痛等缺點，從而限制了其臨床應(yīng)用。真皮替代物缺乏血管結(jié)構(gòu)，血管化過程慢，并且缺乏抗感染能力，導(dǎo)致移植成活率較低。目前，干細(xì)胞的應(yīng)用為皮膚組織創(chuàng)面修復(fù)提供了新的方法，表皮干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞（adipose－derived stem cells，ADSCs）等多種干細(xì)胞被選擇作為修復(fù)皮膚組織創(chuàng)面的種子細(xì)胞［1］。其中表皮干細(xì)胞數(shù)目有限，且需損傷皮膚；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源于骨髓，取材困難，術(shù)后不良反應(yīng)較多［2］；脂肪干細(xì)胞作為自我更新和多分化潛能的干細(xì)胞，具有取材方便、來源充足等優(yōu)點，它可以結(jié)合生物相容性支架和細(xì)胞因子，植入皮膚組織缺損處，誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞向皮膚表皮細(xì)胞分化，修復(fù)皮膚組織創(chuàng)面［3］。該技術(shù)可以及時覆蓋創(chuàng)面、減少創(chuàng)面收縮和瘢痕增生，克服了供皮區(qū)出現(xiàn)的組織缺損和疤痕形成等問題，為皮膚組織創(chuàng)面修復(fù)提供了簡單、安全、有效的途徑。

1 ADSCs的分離、培養(yǎng)以及鑒定

ADSCs是從脂肪組織中分離培養(yǎng)的成纖維樣細(xì)胞群，在皮下白色脂肪組織中占細(xì)胞總量的10%～20%。ADSCs可來源于人類、犬、豬、兔、大鼠、小鼠等，其培養(yǎng)方法大同小異。將脂肪組織沖洗數(shù)遍后剪成1 mm3碎片，加入2倍于脂肪體積的0.1%Ⅰ型膠原酶，在37℃恒溫箱中以200 r／min的速度攪拌40～60 min，1200 r／min離心5 min，獲得高密度的細(xì)胞沉淀物，棄去上清液和漂浮的脂肪組織，加磷酸緩沖液（PBS）將細(xì)胞重懸后再次離心，加入10%胎牛血清的DMEM重懸，將細(xì)胞收集培養(yǎng)。24 h后首次換液，以后每2 d換液［3］。研究［4］顯示ADSCs培養(yǎng)對營養(yǎng)成分要求不高，在低血清或無血清的條件下也能正常生長，保持較高的增殖能力，但在體積分?jǐn)?shù)0.5%人血清培養(yǎng)情況下倍增時間為1.86 d，而在無血清情況下倍增時間為5.79 d。人的ADSCs由于獲得方式不同而有所差異，脂肪抽吸術(shù)獲得的干細(xì)胞含量是標(biāo)準(zhǔn)切除術(shù)的1.8倍，并且在成脂肪能力方面，前者是后者的1.6倍［5］。研究［6］顯示ADSCs大部分來源于中胚層，在不同的藥物及化學(xué)誘導(dǎo)劑條件下可以分化成成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等細(xì)胞。有關(guān)ADSCs特異性表面標(biāo)志至今仍無統(tǒng)一認(rèn)識，雖然免疫組化染色和流式細(xì)胞儀檢測等免疫表型的結(jié)果表明，CD9、CD29、CD44、CD49、CD54、CD90、CD105和CD166等呈陽性，而CD50、CD56以及HLA－DR等呈陰性。但有關(guān)ADSCs特異性表面標(biāo)志至今仍無統(tǒng)一認(rèn)識，這種差異可能與細(xì)胞分離、培養(yǎng)和純化方法存在差異有關(guān)。

