全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價(jià)值

莫鳳明,伍德榮,何玉強(qiáng)

(河池市人民醫(yī)院,廣西 河池547000)

全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價(jià)值

莫鳳明,伍德榮,何玉強(qiáng)

(河池市人民醫(yī)院,廣西 河池547000)

目的探討全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價(jià)值。方法對(duì)2080份疑似地貧患者標(biāo)本應(yīng)用法國公司HYDRASYS全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)進(jìn)行血紅蛋白電泳，檢測(cè)血紅蛋白(Hb)各組成分的含量，同時(shí)采用HbF堿變性試驗(yàn)對(duì)同一標(biāo)本進(jìn)行HbF含量測(cè)定，比較兩種方法的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果在送檢2080例中篩出α地中海貧血表型陽性316例，陽性率15.2%；β地中海貧血表型陽性616例，陽性率29.6%。其它血紅蛋白病6例，陽性率0.3%，經(jīng)基因分析確診α地中海貧血291例，準(zhǔn)確度92.3%，β地中海貧血591例，準(zhǔn)確度95.9%。結(jié)論全自動(dòng)血紅蛋白電泳分析系統(tǒng)電泳區(qū)帶清晰,掃描定量準(zhǔn)確,可以定量檢測(cè)HbA,HbF,HbA2的含量，將地中海貧血進(jìn)行初步分類為α地中海貧血或β地中海貧血，準(zhǔn)確度高，有效地篩查出高危患者，為進(jìn)一步進(jìn)行基因診斷和遺傳咨詢提供基礎(chǔ)。

全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)；血紅蛋白電泳；地中海貧血；篩查

地中海貧血廣泛分布在我國南方地區(qū)，是廣東、廣西及海南等地發(fā)病率最高、被世界衛(wèi)生組織列為危害人類健康的6種常見病之一[1]，目前地貧尚無確切有效的治療方法，重型α地貧多為死胎且孕婦易并發(fā)妊娠高血壓綜合征，重型β地中海貧血?jiǎng)t需要終身依賴輸血，中間型α、β地中海貧血患者多無勞動(dòng)能力或勞動(dòng)能力低下[2]。因此要廣泛開展地貧篩查，特別是孕婦，提高預(yù)防意識(shí)，以便減少地貧兒的出生。為探討全自動(dòng)電泳分析系統(tǒng)在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)將測(cè)定分析報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 資料 2010年6月至2011年5月來就診的疑似地貧患者 (紅細(xì)胞脆性<70%，MCV<80fL或家庭中有地貧攜帶者)共2080例，其中包括新生兒患者92例。

1.2 儀器與試劑 儀器為法國Sebia公司HYDRASYS全自動(dòng)蛋白電泳系統(tǒng)及掃描儀，試劑用該公司生產(chǎn)的配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 血紅蛋白電泳分析 抽取疑似患者靜脈血約2ml,真空采血管肝素鈉抗凝，制備血紅蛋白液，嚴(yán)格按照儀器和試劑盒說明書進(jìn)行點(diǎn)樣、電泳、染色、脫色、烘干，再通過自動(dòng)掃描儀系統(tǒng)掃描分析HB各組分含量，打印出圖譜。

1.3.2 參考區(qū)間 正常參考值成人2.0%≤HbA2≤3.5%并且不出現(xiàn)異常血紅蛋白帶。 如HbA2≤2.0%，或出現(xiàn)異常血紅蛋白帶(HbH、HbBart’s)判斷為α地中海貧血表型陽性；如HbA2>3.5%或出現(xiàn)異常血紅蛋白帶(HbF>2.0%)判斷為β地中海貧血表型陽性。

1.3.3 堿變性試驗(yàn)測(cè)定HbF含量 同時(shí)對(duì)每一分標(biāo)本進(jìn)行堿變性試驗(yàn)。

1.3.4 對(duì)于電泳分析表型陽性者重抽血進(jìn)行地貧基因分析診斷。

2 結(jié)果

2.1 血紅蛋白電泳法2080例中，檢出HbA2<2.0%212例,檢出HbA2>3.5%420例，出現(xiàn)HbH帶44例，檢出HbBart’s帶60例，同時(shí)出現(xiàn)HbH帶和HbBart’s帶 36 例，檢出 HbF>2.0%196 例，HbG2例，HbE4例。按參考區(qū)間標(biāo)準(zhǔn)可判斷出：α地中海貧血表型陽性316例，陽性率為15.2%(316/2080)，β地中海貧血表型陽性616例，陽性率29.6%(616/2080)，見表 1。

