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    核酸檢測(cè)技術(shù)在南昌地區(qū)無償獻(xiàn)血血液篩查中的應(yīng)用

    2012-01-14 11:07:00徐晶
    關(guān)鍵詞:獻(xiàn)血者核酸試劑

    徐晶

    (南昌市血站輸血研究室,江西 南昌330025)

    核酸檢測(cè)技術(shù)在南昌地區(qū)無償獻(xiàn)血血液篩查中的應(yīng)用

    徐晶

    (南昌市血站輸血研究室,江西 南昌330025)

    目的病毒核酸檢測(cè)技術(shù)(Nucleic Acid Technology,NAT)應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液篩查,探討縮短病毒檢測(cè)“窗口期”的檢測(cè)方法,保障臨床輸血安全。方法將2011年9月至2012年5月我站14203例無償獻(xiàn)血標(biāo)本經(jīng)血清學(xué)篩查合格的標(biāo)本進(jìn)行HBV、HCV和HIV三項(xiàng)聯(lián)合NAT檢測(cè),并對(duì)NAT篩查陽(yáng)性標(biāo)本做確證試驗(yàn)。結(jié)果HBsAg、抗HCV、抗HIV ELISA檢測(cè)均為陰性的血液標(biāo)本13843例,NAT共檢出陽(yáng)性25例,陽(yáng)性率為0.18%。其中HIV-DNA檢出1例,HBV-DNA檢出24例。結(jié)論核酸檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液篩查中,有效地縮短了病毒檢出“窗口期”,有力地保障了臨床輸血安全。

    核酸檢測(cè);血液安全;無償獻(xiàn)血

    HBV、HCV和HIV的經(jīng)血傳播一直是國(guó)內(nèi)外輸血領(lǐng)域關(guān)注的熱點(diǎn)之一。雖然通過對(duì)血液進(jìn)行輸血相關(guān)病毒的抗原或抗體的檢測(cè),使輸血傳播疾病的發(fā)生率明顯降低,但輸血傳播疾病仍時(shí)有發(fā)生。近年來發(fā)展的高度敏感、特異的核酸檢測(cè)這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)已在我國(guó)血液篩查方面得到逐步推廣和應(yīng)用,為進(jìn)一步保證輸血安全,提高血液質(zhì)量,我站從2011年9月開始對(duì)所有的無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本進(jìn)行HBV、HCV和HIV的核酸檢測(cè),現(xiàn)將檢測(cè)情況報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來源與處理 2011年9月至2012年5月我站共采集無償獻(xiàn)血者標(biāo)本14203份。采血結(jié)束后立即對(duì)每位獻(xiàn)血者留取3份標(biāo)本:其中2管(帶分離膠EDTA-K2抗凝)用于核酸檢測(cè);另一管(EDTA-K2抗凝)用于血清學(xué)檢測(cè)。所有標(biāo)本保存于2℃~8℃,在4h內(nèi)離心,24h內(nèi)進(jìn)行ELISA和NAT檢測(cè)。

    1.2 儀器 瑞士TECAN Freedom EVO 150全自動(dòng)加樣器,瑞士Hamilton FAME 24/30酶聯(lián)免疫分析儀,羅氏診斷COBAS S-201血液核酸篩查平臺(tái)(Hamilton STAR全自動(dòng)混樣儀、COBAS Ampilprep核酸提取儀、COBAS Taqmen Analyzer核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀)。

    1.3 試劑 核酸檢測(cè)主要試劑為Cobas Taqscreen MPX試劑盒(美國(guó)羅氏公司),ELISA檢測(cè)主要試劑由上??迫A、北京萬泰、廈門新創(chuàng)提供。

    1.4 檢測(cè)方法

    1.4.1 按照國(guó)家《獻(xiàn)血者健康檢查要求》(GB18467-2001)對(duì)血液進(jìn)行常規(guī)的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒抗體、ALT等項(xiàng)目2次檢測(cè),2次檢測(cè)均合格的血液才繼續(xù)進(jìn)行NAT檢測(cè)。

