Rh血型系統(tǒng)新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)診斷及特殊反應(yīng)分析

駱 宏，莫春妍，張潤青，趙 陽，姬艷麗，魏 玲，羅廣平

(廣州血液中心臨床輸血研究所，廣東 廣州 510095)

Rh血型系統(tǒng)新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)診斷及特殊反應(yīng)分析

駱 宏，莫春妍，張潤青，趙 陽，姬艷麗，魏 玲，羅廣平

(廣州血液中心臨床輸血研究所，廣東 廣州 510095)

目的探討Rh血型系統(tǒng)新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)診斷和特殊試驗(yàn)結(jié)果分析。方法收集Rh系統(tǒng)新生兒溶血病標(biāo)本12例，母血標(biāo)本12例，測定其ABO和Rh血型。新生兒標(biāo)本行溶血病3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，新生兒血清、放散液、母血清行不規(guī)則抗體篩選和鑒定實(shí)驗(yàn)，并測定相應(yīng)抗體的效價(jià)。結(jié)果有1例患兒標(biāo)本RhD血型放散前定型為陰性，放散后為陽性；患兒標(biāo)本溶血病3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均陽性；引起溶血病的抗體中，IgG抗-D 9例，IgG抗-E檢出2例，IgG抗-c合并抗-D1例；母血清中的IgG抗-D效價(jià)介于128～2048，IgG抗-E效價(jià)介于64～256；患兒血清中游離的IgG抗-D效價(jià)介于2～512，IgG抗-E效價(jià)介于4～32。結(jié)論直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)和放散實(shí)驗(yàn)對于診斷Rh系統(tǒng)溶血病具有重要意義；特殊反應(yīng)要綜合分析處理，獲取真實(shí)結(jié)果；臨床輸血或換血治療時(shí)，要根據(jù)患兒體內(nèi)的抗體情況進(jìn)行血液選擇。

新生兒溶血??；Rh血型；直接抗人球蛋白試驗(yàn)；放散實(shí)驗(yàn)；輸血

新生兒溶血病 (Hemolytic disease of the newborn，HDN)是臨床引起新生兒病理性黃疸主要原因之一，常因母嬰(胎)血型不合所導(dǎo)致。多見于ABO血型系統(tǒng)和Rh血型系統(tǒng)。其中，Rh血型系統(tǒng)新生兒溶血病伴隨的臨床癥狀較重，治療不及時(shí)?？蓪?dǎo)致新生兒核黃疸的發(fā)生甚至死亡，應(yīng)當(dāng)引起臨床重視。新近我們對12例Rh血型系統(tǒng)新生兒溶血病進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 病例資料 收集2010年9月至2011年5月在本所檢測的Rh新生兒溶血病標(biāo)本12例，其中男性患兒8例，女性患兒4例，患兒年齡最小2d，最大為22d。同時(shí)收集患兒母親血液標(biāo)本12例。

1.2 方法

1.2.1 新生兒溶血病三項(xiàng)實(shí)驗(yàn) 按《中國輸血技術(shù)操作規(guī)程》(血站部分)[1]進(jìn)行直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)、游離抗體檢測、抗體放散實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 血型鑒定 患兒ABO血型采用正定型實(shí)驗(yàn)，母親ABO血型定型采用正定型和反定型，RhD抗原檢測按照常規(guī)血清學(xué)方法進(jìn)行，但對于直抗試驗(yàn)強(qiáng)陽性的特殊標(biāo)本，則根據(jù)美國血庫協(xié)會(huì)技術(shù)操作手冊中的敘述和方法進(jìn)行輕度熱放散試驗(yàn)后，再進(jìn)行RhD抗原檢測實(shí)驗(yàn)[2]。

1.2.3 Rh血型抗原分型 配制1%的紅細(xì)胞懸液，采用Rh血型抗原分型卡對Rh血型系統(tǒng)的C、c、E、e進(jìn)行檢測，所有操作嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

1.2.4 抗體篩選和抗體鑒定 對患兒血清、放散液和產(chǎn)婦血清采用抗體篩選細(xì)胞進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)陽性者進(jìn)一步行抗體鑒定。