表1 2080例地中海貧血血紅蛋白電泳分析結(jié)果

2.2 HbF堿變性試驗(yàn)結(jié)果 2080份標(biāo)本中有203例HbF>2.0%。

2.3 全自動(dòng)電泳法測(cè)HbF量和HbF堿變性試驗(yàn)對(duì)照結(jié)果 全自動(dòng)電泳法有196例HbF>2.0%，HbF堿變性試驗(yàn)有203例HbF>2.0%，符合率達(dá)96.6%。 電泳中HbA2區(qū)帶清晰集中，如HbF增高大于2.0%時(shí)可在HbA2后出現(xiàn)HbF帶，如HbF小于2.0%時(shí)在HbA2后不出現(xiàn)HbF帶，無法定量。取10例代表性結(jié)果進(jìn)行比較，見表2。可見HbF掃描與堿變性試驗(yàn)結(jié)果基本相符。

2.4 地貧基因分析結(jié)果 α地中海貧血表型陽性316例和β地中海貧血表型陽性616例重新抽血進(jìn)行地貧基因分析診斷，檢出地貧者888例，其中α-地中海貧血291例，包括標(biāo)準(zhǔn)型157例、靜止型72例、中間型(HbH 病)44例，HbBart’s胎兒水腫綜合征 2 例，HbBart’s+HbG 2 例，HbBart’s+HbE 4例；β地中海貧血591例，αβ復(fù)合型地中海貧血6例。

2.5 紅蛋白電泳法和地貧基因分析法比較 以基因分析法為標(biāo)準(zhǔn)，血紅蛋白電泳法檢測(cè)α地中海貧血準(zhǔn)確度為92.3%，β地中海貧血準(zhǔn)確度為95.9%。

表2 10例 全自動(dòng)血紅蛋白電泳與HbF堿變性試驗(yàn)結(jié)果比較

3 討論

血紅蛋白是人體紅細(xì)胞的主要蛋白質(zhì)，由血紅素和珠蛋白組成。珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)異常和某些肽鏈合成不足常導(dǎo)致血紅蛋白疾病，前者稱異常血紅蛋白病，后者為地中海貧血。地中海貧血分為α地中海貧血和β地中海貧血,在α地中海貧血中，Bart’s水腫胎兒會(huì)早產(chǎn)夭折，標(biāo)準(zhǔn)型和靜止型患兒在出生3～6個(gè)月后HbBart’s區(qū)帶會(huì)消失，實(shí)際上在出生半年后用電泳法只有檢測(cè)出HbH病。HbH病表現(xiàn)為血紅蛋白電泳中出現(xiàn)HbH區(qū)帶或HbH和HbBart’s區(qū)帶，有些合并有HbCS區(qū)帶。β地中海貧主要表現(xiàn)為HbF、HbA2含量增高[3]。因血紅蛋白疾病可以沒有任何臨床癥狀，所以主要依賴于實(shí)驗(yàn)室檢查來診斷。血紅蛋白的分離和鑒定方法很多，國內(nèi)外普遍采用平均紅細(xì)胞參數(shù)(MCV、MCH、MCHC)、紅細(xì)胞脆性等方法進(jìn)行地貧篩查，但其敏感性和特異性較低，而且部分地貧患者(特別是α地中海貧血標(biāo)準(zhǔn)型)MCV和紅細(xì)胞脆性可以正常，易漏診和誤診，漏診率達(dá)13.23%[4]。目前，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)等分子生物學(xué)技術(shù)主要用于明確診斷α、β地中海貧血，是地中海貧血檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，但是分子生物學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)條件要求高，方法煩瑣，而且檢查費(fèi)用較高，所以不能被廣泛應(yīng)用，特別是基層醫(yī)療單位無法開展。全自動(dòng)電泳法其方法簡便，電泳瓊脂糖膠片易保存，區(qū)帶顏色不容易脫，區(qū)帶清晰，能夠定量檢測(cè)出HbA、HbF、HbA2含量，將地中海貧血進(jìn)行初步分類，同時(shí)還可以篩查出各種異常血紅蛋白，如HbH、HbE、HbG等，可見血紅蛋白電泳法是研究和分析異常血紅蛋白的有效方法，是診斷血紅蛋白分子病不可缺少的手段[5]。本研究分析2080例疑似地中海貧血者的血紅蛋白電泳結(jié)果，以基因分析法為診斷地中海貧血的金標(biāo)準(zhǔn)，全自動(dòng)電泳分析統(tǒng)系篩查的α地中海貧血診斷準(zhǔn)確性為92.3%，而篩查β地中海貧血準(zhǔn)確度為95.9%，與文獻(xiàn)報(bào)道基本相同[6]。這些結(jié)果表明，血紅蛋白電泳法篩查地貧準(zhǔn)確度高，能有效地篩查出高?；颊撸貏e是HbH病和β地中海貧效果最理想，HbH病與基因方法完全符合，β地中海貧準(zhǔn)確度達(dá)95.9%。同時(shí)本次研究還檢出HbG 2例檢出HbE 4例，所以紅蛋白電泳法還可以篩查出異常血紅蛋白病。