    1.4.2 標(biāo)本混合(Pooling)和檢測(cè) 標(biāo)本實(shí)行6人份混合檢測(cè)模式。每個(gè) pool包含6個(gè)無償獻(xiàn)血者標(biāo)本,每個(gè)標(biāo)本取167μl血漿至標(biāo)記好的pool中,全自動(dòng)混樣儀加樣。采用Cobas Taqscreen MPX檢測(cè)試劑,在全自動(dòng)核酸提取儀中應(yīng)用MGP磁珠分離技術(shù)提取核酸,核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀擴(kuò)增檢測(cè)HBV、HCV、HIV靶序列,在PDM服務(wù)器 (羅氏診斷COBAS S-201系統(tǒng)自帶的服務(wù)器)中自動(dòng)判讀結(jié)果。每個(gè)pool均有內(nèi)部參照品和外部質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控制。有反應(yīng)性pool拆分為6個(gè)組,對(duì)標(biāo)本進(jìn)行單檢,單標(biāo)本檢測(cè)陽(yáng)性判定為NAT陽(yáng)性,單標(biāo)本檢測(cè)陰性判定為NAT陰性。

    1.4.3 NAT有反應(yīng)性標(biāo)本的確證 將NAT檢測(cè)有反應(yīng)性的標(biāo)本送至武漢血液中心作HBV-DNA、HCV-RNA和HIV-RNA的分項(xiàng)確證 (該實(shí)驗(yàn)室已通過驗(yàn)收考核,獲得衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心頒發(fā)的《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收合格證書》)。

    1.4.4 如果NAT檢測(cè)有反應(yīng)性的標(biāo)本確認(rèn)為HIV-RNA陽(yáng)性,將獻(xiàn)血者留樣的血辮再次進(jìn)行ELISA檢測(cè),在其獻(xiàn)血4周后,重新對(duì)該獻(xiàn)血者采樣,并將血樣送南昌市疾病控制中心進(jìn)行HIV蛋白印跡確認(rèn)試驗(yàn)(WB)。

    2 結(jié)果

    2.1 13843份合格血液NAT檢測(cè) 結(jié)果見表1。

    2.2 NAT確認(rèn)HIV-RNA陽(yáng)性獻(xiàn)血員的追蹤檢測(cè)結(jié)果見表2。

    表1 13843例合格血液NAT檢測(cè)結(jié)果

    表2 NAT確認(rèn)HIV-DNA陽(yáng)性獻(xiàn)血員的追蹤檢測(cè)結(jié)果

    3 討論

    自開展核酸檢測(cè)以來,我站從13843份合格血液中共檢出24例HBV-DNA陽(yáng)性血液,陽(yáng)性率約為1/577,遠(yuǎn)高于江西省血液中心報(bào)道的1/2676[1]、青島市中心血站報(bào)道的1/12000[2]、溫州市中心血站報(bào)道的1/5806[3],與武漢血液中心報(bào)道的1/813[4]比較接近,可能是采用相同檢測(cè)儀器和試劑的原因。各地檢出陽(yáng)性率差異較大,究竟是由試劑靈敏度差異造成還是人為操作因素,需要做進(jìn)一步探討。隨著干擾素和核苷類抗病毒藥物的不斷發(fā)展應(yīng)用,病毒不斷變異以逃避宿主的免疫清除,雖然HBsAg ELISA檢測(cè)試劑盒均針對(duì)高度保守區(qū)并增加了位點(diǎn),但仍然不可避免地造成漏檢。

    13843份合格血液中未檢測(cè)出HCV-RNA陽(yáng)性血液,顯然與ELISA試劑靈敏度較高有關(guān)系。廣州血液中心曾對(duì)69份ELISA檢測(cè)抗-HCV抗體雙試劑陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行RIBA和Q-PCR確證,結(jié)果僅有39份HCV-RNA陽(yáng)性(56.5%),而72份單試劑陽(yáng)性的標(biāo)本,Q-PCR結(jié)果均為陰性,RIBA結(jié)果為5份不確定[5]。深圳寶安區(qū)血站報(bào)道HCV殘余風(fēng)險(xiǎn)為l/113639[6],北京血液中心曾聯(lián)合5市進(jìn)行大規(guī)模調(diào)查,報(bào)道HCV殘余風(fēng)險(xiǎn)為l/43517[7],說明在HCV檢測(cè)方面,血清學(xué)篩查有相當(dāng)高的保障,而且ALT篩查對(duì)排除抗-HCV漏檢血液仍有一定的作用。