2 ADSCs參與組織創(chuàng)面修復(fù)的機(jī)制

Gimble等［7］分析 ADSCs細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)，G0～G1期比例為82.1%，S期比例為15.2%，G2～M期比例為2.8%，大部分ADSCs出于靜止階段，只有少數(shù)細(xì)胞處于活躍的增長期，這表明當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥、創(chuàng)傷等應(yīng)激因素時，ADSCs才被激活，發(fā)揮修復(fù)重建的作用。組織受到創(chuàng)傷后，局部血管收縮、血液和細(xì)胞滲出以及血管活性因子激活等誘發(fā)凝血過程，血凝塊提供了供細(xì)胞黏附和遷移的基質(zhì)。創(chuàng)面的早期修復(fù)大致可以分為3個階段：炎癥細(xì)胞的浸潤、肉芽組織的形成和組織創(chuàng)面的修復(fù)重建。

2.1 炎癥細(xì)胞浸潤期 在創(chuàng)面愈合炎癥期的早期，機(jī)體免疫系統(tǒng)被激活引起中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤，并在組織中轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞。這些炎癥細(xì)胞不僅能夠吞噬入侵微生物，而且還能釋放一系列的細(xì)胞因子和生長因子，促進(jìn)創(chuàng)面的修復(fù)，使創(chuàng)面由炎癥期過渡至增殖期。Rehman等［8］利用發(fā)現(xiàn)，人ADSCs在增殖分化的過程中，會分泌大量的細(xì)胞因子和生長因子，從而促進(jìn)創(chuàng)面的早期修復(fù)。Kim等［9］將ADSCs與皮膚成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)ADSCs能通過旁分泌功能影響成纖維細(xì)胞的增殖、膠原合成以及遷移能力。這些細(xì)胞因子的釋放，有利于為機(jī)體建立更好的損傷修復(fù)微環(huán)境，從而促進(jìn)創(chuàng)面的早期修復(fù)［10］。

血小板衍生生長因子（platelet derived growth factor，PDGF）能刺激成纖維細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的分裂增殖。有研究［11］顯示，抽脂術(shù)后的脂肪組織經(jīng)離心得到的中層純化脂肪組織中存在有大量的PDGF－BB、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）等生長因子。VEGF能增加血管通透性，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)血管形成。Lu等［12］將轉(zhuǎn)染VEGF的ADSCs皮下注射入裸鼠，發(fā)現(xiàn)VEGF能顯著提高自體脂肪移植后新生血管的數(shù)量和移植脂肪的存活率。bFGF能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長，它在維持神經(jīng)組織生長發(fā)育過程、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合與組織修復(fù)中起著十分重要的作用。肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）是一種能刺激原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞生長和DNA合成的肝源性因子，具有類似散射因子的功能，可促進(jìn)細(xì)胞擴(kuò)散和遷移。在糖尿病小鼠的模型中，HGF能擴(kuò)大肉芽組織的面積和刺激新生血管生成，它在難治性潰瘍的愈合過程中起重要作用［13］。Zhu等［14］應(yīng)用慢病毒載體轉(zhuǎn)染的方法將人HGF在ADSCs中過表達(dá)，然后將ADSCs由尾靜脈注射入急性心肌梗死的裸鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)HGF通過促進(jìn)血管生成、抗纖維化、抗炎等功能促進(jìn)小鼠左心室功能的重建。胎盤生長因子（placental growth factor，PLGF）可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，抗內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，并能增加血管的通透性。PLGF基因敲除的小鼠出現(xiàn)以新生血管減少為特征的愈合延遲，表示PLGF與傷口愈合過程中新生血管的生成有關(guān)［15］。角化細(xì)胞生長因子（keratinocyte growth factor，KGF）是由皮膚成纖維細(xì)胞合成分泌的促進(jìn)毛發(fā)生長的因子。Peng等［16］發(fā)現(xiàn)，KGF的缺失會導(dǎo)致糖尿病小鼠的創(chuàng)面愈合延遲，并推測糖尿病小鼠的上皮細(xì)胞和間充質(zhì)的相互作用與KGF有關(guān)。轉(zhuǎn)化生長 因 子－β1（Transforming growth factor beta，TGF－β1）可以影響多種細(xì)胞的生長、分化、細(xì)胞凋亡及免疫調(diào)節(jié)等功能。TGF－β1通過吸附嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞至創(chuàng)面處，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)如膠原蛋白、纖黏連蛋白的表達(dá)，并抑制細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的降解，有利于創(chuàng)面的修復(fù)重建。