血紅蛋白電泳法因支持物的不同而分為濾紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳、毛細(xì)管電泳、高效液相色譜法等。濾紙電泳應(yīng)用最早，但由于其區(qū)帶“拖尾”現(xiàn)象較重，吸附作用和電滲作用較強(qiáng)，而且電泳時(shí)間長、速度慢、分辨率較低，已經(jīng)很少使用。醋酸纖維素薄膜電泳中由于HbA、HbF等電點(diǎn)接近，通常不能分開，而且影響因素較多，要完成好的電泳圖譜仍有一定的難度。毛細(xì)管電泳法及高效液相色譜法是近年來發(fā)展的分離方法，還不能廣泛和深入應(yīng)用。本研究使用的全自動(dòng)瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)的瓊脂糖是由瓊脂分離純化而得，凝膠孔徑較大，對(duì)一般蛋白質(zhì)不起分子篩作用，最大優(yōu)點(diǎn)是幾乎不吸附蛋白質(zhì)，因此電泳斑點(diǎn)幾乎無“拖尾”現(xiàn)象，其區(qū)帶掃描分辨率高，區(qū)帶整齊，重復(fù)性好，這與相關(guān)報(bào)道一致[7]。同時(shí)對(duì)HbF的分辨率也大有提高，高于一般的醋酸纖維薄膜電泳，對(duì)測(cè)HbF含量的準(zhǔn)確度高達(dá)96.6%，可以基本代替HbF堿變性實(shí)驗(yàn)，使Hb分析更簡便、快捷[8]。在HbA2升高的病例中，其HbF堿變性實(shí)驗(yàn)測(cè)定的HbF含量稍高于(2.0%

全自動(dòng)瓊脂糖凝膠電泳分析統(tǒng)系操作簡便快速，電泳、染色、脫色、烘干在1h內(nèi)即可完成，對(duì)HbA2的分辨清晰，區(qū)帶集中。而且其從點(diǎn)樣后到打印出檢驗(yàn)結(jié)果都是用計(jì)算機(jī)控制程序完成，代替了以往的手工操作，也避免了人工操作的某些技術(shù)及客觀條件的誤差。

綜上所述，應(yīng)用全自動(dòng)瓊脂糖凝膠電泳分析統(tǒng)系進(jìn)行電泳分析，區(qū)帶清晰,掃描定量準(zhǔn)確,可以定量檢測(cè)HbA,HbF,HbA2的含量，將地中海貧血進(jìn)行初步分類為α地中海貧血或β地中海貧血，準(zhǔn)確度高，有效地篩查出高?；颊?，為進(jìn)一步進(jìn)行基因診斷和遺傳咨詢提供基礎(chǔ)。但是血紅蛋白電泳是一個(gè)介于篩查和確診的試驗(yàn)，有些情況下還應(yīng)結(jié)合其他篩查方法及臨床表現(xiàn)才能作出診斷，有條件的單位應(yīng)開展基因診斷技術(shù)，以減少地貧漏檢的可能。

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R556.6+1,R446.11+2

B

1674-1129(2012)05-0472-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.05.020