1.2.5 抗體效價(jià)檢測 采用倍比稀釋法，以試管中出現(xiàn)凝集強(qiáng)度達(dá)到2+的最后一管稀釋倍數(shù)的倒數(shù)作為本次測定的抗體效價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 母親和患兒血型涵蓋了ABO系統(tǒng)的4種血型抗原和Rh系統(tǒng)的5種抗原。其中，O型母親6例，占所檢測標(biāo)本中的50%；ccdee型母親6例，占50%；O型新生兒7例，占58%。11號患兒標(biāo)本RhD血型在放散前直接定型為陰性，經(jīng)過熱放散處理后，定型為陽性。所有檢測標(biāo)本中，新生兒溶血病三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均為陽性，其中直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)呈陽性(3+～4+)，游離抗體檢測和抗體放散實(shí)驗(yàn)均提示含有ABO血型系統(tǒng)外的不規(guī)則抗體。具體見表1。

2.2 在母親血清、新生兒血清和放散液均檢出了相應(yīng)的不規(guī)則抗體。其中，IgG抗-D檢出9例，占75%；IgG抗-E檢出2例，占16.6%；檢出IgG抗-c合并抗-D1例。母血清中的IgG抗-D效價(jià)介于128～2048，IgG抗-E效價(jià)介于64～256；患兒血清中游離的IgG抗-D效價(jià)介于2～512，IgG抗-E效價(jià)介于4～32。具體資料見表1。

表1 產(chǎn)婦、新生兒血型血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

在新生兒溶血病中，Rh系統(tǒng)引起的溶血病約占14.6%[3]。當(dāng)由父親遺傳給胎兒的Rh抗原恰為母親所缺少時(shí),胎兒紅細(xì)胞通過胎盤進(jìn)入母體可刺激母體產(chǎn)生免疫性Rh抗體,此抗體再通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)使胎兒紅細(xì)胞溶血。在實(shí)驗(yàn)診斷方面，直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)和放散實(shí)驗(yàn)為HDN的確診實(shí)驗(yàn)。Rh系統(tǒng)溶血病直抗實(shí)驗(yàn)陽性率和強(qiáng)度遠(yuǎn)高于ABO溶血病，直抗實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)陽性(3+～4+)，放散實(shí)驗(yàn)陽性，孕婦和患兒ABO同型時(shí)，應(yīng)當(dāng)高度警惕不規(guī)則抗體引發(fā)的溶血病，尤其是IgG抗-D引起的溶血病。本研究中，所有標(biāo)本直抗實(shí)驗(yàn)均為陽性，放散實(shí)驗(yàn)陽性，進(jìn)一步證實(shí)了這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的重要性。

除了單一抗體引發(fā)外，Rh系統(tǒng)的HDN還有合并抗體引起的溶血病，主要是Rh血型系統(tǒng)內(nèi)的合并性抗體或Rh系統(tǒng)合并ABO系統(tǒng)的溶血病。本研究中，有1例多次妊娠的孕婦(G5P1A3),體內(nèi)檢出IgG抗-c合并IgG抗-D，兩者效價(jià)分別為64和2048，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于臨界值，最終導(dǎo)致了死胎和流產(chǎn)。在孕婦和患兒ABO和Rh系統(tǒng)均不同型時(shí)，要注意Rh系統(tǒng)合并ABO系統(tǒng)的溶血病鑒別診斷實(shí)驗(yàn)的要點(diǎn)，防止漏診和誤診的發(fā)生[4]。

在抗體效價(jià)檢測方面，母體血漿中的IgG抗-D效價(jià)大于32、IgG抗-E大于8時(shí)，就有發(fā)生HDN的風(fēng)險(xiǎn)。本研究中，在產(chǎn)后母體血漿中檢測的IgG抗-D效價(jià)最低為128，最高為2048；IgG抗-E最低為64，最高為256，均遠(yuǎn)高于危險(xiǎn)臨界值。檢測結(jié)果也證實(shí)了溶血病的發(fā)生。

在新生兒溶血病檢測中，尤其要注意新生兒Rh血型的定型。本研究中的11號標(biāo)本，母親產(chǎn)前檢查為RhD陰性，體內(nèi)檢出IgG抗-D，效價(jià)達(dá)512，產(chǎn)后效價(jià)為256?；純褐笨箤?shí)驗(yàn)強(qiáng)陽性，血清和釋放液均檢出IgG抗-D，然而試管法定RhD時(shí)卻呈陰性，與前述實(shí)驗(yàn)結(jié)果矛盾。考慮到是因?yàn)榛純杭t細(xì)胞上的D抗原表位已全部被IgG抗-D占位致敏，IgM型單克隆抗體無法再與紅細(xì)胞結(jié)合，導(dǎo)致定型為陰性。將其紅細(xì)胞進(jìn)行熱放散后，再次定型，則出現(xiàn)了2+的凝集反應(yīng)，證實(shí)患兒的真實(shí)血型應(yīng)該是RhD陽性。