2.2 肉芽組織形成期 在創(chuàng)面愈合的增殖期，由巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞組成的肉芽組織開始填補(bǔ)創(chuàng)面，隨著肉芽組織逐漸上皮化而完成創(chuàng)面的早期修復(fù)。Kim等［9］將ADSCs與表皮成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)ADSCs能促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖與遷移，并且與ADSCs的細(xì)胞量呈正相關(guān)。此外，ADSCs還能抑制UVB導(dǎo)致的成纖維細(xì)胞的凋亡［17］。創(chuàng)面愈合過程中，由成纖維細(xì)胞合成和分泌的ECM主要為纖維素和纖維黏連蛋白，ECM與細(xì)胞外表面受體相互作用，纖維連接蛋白、膠原等成分為接觸導(dǎo)向提供支架，控制細(xì)胞的黏附和細(xì)胞遷移的方向，促進(jìn)細(xì)胞黏附、遷移和增殖。

2.3 創(chuàng)面修復(fù)重建期 上皮化后，細(xì)胞增殖及新生血管化停止，瘢痕組織開始形成，創(chuàng)面修復(fù)進(jìn)入重塑期，瘢痕基質(zhì)的形成與瘢痕降解最終趨于平衡。疤痕的存在使得創(chuàng)面的機(jī)械性能降低，同時造成了氧和營養(yǎng)物質(zhì)交流的障礙，嚴(yán)重時可能引起受損組織的畸形以及功能障礙。干細(xì)胞在此階段有著重要的作用，由于干細(xì)胞存在多向分化潛能，在機(jī)體損傷時可分化成為成內(nèi)皮細(xì)胞、纖維細(xì)胞以及表皮細(xì)胞，有效地避免疤痕的形成。但是ADSCs向表皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化未有標(biāo)準(zhǔn)方案，現(xiàn)在運用較多的為條件培養(yǎng)基加全反式維甲酸、表皮生長因子或者堿性成纖維細(xì)胞生長因子。Brzoska等［18］發(fā)現(xiàn)，全反式維甲酸可以誘導(dǎo)脂肪源性干細(xì)胞向上皮細(xì)胞分化，蛋白質(zhì)印跡實驗發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)組的角化蛋白18的蛋白表達(dá)顯著升高。

3 影響ADSCs增殖分化的信號通路

ADSCs增殖分化的潛能可能與供體的情況有關(guān)，比如種屬來源、組織部位、年齡、性別、傳代次數(shù)等。低倍鏡下ADSCs呈成纖維細(xì)胞樣生長，胞漿和核仁豐富，呈平行或漩渦樣排列。在胎牛血清的存在條件下傳代培養(yǎng)的ADSCs 2～3d增殖1倍。多次傳代（10～20代）后，細(xì)胞增殖速度并不顯著減慢，在傳代6次后細(xì)胞群體中出現(xiàn)衰老細(xì)胞，第15代細(xì)胞群體中衰老細(xì)胞約占15%。迄今借助蛋白質(zhì)印跡和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)等技術(shù)檢測特定蛋白質(zhì)或者基因在細(xì)胞或組織中的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)激酶（ERK）、PI3K－AKT 以及骨形成發(fā)生蛋白－4（BMP4）等涉及的信號通路傳導(dǎo)系統(tǒng)可能與ADSCs的增殖有關(guān)，Wnt－βcatenin、PI3K－Akt、Notch、P38－MAPK、ERK－MAPK等信號傳導(dǎo)通路可能與ADSCs的定向分化相關(guān)。