    13843份合格血液中共檢出1例HIV-RNA陽(yáng)性血液,與其它地區(qū)的報(bào)道基本相當(dāng)[1,4,7],證明核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)有效的堵住了1例HIV窗口期感染的獻(xiàn)血者。

    通過輸血傳播的疾病有20余種,其中最嚴(yán)重的為艾滋病、丙型肝炎、乙型肝炎,這三種病毒的傳播途徑基本一致,主要是通過血液傳播、性傳播和母嬰傳播。所以應(yīng)特別重視采取措施預(yù)防和控制著三大病毒的傳播。當(dāng)前,血清學(xué)檢測(cè)HBsAg、抗HCV、抗HIV陰性不能排除這三種病毒的感染已成為共識(shí),血清中存在病毒DNA(RNA)是診斷病毒感染最直接的依據(jù)。作為一種新型的篩查輸血傳播傳染病因子的檢測(cè)方法,NAT技術(shù)自1993年起已先后被歐美、日本以及我國(guó)香港等近20個(gè)國(guó)家和地區(qū)用來做獻(xiàn)血者血液篩查。目前,輸血安全面臨的主要風(fēng)險(xiǎn)之一就是被篩查病毒的“窗口期”,研究表明,通過NAT檢測(cè),可將輸血傳播HBV、HCV和HIV的酶聯(lián)免疫檢測(cè) “窗口期”分別由原來的 56d、70d 和 22 d 縮短 41d、12d 和 11d[8]。

    也有研究者認(rèn)為,從檢測(cè)靶物質(zhì)分析,ELISA指向抗原/抗體,NAT指向HIV/HCV RNA和HBV DNA,目前還沒有證據(jù)明確顯示病毒感染初期病毒RNA有效增值時(shí)間與抗原/抗體出現(xiàn)時(shí)間之間的關(guān)系,故認(rèn)為兩種方法的檢測(cè)結(jié)果有互補(bǔ)之效,而不是簡(jiǎn)單的重復(fù)。

    綜上所述,NAT技術(shù)用于獻(xiàn)血者血液篩查可以提高輸血安全系數(shù),保護(hù)獻(xiàn)血者資源,保證用血安全,降低輸血所引發(fā)的疾病傳播的可能性。

    [1]苗燕平,何華慶,后平欽.NAT檢測(cè)在血液篩查中的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(3):326.

    [2]吳玉清,郭 建,李金明,等.混合核酸檢測(cè)法篩查HBV窗口期獻(xiàn)血者[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,31(5):566-567.

    [3]陳筱華,林 碧,陳榮倉(cāng),等.無償獻(xiàn)血者HBsAg ELISA篩查陽(yáng)性樣本病毒核酸檢測(cè)的研究[J].中國(guó)輸血雜志,2008,21(6):439-440.

    [4]余 謹(jǐn),畢 昊,陸華新,等.核酸檢測(cè)技術(shù)在酶聯(lián)免疫吸附法漏檢HIV和HBV血樣篩查中的應(yīng)用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(8):964-965.

    [5]戎 霞,許 茹,王 敏,等.廣州地區(qū)無償獻(xiàn)血人群抗-HCV初篩陽(yáng)性結(jié)果的確證分析 [J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,30(8):1967-1968.

    [6]歐陽(yáng)玲,黃建國(guó),謝秀華,等.無償獻(xiàn)血人群HCV感染的檢測(cè)和輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(4):344-346.

    [7]任芙蓉,王憬惺,趙海燕,等.我國(guó)5城市合格獻(xiàn)血者血液HIV及HCV 殘余風(fēng)險(xiǎn)研究[J].中國(guó)輸血雜志,2007,20(6):469-475.

    [8]劉 強(qiáng),錢 榕,彭繼紅,等.病毒核酸檢測(cè)在采供血機(jī)構(gòu)血液篩查中的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(4):375-382.

    R457.1+2

    A

    1674-1129(2012)05-0437-02

    10.3969/j.issn.1674-1129.2012.05.006

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