高效液相色譜法測定復(fù)方蛇補酊劑中蛇床子素的含量*

高培平 苑振亭

(1.泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院，山東 泰安 271000； 2.中國人民解放軍第230醫(yī)院，遼寧 丹東 118000)

蛇床子系傘形科蛇床屬植物蛇床[cnidium monnieri (L.) cuss]的果實[1],為常用中草藥，蛇床子素(osthol)是從中藥蛇床子中提取的主要有效成分之一[2]。蛇床子及其制劑在臨床已應(yīng)用多年，主要用于止癢[3-6]、治療濕疹[7-9]等 。因此我們研制了復(fù)方蛇補酊劑用于治療濕疹，采用HPLC法測定復(fù)方蛇補酊劑中蛇床子素的含量，現(xiàn)介紹如下。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(HTTACHI L-7110)；超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；電子分析天平； T2000P色譜工作站； 蛇床子素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110822-200305)；其余試劑均為色譜純、分析純。

2 方 法

2.1色譜條件 色譜柱：Hypelsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(80︰20)；檢測波長：320 nm；流速：1.0 ml·min-1；進樣量:20 μl；理論塔板數(shù)按蛇床子素計算應(yīng)不低于1000。在上述色譜條件下，蛇床子素與雜質(zhì)峰分離良好。色譜圖見圖1。

2.2對照品溶液 精密稱取蛇床子素對照品適量(相當(dāng)于蛇床子素20 mg)，加流動相制成0.1 mg·ml-1的溶液備用。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液用流動相稀釋制成每1 ml中含1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μg的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，取20 μl進樣測定。

圖1 高效液相色譜圖

A.蛇床子素對照品；B.供試品；C.空白對照(不含蛇床子)

3 結(jié) 果

3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性、最低檢測量(LLOD)和最低定量限(LLOQ) 以濃度C對蛇床子素的峰面積A進行線性回歸，得回歸方程為A = 706242C+7632.3(r=0.9997)。結(jié)果表明，蛇床子素在1.0～5.0 μg·ml-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。最低檢測量(LLOD)和最低定量限(LLOQ)分別是0.2 μg·ml-1和1 μg·ml-1。

3.2回收率與精密度試驗 精密量取對照品溶液適量，分別制成濃度為1.0，3.0，5.0 μg·ml-1的樣品溶液，取20 μl進樣測定，結(jié)果見表1。

表1 回收率和精密度試驗結(jié)果(n = 6)

3.3穩(wěn)定性試驗 取“3.2”項下3.0 μg·ml-1溶液，室溫放置12 h，分別在0，2，4，6，8，12 h進樣20 μl，測定蛇床子素峰面積,RSD為1.36%(n=6)，表明該供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.4樣品測定 精密量取復(fù)方蛇補酊劑適量(約含蛇床子素20 mg)，用流動相定量稀釋制成約含2 μg·ml-1的溶液，搖勻；同法制備蛇床子素對照品溶液，取20 μl注入高液相色譜儀，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

采用HLPC法測定蛇床子素的含量已有報道[10-11]，本實驗采用HPLC方法測定了復(fù)方蛇補酊劑中蛇床子素的含量，方法準(zhǔn)確可靠，操作簡單可行，其它組分不干擾蛇床子素的含量測定，可用于復(fù)方蛇補酊劑中蛇床子素的含量測定。

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