在哺乳動物機(jī)體中，轉(zhuǎn)導(dǎo)通路絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）家族中主要存在三條不同的信號傳導(dǎo)通路：ERK、c－Jun氨基末端激酶（JNK）和 P38。其中ERK－MAPK通路主要轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致細(xì)胞分化和增殖的生長因子信號，誘導(dǎo)細(xì)胞增殖。ERK激活的最常見的信號通路是Raf－MEK－ERK，這3種激酶定位于細(xì)胞膜上，通過Ras與其上游被激活的酪氨酸激酶受體相連。激活的ERK可使多種底物發(fā)生磷酸化，發(fā)揮對下游元件的調(diào)節(jié)作用。Jin等［19］發(fā)現(xiàn)淫羊藿甙能誘導(dǎo)老鼠的ADSCs向心肌細(xì)胞分化，并且這種分化功能可以被ERK的抑制劑特異性阻斷，并提出ERK通路可能與ADSCs向心肌細(xì)胞分化有關(guān)。Yu等［20］應(yīng)用旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器為ADSCs的生長提供空間微重力效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)ADSCs向軟骨細(xì)胞分化的過程中有P38－MAPK通路的激活。

Wnt通路是一條比較保守的信號傳導(dǎo)通路，從低等生物果蠅直至高等哺乳動物，其成員都具有高度的同源性。目前認(rèn)為Wnt通路的成員主要包括：細(xì)胞外因子（Wnt）、跨膜受體、胞質(zhì)蛋白（β－catenin）及核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子（TCF）等一系列蛋白。當(dāng)細(xì)胞外因子與受體結(jié)合后，通過一系列胞質(zhì)蛋白的相互作用使β－catenin蛋白在胞質(zhì)內(nèi)累積而進(jìn)入核與轉(zhuǎn)錄因子TCF共同作用，激活靶基因的轉(zhuǎn)錄。從黃豆中提取的異黃酮可以抑制脂肪形成和沉積。有研究［21－22］發(fā)現(xiàn)，異黃酮中的染料木堿和黃豆苷元可以通過Wnt－βcatenin信號通路抑制ADSCs向脂肪細(xì)胞分化。

PI3K是一個復(fù)雜的大家族，其中I型PI3K又分為IA和IB2個亞型，他們分別從酪氨酸激酶連接受體和G蛋白連接受體傳遞信號，其作用是催化磷脂酰肌醇在D3位的磷酸化，將底物3，4－二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2）轉(zhuǎn)化為3，4，5－三磷酸磷脂酰肌醇（PIP3）。PIP3與細(xì)胞內(nèi)含有PH結(jié)構(gòu)域的信號蛋白Akt和PDK1結(jié)合，促使PDK1磷酸化Akt蛋白的Ser308導(dǎo)致Akt的活化。層黏連蛋白－111（Laminin－111）能促進(jìn)軸突再生以及神經(jīng)元干細(xì)胞分化，Park等［23］應(yīng)用特異性抑制劑和RNA干擾技術(shù)發(fā)現(xiàn)Laminin－111是通過PI3K－AKT信號傳導(dǎo)通路促進(jìn)ADSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化。PD508是一種人工合成的多肽凝血酶，在動物實驗中證明能促進(jìn)新生血管的生成和傷口愈合，F(xiàn)reyberg等［24］發(fā)現(xiàn)PD508通過PI3K－AKT信號傳導(dǎo)通路有促進(jìn)ADSCs增殖。

4 ADSCs在修復(fù)皮膚組織創(chuàng)面中的應(yīng)用

當(dāng)機(jī)體遭受嚴(yán)重絞壓傷、燒傷時，如何修復(fù)大面積的皮膚組織創(chuàng)面成為了臨床上亟待解決的難題。皮膚干細(xì)胞存在于正常皮膚的表皮基底層和毛囊中，在創(chuàng)傷等應(yīng)激因素條件下被激活，進(jìn)而修復(fù)組織創(chuàng)面。但是大面積的皮膚缺損造成了皮膚干細(xì)胞的缺失，此時機(jī)體很難通過自身修復(fù)來愈合創(chuàng)面。ADSCs來源于脂肪組織，獲取容易且量大，創(chuàng)傷小，體外培養(yǎng)方便且穩(wěn)定，成為修復(fù)皮膚組織創(chuàng)面的新方法。