臨床治療HDN方面，除了光照療法，還可能涉及輸血或換血，這就牽涉到血液的選擇問題。就單一的Rh抗體所致的HDN而言，若新生兒體內(nèi)還存在致溶血病的游離抗體時(shí)，切不可選擇與新生兒Rh同型的血液，應(yīng)當(dāng)選擇Rh與母血同型、ABO與新生兒同型的洗滌紅細(xì)胞輸注，血漿宜選AB型血漿；若為Rh系統(tǒng)抗體合并ABO系統(tǒng)抗體時(shí)，則應(yīng)該選擇Rh與母血同型的O型洗滌紅細(xì)胞和AB型血漿。

為減少母嬰Rh血型不合引起的新生兒Rh溶血病的發(fā)生,對于既往有不明原因的死胎、流產(chǎn)、新生兒重度黃疸史的孕婦及其丈夫均應(yīng)進(jìn)行ABO、Rh血型檢查，不合者進(jìn)行孕婦血清中的抗體檢測，以期及早發(fā)現(xiàn)新生兒溶血病并為盡早采取相應(yīng)治療措施提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。孕婦體內(nèi)有高效價(jià)抗體者應(yīng)定期監(jiān)測抗體效價(jià)并進(jìn)行相應(yīng)治療，如采用中草藥抑制抗體產(chǎn)生或通過血漿置換使母體抗體效價(jià)降低至適宜范圍,從而盡可能地預(yù)防和降低HDN的發(fā)生[5,6]。

[1]衛(wèi)生部.中國輸血技術(shù)操作規(guī)程(血站部分)[M].天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，1998：79-86.

[2]American Association of Blood Bank.AABB Technical Manual[M].15th edition.USA：AABB,2005:740-743.

[3]薛辛東，杜立中.兒科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：139.

[4]駱 宏，汪傳喜，羅廣平，等.IgG抗-D合并IgG抗-B所致新生兒溶血病的試驗(yàn)診斷[J].中國輸血雜志,2009,22(10):799-801.

[5]閏東河，趙月凱.34例孕產(chǎn)婦Rh抗體免疫血液學(xué)檢查分析[J].中國優(yōu)生與遺傳志,2007,15(9):72.

[6]林甲進(jìn).Rh(D)陰性孕婦產(chǎn)前免疫抗體水平與新生兒溶血病的關(guān)系[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2007,15(12):78.

Experimental diagnosis and special test result analysis for hemolytic disease of newborn of Rhesus blood group

LUO Hong,MO Chunyan,ZHANG Runqing,et al.Institute for Clinical Transfusion Medicine,Guangzhou Blood Center,Guangzhou 510095,China

ObjectiveTo discuss the experimental diagnosis for hemolytic disease of the newborn of Rhesus system and the analysis of special test results.MethodsThe 12 newborn patients'and theirmother's ABO and Rhesus blood group were typed with serologic method after the specimens had been collected.The direct antiglobulin test,free antibody determination test and elution test were done for newborns'specimens.Irregular antibody screen test and identification test were performed with patients'sera,elutions and mothers'sera,and then antibody titrations were determined.ResultsOne patient's Rhesus D serotype was different in pre-and post-elution.Tests for hemolytic disease were positive in all specimen,9 patients were provoked due to anti-D,2 patients due to anti-E,while 1 patient was provoked due to anti-c in combination with anti-D.The anti-D titration were various from 128 to 2048 in mothers'sera while from 2 to 512 in newborns'sera.The anti-E titrations were diverse from 64 to 256 in mothers'sera but from 4 to 32 in newborns'sera.Conclusions The direct antiglobulin test and elution test were important for diagnosing hemolytic disease of the newborn of Rhesus system.Special test results should be analyzed and dealt comprehensively.Irregular antibodies titration should be considered in the blood selection for transfusion or exchange transfusion.

Hemolytic disease of the newborn；Rhesus blood group；Direct antiglobulin test； Elution test；Transfusion

R457.1+1，R556.6+3

A

1674-1129(2012)04-0334-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.04.004

廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目（編號：201102A212001）

駱宏，男，1974年8月出生，畢業(yè)于中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院，醫(yī)學(xué)碩士，主治醫(yī)師，研究方向：血型的分子遺傳機(jī)制。通訊作者：羅廣平