ADSCs在脂肪移植的修復(fù)過程中及在脂肪化和血管化中起著重要的作用，它可調(diào)節(jié)周圍組織中生長激素及細(xì)胞因子的釋放，使脂肪組織的再生和凋亡達(dá)到平衡。ADSCs配合應(yīng)用多種可注射支架材料，不僅為ADSCs的生長提供了良好的類ECM樣結(jié)構(gòu)，還有利于組織血管的形成和ASCs向脂肪組織的轉(zhuǎn)歸，提高了脂肪組織的成活率。Yoshimura等［25］對307例采用細(xì)胞輔助吸脂手術(shù)的患者進(jìn)行臨床研究，結(jié)果顯示患者對移植后皮膚的自然紋理、柔軟度、軟組織填充后的塑形等都表示滿意。Kim等［10］報道，ADSCs可以分泌各種皮膚生長因子如bFGF，IGF等，來促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，并具有抗光老化、抗氧化、抗皺、抗紫外輻射等作用。

5 展 望

綜上所述，ADSCs取材容易、供應(yīng)充足、損傷較小，已成為干細(xì)胞研究領(lǐng)域的新熱點，ADSCs分化為表皮細(xì)胞對臨床上解決嚴(yán)重創(chuàng)傷，大面積燒傷患者的皮膚來源緊張問題和促進(jìn)難愈創(chuàng)面的修復(fù)等問題提供了很好的解決方法。但是在廣泛用于臨床之前，仍有許多問題需要解決，如免疫排斥反應(yīng)、向其他組織誘導(dǎo)分化研究等。另外，針對ADSCs的研究大多是在體外或者動物體內(nèi)進(jìn)行，在人體內(nèi)復(fù)雜的各種體液因子調(diào)控下的狀況尚不清楚。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的迅速發(fā)展，促生長分化的各種生物因子以及模擬體內(nèi)微環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)等均將成為研究熱點，這將為ADSCs成為現(xiàn)代表皮細(xì)胞組織工程學(xué)研究的理想種子細(xì)胞并將其最終用于以細(xì)胞為基礎(chǔ)的臨床治療提供前提和保障。

［1］ Gan L，Cao C，Li SR，et al.Promotion effect of stromal cellderived factor 1 on the migration of epidermal stem cells in the healing process of frostbite－wound model ex vivo［J］.Zhonghua shao shang za zhi（Engl），2010，26（3）：212－215.

［2］ Luis NM，Dontu I，Mantle DC，et al.Regulation of human epidermal stem cell proliferation and senescence requires polycomb－dependent and－independent functions of Cbx4［J］.Cell Stem Cell，2011，9（3）：233－246.

［3］ Schaffler A ，Buchler C.Concise review：adipose tissue－derived stromal cells－－basic and clinical implications for novel cell－based therapies［J］.Stem Cells，2007，25（4）：818－827.

［4］ Parker AM，Shang H，Khurgel M，et al.Low serum and serum－free culture of multipotential human adipose stem cells［J］.Cytotherapy，2007，9（7）：637－646.

［5］ Vermette M，Trottier V，Menard V，et al.Production of a new tissue－engineered adipose substitute from human adiposederived stromal cells［J］.Biomaterials，2007，28（18）：2850－2860.

［6］ Baer PC.Adipose－Derived Stem Cells and Their Potential to Differentiate into the Epithelial Lineage［J］.Stem Cells and Development，2011，20（10）：1805－1816.

［7］ Gimble JM，Nuttall ME.Adipose－derived stromal－stem cells（ASC）in regenerative medicine：pharmaceutical applications［J］.Curr Pharm Des，2007，17（4）：332－339.

［8］ Rehman J，D Traktuev J，Merfeld S，et al.Secretion of angiogenic and antiapoptotic factors by human adipose stromal cells［J］.Circulation，2004，109（10）：1292－1298.

［9］ Kim WS，Park BS，Sung JH，et al.Wound healing effect of adipose－derived stem cells：a critical role of secretory factors on human dermal fibroblasts［J］.J Dermatol Sci，2007，48（1）：15－24.

［10］ Kim WS，Park BS，Sung JH.Protective role of adipose－derived stem cells and their soluble factors in photoaging［J］.Arch Dermatol Res，2009，301（5）：329－336.

［11］ Pallua N，Pulsfort AK，Suschek C，et al.Content of the growth factors bFGF，IGF－1，VEGF，and PDGF－BB in freshly harvested lipoaspirate after centrifugation and incubation［J］.Plast Reconstr Surg，2009，123（3）：826－833.

［12］ Lu F，Li J，Gao JH，et al.by using VEGF－transfected adipose－derived stem cells［J］.Plast Reconstr Surg，2009，124（5）：1437－1446.

［13］ Okiyama N，Krasnov PA，Strongin AY，et al.Addition of the collagen binding domain of fibronectin potentiates the biochemical availability of hepatocyte growth factor for cutaneous wound healing［J］.Journal of Dermatological Science，2010，61（3）：215－217.

［14］ Zhu XY，Zhang XZ，Xu L，et al.Transplantation of adipose－derived stem cells overexpressing hHGF into cardiac tissue［J］.Biochem Biophys Res Commun，2009，379（4）：1084－1090.

［15］ Werner S，Grose R.Regulation of wound healing by growth factors and cytokines［J］.Physiol Rev，2003，83（3）：835－870.

［16］ Peng C，Johnson ML，Bilsket JJ，et al.Lack of FGF－7 Further Delays Cutaneous Wound Healing in Diabetic Mice［J］.Plastic and reconstructive surgery，2011，128（6）：673e－684e.

［17］ Kim WS，Park BS，Sung JH.Antiwrinkle effect of adiposederived stem cell：activation of dermal fibroblast by secretory factors［J］.J Dermatol Sci，2009，53（2）：96－102.

［18］ Brzoska M，Geiger H，Gaueret S，et al.Epithelial differentiation of human adipose tissue－derived adult stem cells［J］.Biochem Biophys Res Commun，2005，330（1）：142－150.

［19］ Jin M，Shi S，Zhang Y，et al.Icariin－mediated differentiation of mouse adipose－derived stem cells into cardiomyocytes［J］.Molecular and Cellular Biochemistry，2010，344（1－2）：1－9.

［20］ Yu B，Nelson LJ，Bradnock TJ，et al.Simulated microgravity using a rotary cell culture system promotes chondrogenesis of human adipose－derived mesenchymal stem cells via the p38 MAPK pathway［J］.Biochemical and Biophysical Research Communications，2011，414（2）：412－418.

［21］ Kim MH，Park JS，Seo MS，et al.Genistein and daidzein repress adipogenic differentiation of human adipose tissue－derived mesenchymal stem cells via Wnt－beta－catenin signalling or lipolysis［J］.Cell Proliferation，2010，43（6）：594－605.

［22］ Cardozo AJ，Gomez DE，Argibay PF.Transcriptional characterization of Wnt and Notch signaling pathways in neuronal differentiation of human adipose tissue－derived stem cells［J］.J Mol Neurosci，2011，44（3）：186－194.

［23］ Park SS，Lee YJ，Han HJ，et al.Role of laminin－111in neurotrophin－3 production of canine adipose－derived stem cells：involvement of Akt，mTOR，and p70S6K［J］.J Cell Physiol，2011，226（12）：3251－3260.

［24］ Freyberg S，Song YH，Muehlberg F，et al.Thrombin peptide（TP508）promotes adipose tissue－derived stem cell proliferation via PI3 kinase－Akt pathway［J］.J Vasc Res，2009，46（2）：98－102.

［25］ Yoshimura K，Sato K，Aoi N，et al.Cell－assisted lipotransfer for facial lipoatrophy：Efficacy of clinical use of adiposederived stem cells［J］.Dermatologic Surgery，2008，34（9）：1178－1185.